1、甘草黃酮高效提取及分離純化研究,小組成員：范雲(yún) 季越 唐靜 李利芹,甘草是豆科蝶形花亞科多年生草本植物，是我國重要的傳統(tǒng)中藥，有著重要的藥理作用和保健功能。本實驗由烏拉爾甘草為原料，探索其黃酮的提取和分離工藝 。 黃酮類化合物泛指兩個苯環(huán)，通過中央三碳相互聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物。現(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明，甘草中黃酮類化合物具有較強的生理活性，具有抗炎、抗病毒、利膽、強心、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛等功效，是一種有效的活性成分，具有許多潛在的藥用價值，如抗腫瘤作用，抗氧化作用，抗菌作用，抗病毒作用，抗心律失常作用，保肝及對消化系統(tǒng)的其它作用。,實驗思路1： 提取提純初步鑒定分離結(jié)構(gòu)測定 實驗思路2： 提取分離純化檢

2、測,甘草中黃酮的提取方法,冷凝回流法 超聲微波協(xié)同提取法 超聲輔助法,黃酮的提取得率受到很多因素的影響，根據(jù)文獻報道及初步實驗，本文選擇提取的料液比，提取時間，提取溫度，乙醇濃度及提取次數(shù)五個因素進行分析,超聲-微波協(xié)同萃取技術(shù),提取時間15 min，料液比130，提取溫度50，提取1次的條件下，考察乙醇濃度為50%，60%，70%，80%，90%時黃酮的提取得率，確定乙醇濃度。,固定乙醇濃度80%,超聲功率50 w，微波頻率2450Hz。,通過以上分析并結(jié)合單因素分析可以確定關(guān)于提取得率的最佳的因素水平組合為：提取時間 15min，料液比 115，提取溫度 50，提取次數(shù) 3 次，在此條件下

3、進行重復實驗，得到平均提取得率為 98.80%，RSD 為 0.31%。,冷凝回流法 固定乙醇濃度為80%。,綜合上述考慮并結(jié)合單因素實驗結(jié)果，選擇 ：提取時間為 90 min，料液比為 115，提取溫度為 70，提取次數(shù) 3 次為最優(yōu)條件，在此條件下平均提取得率為 99.10%，RSD 為 0.61%，重復性較好。,超聲波輔助萃取法 設(shè)定超聲波功率為50 w ，固定乙醇濃度為80% 。,綜合考慮確定最佳提取條件為 A3B2C3D3，即提取時間 60min，料液比 115，提取溫度 70，提取次數(shù) 3 次，在此條件下，甘草總黃酮提取得率為 98.19%，RSD 為 0.92%。,將三種提取工藝

4、進行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在提取得率相近的情況下，超聲-微波萃取法所需的時間大大縮短，顯示超聲微波協(xié)同萃取技術(shù)具有低能耗及高效快速的優(yōu)點，適合于黃酮類化合物的提取。,甘草中黃酮的分離純化方法,大孔吸附樹脂柱層析分離純化甘草黃酮 本實驗采用AB-8型號的大孔吸附樹脂。 裝柱：充分吸脹的樹脂在攪拌下倒入層析柱(801500 mm)中，裝柱后液體必須高于樹脂2040mm。 上樣：將甘草乙醇提取物加適量去離子水稀釋后上樣至經(jīng)過預處理的AB-8大孔吸附樹脂柱，調(diào)節(jié)柱層析流出速度大約15mLmin-1，流出液收集備用。 洗脫：先用去離子水洗脫，再用體積分數(shù)分別為30%、40%、50%和95%的乙醇梯度洗脫，流出

5、液以500 mL/瓶收集。,薄層層析,展開劑的選擇： 通過反復實驗以尋找最合適的展開體系與配比，最后展開劑選用體系：氯仿：甲醇9 1 顯色劑：茴香醛（1%）：硫酸（10%）=11 操作步驟：a.點樣 b.展開 c.顯色 d.測定比移值,甘草中黃酮的檢測,紫外光譜分析 紫外光譜分析可以幫助鑒定黃酮類化合物的類型。以甲醇為參比液，將產(chǎn)物的甲醇溶液在200-400nm范圍內(nèi)進行紫外掃描。 從圖中可以看到，在275nm處有一個強吸收，310nm處有一肩峰，顯示有黃酮類化合物特征吸收，可以初步判定為黃酮類化合物。,顏色反應(yīng),從表 3-10 可以看出，由大孔吸附樹脂提取的粗品，可以和顏色試劑反應(yīng)產(chǎn)生黃酮類

6、化合物特征的顏色，因此可以判斷含有黃酮類化合物。根據(jù)和不同試劑產(chǎn)生的不同的顏色，對照表2-4，可以進一步推斷出，粗品中的黃酮類化合物可能是二氫黃酮（醇）類或黃酮類。,主要結(jié)論,本文以烏拉爾甘草為研究對象，采用不同的提取技術(shù)對其中的有效成分黃酮進行系統(tǒng)的提取，采用柱色譜并結(jié)合沉淀法分離提純甘草黃酮，并應(yīng)用薄層色譜、紫外光譜對產(chǎn)品進行分析鑒定，具體結(jié)論如下： 1利用超聲微波協(xié)同萃取技術(shù)對甘草中的總黃酮進行提取并進行了工藝優(yōu)化，得出最佳工藝條件為：提取時間15min，料液比1:15，提取溫度50，乙醇濃度80%，提取3次，平均提取得率為98.80%。 2利用超聲波輔助萃取法和冷凝回流法提取甘草中總黃酮，并進行工藝優(yōu)化得出最佳工藝條件。同時將這兩種提取方法與超聲-微波協(xié)同萃取法的工藝進行比較，結(jié)果說明了超聲微波協(xié)同萃取技術(shù)是一種高效快速的提取方法，具有提取工藝操作簡便，雜質(zhì)含量小，提取成本較低，節(jié)約能源等優(yōu)點，適合甘草黃酮的提取，前景廣闊。 3將甘草的乙醇提取物先用AB-8大孔吸附樹脂柱處理，獲得黃酮類物質(zhì)，含量為96%以上。,以下是本小組經(jīng)過討論設(shè)計的試驗因素表冷凝回流提