1、二、抗原、抗體間的主要反應(yīng)(一)凝集反應(yīng)(二)沉淀反應(yīng)（precipitation）（三）補體結(jié)合試驗（CFT）（四）免疫標(biāo)記技術(shù)（放射免疫測定法、酶免疫測定法、免疫熒光技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)）直接凝集試驗 試驗原理 顆粒性抗原在試管內(nèi)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。試驗中先將待測血清（抗體）進行系列倍比稀釋，再加入已知定量抗原，根據(jù)每個血清稀釋度的凝集情況，測定血清中有無相應(yīng) 抗體及其相對含量 。試劑和器材1 抗體 待檢傷寒沙門菌免疫血清，做20倍稀釋。2 抗原 傷寒沙門菌體（O）抗原（7X10*8/ml）。3 生理鹽水，試管，吸管，恒溫水浴箱等。操作方法1 取干燥

2、潔凈的小試管7支，依次編號并做好標(biāo)記。2 加生理鹽水，每支試管各加0.5ml。3 倍比稀釋血清（1:20），取待測血清0.5ml加入到第一管，充分混勻，吸出0.5ml 加入到第2管，混勻后吸出0.5ml 加入第三管，如此連續(xù)稀釋至第6管，混勻后，從第6管取出0.5ml棄去，第7管不加血清，作為抗原對照。至此，16管的血清稀釋倍數(shù)依次是1：40，1：80，1：160，1：320，1：640，1：1280。4 加定量抗原，每管加入傷寒O菌液0.5ml，加入菌液后，各管的血清又稀釋了一倍，故血清最終稀釋度依次為1：80，1：160，1：3201：2560。見下表。5 搖勻，置37度水浴24h,取出觀

3、察結(jié)果或室溫放置過夜，次日觀察結(jié)果。試管凝集法操作步驟試管號1234567生理鹽水(ml)0.50.50.50.50.50.50.5待測血清(ml)0.50.50.50.50.50.5傷寒菌液(ml)0.50.50.50.50.50.50.5血清稀釋度1:801:1601:3201:6401:12801:2560結(jié)果判斷將試管置于有良好光源的黑暗背景下，觀察管底凝集物和上清的濁度，記錄凝集程度，判斷凝集效價。1 先觀察抗原對照管，應(yīng)無凝集現(xiàn)象，管底沉淀物呈圓形，邊緣整齊，輕輕搖動試管，細菌分散均勻混濁。2 凝集程度分五級。“+” 上清液澄清，細菌全部凝集，凝塊全沉于管底。“+” 上清液稍微混濁

4、，大部分細菌凝集?！?” 上清液較混濁，約50%的細菌沉于管底?！?” 上清液混濁，僅少數(shù)細菌凝集。“-” 不凝集，液體混濁度與對照管相同。3 以出現(xiàn)”+”凝集的血清最高稀釋倍數(shù)為該待檢血清的抗體效價。注意事項凝集反應(yīng)只有在抗原抗體比例適當(dāng)時，才能出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)。一般情況下，隨著血清濃度的逐漸稀釋，凝集反應(yīng)越來越弱，但在抗體濃度過高時，反而無凝集現(xiàn)象出現(xiàn)，此為前帶現(xiàn)象。出現(xiàn)該情況時，須加大抗體倍數(shù)重新試驗。試管凝集試驗室半定量試驗，操作簡單，敏感性不高，特異性易受診斷菌影響，不穩(wěn)定，易自凝；如果電解質(zhì)濃度和PH值不適當(dāng)，可產(chǎn)生非特異性凝集，出現(xiàn)假陽性。試驗討論早在1896年，Widal就利

5、用傷寒病人的血清與傷寒桿菌發(fā)生特異性凝集的現(xiàn)象，有效地診斷傷寒病。肥達試驗（Widal test ）是用已知的傷寒，副傷寒沙門菌的O和H抗原，檢測待測血清中有無相應(yīng)的抗體的半定量試管凝集試驗。肥達反應(yīng)是診斷傷寒副傷寒的輔助診斷。其結(jié)果的解釋必須結(jié)合臨床變現(xiàn)和病程,病史,以及地區(qū)流行病學(xué)情況。1900年蘭茨泰納（Landsteriner）在特異性血凝現(xiàn)象的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)了人類血型，并于1930年獲得了諾貝爾獎金。凝集試驗靈敏度高，方法簡便，廣泛應(yīng)用于臨床檢驗。直接凝集臨床上應(yīng)用：傷寒、副傷寒的診斷血型鑒定、輸血時受者與供者之間紅細胞和血清的交互配血試驗。診斷斑疹傷寒，羌蟲病等立克次體病的外斐反應(yīng)（Weil Felix reation）（變形桿菌屬的X1