1、正交設(shè)計(jì)優(yōu)化 -細(xì)辛腦明膠微球制備工藝摘要目的：研究 -細(xì)辛腦明膠微球的制備工藝。方法：采用乳化-縮聚法制備 -細(xì)辛腦明膠微球，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化制備工藝，觀察微球形態(tài)、繪制粒徑分布圖。結(jié)果：最優(yōu)工藝微球球形圓整，載藥量為 3.98%，包封率 24.25%。結(jié)論：以明膠為載體制備 -細(xì)辛腦明膠微球，可獲得簡(jiǎn)單快捷微球制備工藝。關(guān)鍵詞：-細(xì)辛腦；明膠微球；制備；正交設(shè)計(jì)Preparation and in vitro release of asarone gelatin microspheresAbstract Objective: To optimize the preparation proc

2、ess of asarone gelatin microspheres. Methods: Asarone gelatin microspheres were prepared by emulsion methods. Preparation process was optimized by an orthogonal test. Microspheres morphology was observed and particle size distribution of microspheres wasplotted. Results: Asarone gelatin microspheres

3、 were regular in its morphology. The drug loading was 3.98, the average encapsulation efficiency was 24.25.Conclusion: With gelatin as the carrier, the optimized preparation conditions of asarone gelatin microspheres were prepared by emulsion methods.Key words asarone; gelatin microspheres; preparat

4、ion; orthogonal test明膠是一類具有獨(dú)特性質(zhì)的天然高分子，由18種氨基酸與肽交聯(lián)形成的直鏈聚合物，明膠作為藥物緩釋制劑具有良好的生物降解性、降解后形成無(wú)毒產(chǎn)物而排出體外，良好的生物相容性與組織相容性1。明膠微球是藥物與其它活性成分溶解或分散在明膠中經(jīng)固化而形成的微小球狀實(shí)體的固體骨架物2，以明膠為材料制成的微球應(yīng)用廣泛，同時(shí)由于明膠相對(duì)白蛋白、聚乳酸、聚乳酸乙醇酸等材料價(jià)廉易得，且可通過(guò)控制交聯(lián)程度實(shí)現(xiàn)不同的降解速度、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。-細(xì)辛腦(-Asarne)是天南星科植物石菖蒲的主要活性成分之一，在臨床上用于肺炎、哮喘和癲癇發(fā)作等方面，有較好的效果3。目前，-細(xì)辛腦的膠

5、囊、片劑和注射液被廣泛應(yīng)用于臨床，但無(wú)論膠囊還是片劑，藥物進(jìn)入人體后血藥濃度都非常低 4。本實(shí)驗(yàn)采用乳化化學(xué)交聯(lián)法制備明膠微球，優(yōu)化微球制備工藝，對(duì)于開發(fā)-細(xì)辛腦新劑型，提高其生物利用度具有重要意義。1 材料UV-9200 紫外分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司)；光學(xué)顯微鏡；800型離心機(jī)（江蘇金壇市華歐實(shí)驗(yàn)儀器廠）；電動(dòng)攪拌器（江蘇省金壇市友聯(lián)儀器研究所）。-細(xì)辛腦(柳州市億康制藥責(zé)任有限公司，批號(hào) 080626)；明膠（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；其他試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 -細(xì)辛腦明膠微球的制備方法根據(jù)乳化縮聚法原理，微球在制備過(guò)程中，首先藥物明膠溶液與油相形成 W/O 型

6、乳劑，再經(jīng)固化等處理方能成球。將按正交表所示，稱取 -細(xì)辛腦分散于明膠溶液中，并加熱至 60左右，攪拌下滴加至 60左右的3含司盤-80 的 100ml 液體石蠟中，乳化 10min 形成 W/O 型乳劑后，立即放入 5左右的冰水浴中，待乳劑溫度降至 10以下，加入 25戊二醛交聯(lián)固化 2h，抽濾，以異丙醇、乙醚分次洗滌，干燥，篩分得黃色粉末狀明膠微球。2.2 微球載藥量和包封率測(cè)定按照本實(shí)驗(yàn)室建立的方法進(jìn)行5，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算藥物含量。按下列公式分別計(jì)算載藥量和包封率。微球載藥量（微球中 -細(xì)辛腦的含量/微球的總重量）100%包封率=（微球中 -細(xì)辛腦重量/所投 -細(xì)辛腦的重量）100%2.

7、3 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化制備工藝在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取影響微球性質(zhì)較顯著的 4 個(gè)因素作為考察對(duì)象，即有明膠的濃度、乳化劑用量、攪拌速度和投料比，以載藥量、包封率的總和為優(yōu)化指標(biāo)，通過(guò) L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選制備工藝。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果如表 1 和表 2 所示。表 1 正交試驗(yàn)的因素和水平表Tab 1 Factors and levels of The orthogonal design of asarone gelatin microspheresComment 微微微微1: mLComment 微微微微2: 即明膠的濃度因素水平A（）明膠濃度B（mL）乳化劑用量C（rmin 1）攪拌速度D（

8、細(xì)辛腦/明膠）投料比41152.06001：12202.58001：1.53253.010001：2表 2 正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)與結(jié)果Tab 2 The orthogonal design and results of asarone calcium alginate microspheres試驗(yàn)號(hào)ABCD載藥量包封率綜合指標(biāo)（S1）/%（S2）/%SS1S2111111.8310.2112.04212222.2616.0318.29313332.1820.1522.33421233.2521.2324.48522313.7317.0820.81623123.6218.1021.72731322.17

9、18.3220.49832132.0520.2022.25933212.8121.3524.16質(zhì)K117.55319.00318.67019.003量K222.33720.45022.31020.167指K322.30022.73721.21023.020標(biāo)R4.7843.7343.6404.017以載藥量與包封率之和（SS1S2）對(duì)微球進(jìn)行評(píng)分，S 值越大越好。5由表 2 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，四個(gè)因素影響順序?yàn)?A B D C，最佳實(shí)驗(yàn)方案為 A2B3C2D3，即明膠濃度為 20，乳化劑用量為 3.0mL，攪拌速度 800rmin 1， 投料比 1：2。按照最優(yōu)工藝制備微球 3 批，載藥量 3

10、.98%，包封率 24.25%，微球制備工藝的重現(xiàn)性良好。2.4微球形態(tài)、粒徑大小和分布取少量最優(yōu)工藝制備所得的微球分散于的水中，采用顯微鏡觀察形態(tài)。參照中國(guó)藥典 2005 年版二部附錄E 的方法，采用顯微計(jì)數(shù)法測(cè)定微球的粒徑，計(jì)數(shù)不少于 500 粒，并繪制粒徑分布圖。肉眼觀察含藥微球?yàn)辄S色粉末。在光學(xué)顯微鏡下觀察，微球呈圓形，表面光滑，顯微圖片見圖 2。最優(yōu)處方工藝制備的微球，粒徑及分布情況見圖 3。Comment 微微微微3: 應(yīng)為 A D B C，請(qǐng)核實(shí)！Comment 微微微微4: 平均載藥量3.98%，平均包封率 24.25% Comment 微微微微5: 中國(guó)藥典 Comment

11、微微微微6: 圖 1Comment 微微微微7: 圖 2 Comment 微微微微8: 圖 1 Comment 微微微微9: 圖 2圖2 -細(xì)辛腦明膠微球光學(xué)顯微圖圖3 細(xì)辛腦明膠微球粒徑分布圖6Fig.2 The microscopy piture of asarone gelatin microspheres Fig.3 The particle size distribution of asarone gelatin microspheCreosmment 微微微微10: Fig.1Comment 微微微微11: Fig.23 討論乳化凝聚法6是在攪拌或超聲等外力作用下，使明膠溶液在油性

12、介質(zhì)中分散、乳化成小液滴，降溫冷卻后固化成微球。司盤作為乳化劑有利于微球制備中 W/O 型乳液的快速形成，通過(guò)調(diào)節(jié)司盤用量可以調(diào)節(jié)微球粒徑大小，使所制得的微球具有符合要求的粒徑大小及分布，且具有較好的光滑圓整度。液體石蠟相對(duì)于其他植物油來(lái)說(shuō)，具有價(jià)格低廉、來(lái)源廣泛、性質(zhì)穩(wěn)定、流動(dòng)性好等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于乳化縮聚法制備微球中，通過(guò)調(diào) 節(jié)石蠟的用量，可以一定程度上控制微球的粒徑及載藥量。本實(shí)驗(yàn)采用乳化-縮聚法制備 -細(xì)辛腦明膠微球，運(yùn)用正交試驗(yàn)篩選最佳處方工藝，考察明膠的濃度、乳化劑用量、攪拌速度和投料比對(duì)工藝的影響，以載藥量、包封率的總和為優(yōu)化指標(biāo)，結(jié)果影響微球制備工藝的順序?yàn)槊髂z的濃度乳化劑用攪

13、拌速度，最佳工藝明膠濃度為 20，乳化 劑用量為 3.0mL，攪拌速度 800rmin1，投料比 1：2。所得微球載藥量 3.98%，包封率 24.25%，結(jié)果證明本法制備工藝穩(wěn)定，各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)良好，操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、安全，便于推廣。參考文獻(xiàn)1國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（第二部）S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005:334.2吳紅，范黎，張慧，等.糖類交聯(lián)明膠微球的制備及其釋藥特性研究J.中國(guó)藥房.2008，19(1):36-39.Comment 微微微微12: 明膠的濃度投料比乳化劑用量攪拌速度73周暉，王東凱.-細(xì)辛腦巴布劑的家兔相對(duì)生物利用度研究J.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2008，25(4)：273-2754吳闖.反相高效液相色譜法測(cè)定人血清中細(xì)辛腦濃度J.中國(guó)藥房，2005，16(2):123-124.5裴世成，伍善廣.紫外分光光度法測(cè)定 -細(xì)辛腦明膠微球的含量J.中國(guó)藥業(yè)，2010，