1、作者：鄧家剛，范麗麗，郝二偉，柳俊輝【摘要】 目的探討附子回陽救逆功效的量效關(guān)系，為臨床安全用藥提供客觀實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法制備附子供試藥液，測(cè)定酯型生物堿烏頭堿含量、半數(shù)致死量，篩選附子有效劑量范圍，分別測(cè)定失血性休克大鼠模型平均動(dòng)脈壓(map)、心率(hr)，心動(dòng)過緩小鼠模型hr，統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)繪制量效關(guān)系曲線，線性回歸分析附子不同劑量與相應(yīng)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果附子供試藥液酯型生物堿烏頭堿的含量為0.036 4%，ld50=31.24 g/kg;附子能顯著擴(kuò)張血管升高map，加快hr，在0.56 g/kg劑量范圍內(nèi)，劑量與其升高map作用呈正相關(guān)，在0.54 g/kg劑量范圍內(nèi)，劑量與其加快hr

2、作用呈正相關(guān);附子能顯著對(duì)抗心動(dòng)過緩，在0.722.89 g/kg劑量范圍內(nèi)，劑量與其對(duì)抗普萘洛爾所致心動(dòng)過緩作用呈正相關(guān)。結(jié)論附子回陽救逆功效顯著，且在一定劑量范圍內(nèi)存在量效關(guān)系，一旦超出相應(yīng)劑量范圍動(dòng)物易出現(xiàn)毒性反應(yīng)，影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存活率，提示附子臨證用藥的可能安全范圍為5.5644.44 g/d?！娟P(guān)鍵詞】 附子; 回陽救逆; 量效關(guān)系; 相關(guān)性附子有“回陽救逆第一品藥”之稱，與人參、熟地、大黃并稱為“中藥四維”，是臨床常用的中藥之一。但同時(shí)附子“毒”與“效”的矛盾在臨床實(shí)踐中一直困擾著歷代醫(yī)家，有“最有用而最難用當(dāng)推附子”之說：有醫(yī)家堅(jiān)持“附子大毒，不可用，非用必小”，不可貿(mào)然用之;而另

3、有以“火神派”為代表的醫(yī)家認(rèn)為“附子為百藥之長”，“量小無效”，須重用。目前困惑臨床醫(yī)生的是附子大劑量應(yīng)用有無必要，是否可行。筆者選用附子完成其回陽救逆功效的實(shí)驗(yàn)研究，探討其量效關(guān)系，為臨床安全用藥規(guī)范提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，進(jìn)而為中藥劑量與功效的相關(guān)性研究提供客觀實(shí)證 參考 。 1 材料與儀器1.1 動(dòng)物昆明種小鼠，清潔級(jí)，雌雄兼有，體質(zhì)量(282)g ，(202)g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(scxk桂2003-0003)。sd大鼠，清潔級(jí)，雌雄兼有，體質(zhì)量(25020)g，廣西藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(scxk桂2003-0001)。1.2 藥物附子，購自四川省成都市荷花池藥材市場(chǎng)，經(jīng)廣西中醫(yī)

4、學(xué)院中藥鑒定教研室鑒定為毛茛科植物烏頭aconitmn carlnicadi debx.的子根加工炮制品，采用水煎2次，每次1 h，12乙醇醇沉，減壓濃縮，配置成4 g/ml冰箱保存;烏拉坦：上海試劑三廠;普萘洛爾：湖北華中藥業(yè)有限公司生產(chǎn);氫化可的松注射液：揚(yáng)州制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：5 ml25 mg;肝素鈉注射液：江蘇萬邦深化醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：2 ml12500單位。1.3 儀器醫(yī)用壓力傳感器， 中國 北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所生產(chǎn);bl-410生物機(jī)能系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn);el204 電子 天平，梅特勒-托利多儀器有限公司生產(chǎn);hh-4數(shù)顯恒溫水浴鍋，國華電器有限公司生

5、產(chǎn); lambda系列紫外/可見分光光度計(jì),美國perkinelmer公司生產(chǎn);tgl-16m低溫超速離心機(jī)，湖南塞特湘儀有限公司生產(chǎn)。 2 方法2.1 酯型生物堿烏頭堿的含量測(cè)定附子供試藥物中酯型生物堿含量的測(cè)定方法依中國藥典2005版制定1。2.1.1 對(duì)照品溶液制備精密稱取烏頭堿對(duì)照品20 mg，置于10 ml容量瓶中，用無水乙醇溶液并稀釋至刻度。2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密量取對(duì)照品溶液0.25，0.50，1.0，1.5，2.0 ，2.5 ml，分別置25 ml量瓶中，均無水乙醇使成2.5 ml，各精密加入堿性鹽酸羥胺試液1.5 ml，搖勻，在6065水浴中保溫10 min，放冷，加高

6、氯酸鐵試液13 ml，搖勻，放置5 min，精密加入高氯酸試液8 ml，用高氯酸鐵試液稀釋至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法在520 nm的波長處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.1.3 測(cè)定法精密量取樣品10 ml，低溫蒸干。殘?jiān)尤燃淄? ml使溶解，轉(zhuǎn)入分液漏斗中，用0.05 mol/l硫酸溶液提取3次，每次5 ml，酸液依次用同一三氯甲烷10 ml振搖洗滌，合并酸液，加氨試液調(diào)節(jié)ph值至9，再用三氯甲烷提取3次，每次10 ml。三氯甲烷液依次用同一水20 ml振搖洗滌，合并三氯甲烷液，低溫蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇適量使溶解

7、，轉(zhuǎn)入5 ml量瓶中，用無水乙醇分次洗滌容器，洗滌液并入量瓶中，再加無水乙醇至刻度，搖勻。精密量取上述溶液及無水乙醇空白溶液各2.5 ml，分別置25 ml量瓶中，照“2.1.2”標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，各“各精密加入堿性鹽酸羥胺試液1.5 ml”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中酯型生物堿烏頭堿的重量(g)， 計(jì)算 ，即得。2.2 附子急性毒性實(shí)驗(yàn)2.2.1 預(yù)試驗(yàn)昆明種小鼠20只，體質(zhì)量(202)g，隨機(jī)分成5組，每組4只，選擇5組劑量的中藥附子水煎醇沉液，每只小鼠以0.4 ml樣品溶液進(jìn)行灌胃，觀察小鼠出現(xiàn)中毒反應(yīng)的癥狀并記錄死亡數(shù)，分別找出各樣品dm值(100%死亡量)

8、與dn值(0%死亡率)。2.2.2 正式實(shí)驗(yàn)昆明種小鼠50只，體質(zhì)量(202)g，雌雄各半，按體質(zhì)量和性別隨機(jī)分成5個(gè)組，每組10只，以dm和dn值，根據(jù)分組及劑量比值公式確定組間劑量比值，配成5種濃度，每只0.4 ml灌胃給藥，給藥后觀察7 d，觀察和記錄有無異常反應(yīng)和死亡情況，計(jì)算ld50。2.3 附子劑量對(duì)失血性休克大鼠map和hr的影響2sd大鼠，清潔級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量(25020)g。大鼠稱重，腹腔注射烏拉坦麻醉后，仰臥固定四肢，尾靜脈全身肝素化。接好心電圖ii導(dǎo)聯(lián)，連接bl-410生物機(jī)能系統(tǒng)檢測(cè)hr。大鼠行右頸總動(dòng)脈插管，接換能器以監(jiān)測(cè)map。分離十二指腸以備給藥。在20 min內(nèi)放血至map 3540 mmhg (1 mmhg=0.133 kpa)，穩(wěn)定不再回升即為放血終點(diǎn)，記錄hr值。隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、附子各劑量組，每組10只。于十二指腸分組給藥，對(duì)照組給等量生理鹽水，觀察記錄map值和hr值。2.4 附子劑量對(duì)心動(dòng)過緩小鼠hr的影響3昆明種小鼠，(282)g，心電圖篩選hr為540780次/min用于實(shí)驗(yàn)，雌雄各半，隨機(jī)分為空白組、模型組、附子各劑量給藥組，共8組，每組12只。小鼠灌胃給予普萘洛爾藥液(80 mg/kg)造模。空白對(duì)照組及模型對(duì)照組10 min后腹腔注射生理鹽水(10 ml/kg