1、生物小分子芯片,蛋白質(zhì)芯片,一：蛋白質(zhì)芯片？,蛋白質(zhì)芯片是指將蛋白質(zhì)或多肽固定于支持介質(zhì)表面，用于樣品成分和蛋白質(zhì)之間相互作用的分析，也叫做蛋白質(zhì)微陣列,二：蛋白質(zhì)芯片支持介質(zhì),聚丙烯酰胺膠；聚偏二氟乙烯膜；硝酸纖維素膜，載玻片；硅片；紙；PDMS（聚二甲基硅氧烷）；金。,聚丙烯酰胺膠配方： 3%的丙烯酰胺（丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺=3:1）、40%甘油、0.0002%亞甲基藍(lán)、0.012%TEMED（四甲基乙二胺）,三：作為支持介質(zhì)的條件,（1）與蛋白質(zhì)能發(fā)生物理或化學(xué)上的反應(yīng) （2）要最大限度的保持蛋白質(zhì)的活性 （3）不能或幾乎不與被檢測物發(fā)生相互作用 （4）化學(xué)性質(zhì)相對不活潑,四：蛋白質(zhì)

2、芯片探針,抗原-抗體；酶與底物；mRNA-蛋白質(zhì),凡是能兩兩互補配對的都可以將其中一種固定于支持介質(zhì)上,五：蛋白質(zhì)固定的原理及技術(shù),原理：物理吸附、離子吸附、共價結(jié)合 方法：接觸點制；噴墨點制；無掩膜光刻技術(shù)；噴墨合成；基于掩膜的光刻技術(shù)；微珠芯片；電化學(xué)芯片,六：不同固定方法的優(yōu)缺點,物理吸附不牢固但是對蛋白質(zhì)的活性影響最小 離子吸附較物理吸附要牢固，對蛋白質(zhì)的活性影響較共價結(jié)合小 共價結(jié)合最牢固，但是對蛋白質(zhì)的活性影響最大甚至?xí)?dǎo)致蛋白質(zhì)失活,七：蛋白質(zhì)芯片分析技術(shù),（1）：熒光/同位素檢測技術(shù),（2）：原子力顯微技術(shù),（3）：表面等離子體共振技術(shù),（4）：多光子檢測技術(shù),（5）：表面增強(qiáng)

3、激光解吸附/離子化技術(shù),（6）：基體輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù),八：不同分析方法的對比,熒光同位素檢測技術(shù)：操作簡單；標(biāo)記困難。,原子力顯微技術(shù)：檢測靈敏；樣品用量少；無需標(biāo)記；檢測速度慢；價格昂貴。,表面等離子共振技術(shù)：靈敏度高；樣品用量少；無需標(biāo)記；成本較低；檢測范圍有限。,基體輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)：靈敏度高；檢測速度快；難找到合適的光敏感化學(xué)物；要求較高純度的蛋白質(zhì)；無法進(jìn)行定量檢測,九：蛋白質(zhì)芯片的應(yīng)用,1：醫(yī)學(xué)研究與臨床診斷,2：藥物篩選、測試與新藥開發(fā),3：食品衛(wèi)生安全檢測,Development and application of a fluorescence

4、 protein microarray for detecting serum alpha-fetoprotein in patients with hepatocellular carcinoma,Journal of International Medical Research 2016, Vol. 44(6) 14141423,Microarray preparation,乙醛修飾載玻片甲胎蛋白固定于載玻片（24h;4) 玻片浸泡在200ul blocking 緩沖液中（2h;37)PBS 緩沖液沖洗4次，每次2秒，室溫室溫晾干，4儲藏。,AFP quantification,利用兔子獲

5、得甲胎蛋白的多克隆抗體，標(biāo)記上生物素與玻片反應(yīng)（30min;37）PBS緩沖液沖洗兩次（室溫；5s）熒光標(biāo)記鏈霉親和素試劑反應(yīng)（30min;37)PBS沖洗四次（室溫；5s) 血清樣品與玻片反應(yīng)（30min;37）PBS沖洗四次（室溫；5s),ELISA,50ul AFP蛋白和樣品添加到試劑盒反應(yīng)2h;37 200ul洗脫液洗脫5次添加50ul生物素標(biāo)記的甲胎蛋白抗體（1h,37)添加50ul SP conjugate（30min；37）添加50ul染料（10min；37）50ul反應(yīng)停止液450nm的條件下測定吸光度。,Result,80 ng/ml, 40 ng/ml, 20 ng/ml,10 ng/ml,5 ng/ml, 2.5 ng/ml,1.25 ng/ml,0.0625ng/ml,0.03125 ng/ml,甲胎