第五章

黃酮類化合物（Flavonoids）第一節(jié)緒論第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第三節(jié)提取分離方法第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定第五節(jié)結(jié)構(gòu)研究實(shí)例

本章內(nèi)容一、定義：

以前，黃酮類化合物(flavonoids)主要是指基本母核2-苯基色原酮(2-phenyl-chromone)類化合物，

黃酮類化合物是泛指兩個(gè)苯環(huán)通過(guò)三碳相互連接而成的一系列化合物。第一節(jié)概述二、生物合成途徑及分類：第一節(jié)概述桂皮酸－莽草酸途徑查耳酮分類依據(jù)：母核中三碳鏈的氧化程度，三碳鏈?zhǔn)欠癯森h(huán)以及B環(huán)的連接位置C3-位：有OH

黃酮醇

無(wú)OH

黃酮C2－3飽和：二氫黃酮（醇）C3與B環(huán)相連：異黃酮、二氫異黃酮C環(huán)開環(huán)：查耳酮、二氫查爾酮C環(huán)還原：黃烷類其它類型：花色素類、橙酮類（奧弄類）、高異黃酮、山酮類（雙苯吡酮類）第一節(jié)概述雙黃酮類：由兩分子黃酮或兩分子二氫黃酮或一分子黃酮及一份子二氫黃酮以C-C或C-O-C鍵連接而成。另外，還有黃酮木脂類、生物堿黃酮類第一節(jié)概述例第一節(jié)緒論(+)-兒茶素

R1=R2=H，大豆素

OHOOHOHOHOHHH多以苷的形式存在：O-苷和C-苷苷中常見(jiàn)糖的種類：

單糖：D-葡萄糖，D-半乳糖，D-木糖，L-鼠李糖，L-阿拉伯糖，D-葡萄糖醛酸

雙糖：槐糖，龍膽二糖，蕓香糖（Rha1—6Glc），新橙皮糖（Rha1—2Glc）等

三糖：龍膽三糖，槐三糖

?；牵?-乙酰葡萄糖，咖啡?；咸烟堑谝还?jié)緒論三、存在形式1.對(duì)心血管系統(tǒng)的作用

(1)擴(kuò)張冠脈：蘆丁、葛根素黃酮片臨床用于心絞痛、高血壓。

(2)Vip樣作用：橙皮苷可降低血管脆性及異常通透性，用作高血壓輔助治療劑。

(3)抑制血小板聚集作用：抑制ADP、膠原或凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集，從而防止血栓形成。

(4)降低血膽甾醇作用：山楂總黃酮2.抗肝臟毒性作用

水飛薊素為二氫黃酮醇與苯丙素衍生物縮合而成，適用于急慢性肝炎、肝硬化、中毒性肝損傷。第一節(jié)緒論三、黃酮類化合物的藥理作用

3.抗炎作用

黃酮類化合物可抑制脂氧化酶，從而抑制前列腺素的生物合成，達(dá)到抗炎目的。

4.雌性激素樣作用大豆素己烯雌酚

5.抗菌及抗病毒作用黃芩苷：抗菌山奈酚：抗病毒

6.止咳平喘驅(qū)痰作用

7.瀉下作用

8.解痙作用第一節(jié)緒論三、黃酮類化合物的藥理作用第一節(jié)緒論第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第三節(jié)提取分離方法第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定第五節(jié)結(jié)構(gòu)研究實(shí)例

本章內(nèi)容一、一般性狀形態(tài)：多為結(jié)晶，少數(shù)為無(wú)定形粉末。顏色：結(jié)構(gòu)存在交叉共軛體系和助色團(tuán)，因此化合物多有顏色。黃酮（醇）及其苷：呈黃色-灰黃色查耳酮：黃-橙色二氫黃酮（醇）：無(wú)色異黃酮：微黃色花色素可隨著pH值的變化顏色有所不同：

紅色（pH<7），紫色(pH8.5)，藍(lán)色(pH>8.5)第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)溶解度黃酮(醇),查耳酮：二氫黃酮(醇)：花色素：苷元：難溶于水，易溶于乙酸乙酯，乙醚等有機(jī)溶劑中苷：易溶于水、乙醇、甲醇中，糖鏈越長(zhǎng)水溶性越大。第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)水中溶解度增加平面型分子非平面型分子離子二氫黃酮?二、酸堿性酸性：來(lái)源分子中的酚羥基；可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺。酸性強(qiáng)弱的比較：取決于羥基的數(shù)目和位置：

7,4′-OH>7-或4′-OH>一般Ar-OH>5-OH第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)（可用于提取、分離及鑒定工作）來(lái)源：1-位氧原子的未共用電子對(duì)，顯微弱的堿性；可與強(qiáng)酸（如：濃硫酸，鹽酸等）生成（）鹽而溶于酸水中。第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)堿性：三、顯色反應(yīng)（一）還原反應(yīng)（可用于各類化合物的鑒別）HCl-Mg

反應(yīng):

多數(shù)黃酮、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯橙紅—紫紅色，少數(shù)顯紫—藍(lán)色。查耳酮、橙酮、兒茶素類不顯色。異黃酮類一般不顯色。(2)HCl－Zn:

（同HCl-Mg

反應(yīng)）(3)四氫硼鈉（NaBH4)反應(yīng)：NaBH4是對(duì)二氫黃酮（醇）類化合物專屬性較高的一種還原劑。顏色多為橙紅-紫紅第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)三、顯色反應(yīng)（二）金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)中多具有下列結(jié)構(gòu)：可與金屬鹽類試劑產(chǎn)生絡(luò)合反應(yīng):（1）鋯鹽（4）鎂鹽（2）鋁鹽（5）氯化鍶（3）鉛鹽（6）三氯化鐵反應(yīng)（1）鋯鹽（ZrOCl2）-枸櫞酸反應(yīng)：區(qū)分C3-OH和C5-OH第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)

穩(wěn)定性:3-OH，4-酮基絡(luò)合物5-OH，4-酮基絡(luò)合物（僅二氫黃酮醇除外）（2）鋁鹽（3）鉛鹽第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)可用于定性或定量分析Note：

醋酸鉛（中性）：鄰二酚、3-OH和4-酮基或5-OH和4-酮堿式醋酸鉛：一般酚羥基均可（4）鎂鹽二氫黃酮(醇)：顯天藍(lán)色熒光,有5-OH更明顯黃酮(醇)、異黃酮：顯黃~橙、黃~褐色第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)（5）氯化鍶（SrCl2）（三）硼酸顯色反應(yīng)第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)三、顯色反應(yīng)——鑒別5-OH黃酮和2-羥基查耳酮

在無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸存在下，反應(yīng)生成

亮黃色。（四）堿性試劑

NH3蒸氣：顏色加深，可逆；

Na2CO3反應(yīng)不可逆。

1)二氫黃酮遇堿開環(huán)：生成查耳酮，顯橙黃色。

2)黃酮醇：在堿液中先呈黃色，通入空氣后變?yōu)樽厣瑩?jù)此可與其他黃酮區(qū)別。

3)黃酮類有鄰二酚羥基或3，4′-二羥基：在OH-中易氧化，生成由黃色深紅色綠棕色沉淀。第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)三、顯色反應(yīng)(五)Wessely-Moser重排黃酮類6-及8-C-糖苷在常規(guī)酸水解條件下不被水解，但可發(fā)生互變，成為6-和8-C-糖苷的混合物。第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)三、顯色反應(yīng)

HCl-Mg反應(yīng)HCl-Zn反應(yīng)NaBH4反應(yīng)鋯-枸櫞酸反應(yīng)SrCl2反應(yīng)硼酸+草酸反應(yīng)Molish反應(yīng)（+）（+）（-）黃色，加枸櫞酸,褪色（+）（+）黃色（+）第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)練習(xí)：下面的一個(gè)化合物可能發(fā)生的反應(yīng)第一節(jié)緒論第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第三節(jié)提取分離方法第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定第五節(jié)結(jié)構(gòu)研究實(shí)例

本章內(nèi)容一、提取精制

根據(jù)化合物的性質(zhì)，可采取以下提取方法

化合物：極性——溶劑萃取

酸性——堿提酸沉

解離性—離子交換碳粉吸附法第三節(jié)提取分離方法溶劑萃取法：

被分離物質(zhì)與混入的雜質(zhì)性質(zhì)不同，選用不同極性溶劑萃取達(dá)到去雜質(zhì)目的。例如：醇提液用石油醚萃取可除去油脂、蠟、葉綠素；

水提液加醇沉淀可去除蛋白、多糖等水溶性雜質(zhì)。

第三節(jié)提取分離方法

藥材甲醇或乙醇提取，回收醇第三節(jié)提取分離方法2.堿提酸沉法原理：酚羥基與堿成鹽，溶于水；加酸后析出。堿：常用飽和Ca(OH)2水溶液，石灰乳，

5%NaCO3溶液，稀NaOH水溶液等。優(yōu)點(diǎn)：可使含酚羥基化合物成鹽溶解，另一方面可使含COOH的果膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)形成沉淀而除去。注意：堿性不宜過(guò)強(qiáng)，以免破壞黃酮母核；酸化時(shí)，酸性不宜過(guò)強(qiáng)，pH3~4即可，以免形成佯鹽而溶解。第三節(jié)提取分離方法2.堿提酸沉法第三節(jié)提取分離方法3.離子交換原理：酚羥基與堿成鹽，溶于水；采用陰離子交換樹脂交換，加酸后析出，用有機(jī)溶劑回流提取。第三節(jié)提取分離方法4.炭粉吸附法（主要適用于苷類的精制）二、分離

（一）采用各種色譜方法：

1）硅膠色譜：按極性大小分離，主要分離極性小和中等極性的化合物?？捎肅C（柱色譜），PTLC（制備薄層）主要適于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇及高度甲基化（或乙?；┑狞S酮及黃酮醇類。少數(shù)情況下，在加水去活化后也可用于分離極性較大的化合物，如多羥基黃酮醇及其甙類等。

第三節(jié)提取分離方法2）聚酰胺色譜：

原理：聚酰胺分子中具有酰胺羰基，可與酚羥基形成氫鍵，主要依據(jù)與被分離物質(zhì)成氫鍵能力不同進(jìn)行分離。

吸附強(qiáng)度主要取決于：

①黃酮類化合物分子中羥基的數(shù)目與位置以及溶劑；

②黃酮類化合物酚羥基與聚酰胺之間形成氫鍵締合能力的大小。

（形成氫鍵主要指酚羥基，糖部分不參與形成氫鍵）

第三節(jié)提取分離方法其洗脫規(guī)律：（順序先—后）

(1)苷元相同,洗脫先后順序一般是：

三糖苷>雙糖苷>單糖苷>苷元(2)母核上羥基增加，洗脫速度減慢(3)羥基數(shù)目相同,有締合羥基>無(wú)締合羥基(4)不同類型黃酮的洗脫順序：

異黃酮>二氫黃酮（醇）>查耳酮>黃酮>黃酮醇（芳香核、共軛雙鍵多者吸附力強(qiáng)）第三節(jié)提取分離方法第三節(jié)提取分離方法習(xí)題：下列黃酮化合物，

（1）用聚酰胺柱色譜，含水甲醇梯度洗脫，（2）用硅膠柱色譜分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，分別寫出洗脫順序第三節(jié)提取分離方法答案：聚酰胺柱色譜洗脫順序：由先到后

D，E，C，B，A2.用硅膠柱色譜洗脫順序：由先到后

A，B，C，D，E常用型號(hào)：

Sephadex-G（適用于水溶性成分分離）

Sephadex-LH20（可用于親脂性成分分離

）機(jī)理：

分離游離黃酮（苷元）－－靠吸附作用。吸附程度取決于游離酚羥基數(shù)目，苷元的羥基數(shù)越多,越難洗脫。

分離黃酮苷（苷）－－分子篩起主導(dǎo)作用。在洗脫時(shí)，黃酮苷類按分子量由大到小的順序流出柱體。3）葡聚糖凝膠色譜第三節(jié)提取分離方法例：下列化合物，用凝膠柱色譜，含水甲醇洗脫，寫出出柱順序。第三節(jié)提取分離方法1）2）先后順序：A>B>C先后順序：C>A>B應(yīng)用：分離酸性強(qiáng)弱不同的黃酮苷元酸性比較：7,4’-OH>7-或4’-OH>一般OH>5-OH溶于NaHCO3Na2CO3

不同濃度的NaOH樣品乙醚乙醚液依次萃取5%NaHCO35%Na2CO30.2%NaOH4%NaOH分別酸化各部分黃酮第三節(jié)提取分離方法（二）梯度pH萃取法醋酸鉛沉淀法：鄰二酚羥基黃酮＋醋酸鉛沉淀不具有鄰二酚羥基＋堿式醋酸鉛沉淀硼酸沉淀法：鄰二酚羥基＋硼酸絡(luò)合物溶于水，與其它黃酮分離。第三節(jié)提取分離方法（三）利用分子中的特定基團(tuán)習(xí)題：從某植物中分離出四種化合物，其結(jié)構(gòu)如下：試比較四種化合物的酸性，極性大小比較它們的Rf值大小順序：

1）硅膠TLC2）聚酰胺TLCAR1=R2=HBR1=H,R2=RhaCR1=Glc,R2=HDR1=Glc,R2=Rha酸性A>C>B>D極性D>C>B>ARf：A>B>C>DD>B>C>A第三節(jié)提取分離方法第一節(jié)緒論第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第三節(jié)提取分離方法第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定第五節(jié)結(jié)構(gòu)研究實(shí)例

本章內(nèi)容（一）色譜在黃酮類鑒定中的應(yīng)用

第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定1.紙色譜苷元（花色苷元除外）：分配層析。流動(dòng)相：BAW系統(tǒng)。苷：雙向紙層析。第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定第一向第二向第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定Rf與結(jié)構(gòu)的關(guān)系：

（1）水類溶劑展開時(shí)，平面型分子（黃酮、黃酮醇、查耳酮）幾乎停留原點(diǎn)不動(dòng)，非平面型分子（二氫黃酮、二氫查耳酮）Rf較大。

（2）醇性溶劑展開時(shí)，同一類型苷元，羥基越多，Rf越小。（3）醇性溶劑展開時(shí)，苷元相同時(shí)，Rf值大小通常為：苷元>單糖苷>雙糖苷（4）醇性溶劑展開時(shí)，羥基被甲氧基取代，Rf增大。

（5）醇性溶劑展開時(shí)，羥基糖苷化，極性增大，Rf下降。

Note：（2）（3）（4）（5）用酸水展開時(shí)，上述順序顛倒。第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定2.TLC：主要指吸附薄層，常用硅膠TLC，聚酰胺TLC。

硅膠TLC：鑒定弱極性黃酮類化合物。

聚酰胺TLC：分離大多數(shù)黃酮及苷類，適用范圍廣，分離效果好。第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定一、基礎(chǔ)知識(shí)1、紫外光譜（ultravioletspectra）：外層電子能級(jí)躍遷2、紅外光譜（infraredspectra）：分子振動(dòng)與轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷3、核磁共振譜（NMRspectroscopy）：核自旋能級(jí)躍遷4、質(zhì)譜（massspectra）：質(zhì)量裂解1、紫外光譜（ultravioletspectra）：外層電子能級(jí)躍遷肩峰n*第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定2、紅外光譜（infraredspectra）：分子振動(dòng)與轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷2、Nujol法（研糊法、礦物油法）1、第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定GN2-1S5-41H-NMR

500MHz

CD3OD溶劑峰水峰化學(xué)位移積分3、核磁共振譜：核自旋能級(jí)躍遷溶劑峰GN2-1S5-413C-NMR

125MHz

CD3OD第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定4、質(zhì)譜：質(zhì)量裂解ESI-MS正離子質(zhì)譜負(fù)離子質(zhì)譜[M-H]-[2M-H]-[2M+H]+二、紫外光譜法黃酮存在桂皮酰基及苯甲?；M成的交叉共軛系統(tǒng)，在200~400nm間，有兩個(gè)主要的紫外吸收帶A環(huán)苯甲酰系統(tǒng)峰帶II，220~280nmB環(huán)桂皮酰基系統(tǒng)峰帶I，300~400nm共性：

B環(huán)OH增加，峰帶I

紅移，特別是4-OH，紅移大；

A環(huán)OH增加，峰帶II紅移。（一）第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定1.黃酮、黃酮醇類帶I

：黃酮類304~350nm

黃酮醇（3-OH被取代）328~357

黃酮醇（3-OH游離）352~385帶II

：240~285nm*峰帶I和II強(qiáng)度相似nmIII第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定黃酮及黃酮醇類化合物的紫外光譜帶（λMeOHmax，nm）取代基的影響：

帶I：母核上的－OH、-OCH3等供電基，可引起相應(yīng)吸收帶紅移。氧取代程度越高，帶I紅移越大。羥基甲基化或苷化，將引起紫移。

帶II：峰位主要受A-環(huán)氧取代程度的影響，氧取代程度越高，帶II越向紅移。B環(huán)的取代基只影響峰形。如：只有4′-OR時(shí)，為單峰；3′，4′-OR時(shí)，為雙峰。第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定2.查耳酮、橙酮類nmIII

查耳酮

帶I340~390nm(有裂分)帶II220~270nm

橙酮370~430nm(3~4個(gè)峰)*帶I強(qiáng)，帶II次強(qiáng)峰第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定查耳酮一橙酮---異黃酮一二氫黃酮---3.異黃酮、二氫黃酮(醇)類nmIII只有A-環(huán)苯甲酰系統(tǒng)，帶II為主峰帶II：異黃酮245~270nm

二氫黃酮（醇）270~295nm帶I：肩峰*帶I弱，帶II強(qiáng)峰第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）利用診斷試劑，判斷羥基位置1.甲醇鈉（NaOMe）黃酮類化合物上所有酚羥基，均可在NaOMe中成鹽，引起紅移。確定4’-OH黃酮醇類：

a.帶I位移40~60nm,強(qiáng)度不降。示有4’-OH.b.帶I紅移50~60nm,強(qiáng)度下降。示有3-OH,但無(wú)

4’-OH。第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定二氫黃酮（醇）、異黃酮類:a.帶II紅移35~40nm。示有5,7-OH。

b.帶I移至400nm。示無(wú)5-OH。c.320~330nm,有峰，7-OH。d.3,4’-OH,3,3’,4’-OH,3’,4’,5’-OH等,隨時(shí)間延長(zhǎng),

峰衰退.第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定2.醋酸鈉（NaOAc）

NaOAc堿性較NaOMe弱，只能使7-OH，4’-OH解離。由于未熔融的NaOAc中含微量HOAc，限制4’-OH的解離。（二）利用診斷試劑，判斷羥基位置確定7-OH黃酮（醇）：帶II紅移5~20nm，示有7-OH，6,8氧取代時(shí)影響位移幅度。二氫黃酮（醇）：帶II紅移60nm，示有7-OH。帶II紅移35nm，示有5，7-OH。第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定異黃酮：帶II紅移6~20nm，示有

7-OH，。有5,6,7-三OH，6,7,8-三OH或3,3‘,4’-三OH

時(shí)，峰隨時(shí)間衰退。2.醋酸鈉（NaOAc）3.NaOAc/H3BO3

鄰二酚羥基在NaOAc堿性下，可與H3BO3螯合，引起紅移。黃酮（醇）：帶I紅移12~30nm；B環(huán)具鄰二酚羥基。帶II紅移5~10nmA環(huán)具鄰二酚羥基

(除5,6-二OH)。確定鄰二OH第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定異黃酮，二氫黃酮（醇）：帶II紅移10~15nm，A環(huán)具鄰二酚羥基(除5,6-二OH)。4.AlCl3及AlCl3/HCl

AlCl3與引起絡(luò)合。第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定生成鋁絡(luò)合物的穩(wěn)定性順序：

3-OH(黃酮醇)>5-OH(黃酮)>5-OH(二氫黃酮)>鄰二酚OH>3-OH(二氫黃酮醇)第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定鄰二酚OH和二氫黃酮醇的3-OH形成的絡(luò)合物遇酸分解。當(dāng)3-OH與5-OH共存時(shí)，優(yōu)先生成3-OH-4-酮基絡(luò)合物。3-OH或5-OH及鄰二酚OH同時(shí)存在，形成二絡(luò)合物。應(yīng)注意以下規(guī)律：第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定a.AlCl3/HCl與MeOH中光譜比較

相同時(shí)：示無(wú)3-OH或5-OH。

不同時(shí)：帶I紅移33~55nm，示只有5-OH，無(wú)3-OH時(shí)。帶I紅移17~20nm，示有5-OH，且6-氧代；帶I紅移50~60nm，示有5-OH、3-OH；帶I紅移60nm，示只有3-OH時(shí)。3-OH,5-OH4.AlCl3及AlCl3/HCl第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定b.AlCl3/HCl與AlCl3中光譜比較

相同時(shí)：無(wú)鄰二酚羥基；

不同時(shí)：帶I紫移30~40nm，示B環(huán)有鄰二酚羥基；帶I紫移50~60nm，示A，B環(huán)同時(shí)有鄰二酚羥基。第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定練習(xí)：UVmax,nm:MeOH259,266sh,299sh,359NaOMe272,327,410NaOAc271,325,393NaOAc/H3BO3262,298,387AlCl3275,303sh,433AlCl3/HCl271,300,364sh,402某化合物HCl-Mg反應(yīng)（+），Molish反應(yīng)（+），ZrOCl2反應(yīng)黃色，加入枸櫞酸褪色，酸水解檢出Glc。紫外譜圖數(shù)據(jù)如下，試推斷其結(jié)構(gòu)第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定黃酮或3-O-苷I=410-359=51nm，4’-OHII=271-259=12nm,7-OHI=387-359=28nm,B環(huán)有鄰二OHAlCl3/HCl與AlCl3相比，I=402-433=-31nm,B環(huán)有鄰二OHAlCl3/HCl與MeOH相比，I=402-359=43nm,有5-OH，無(wú)3-OH分析：第四節(jié)黃酮類化合物的鑒定與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定1.核磁共振氫譜（1HNMR）A環(huán)質(zhì)子(1).5,7-二OHH-6,85.7~6.9,d,J=2.5HzH-8>H-6三核磁共振法第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定(2).7-OHH-5：7.7~8.2,d,J=8HzH-6：6.4~7.1,dd,J=8and2HzH-8：6.3~7.0,d,J=2HzH-5受C環(huán)C=O的去屏蔽作用而處于低場(chǎng)，化學(xué)位移大。A環(huán)質(zhì)子1.核磁共振氫譜（1HNMR）第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定B環(huán)質(zhì)子4?-OR

2?,6?-H7.1~8.1,d,J=8Hz3?,5?

-H6.5~7.1,d,J=8Hz（兩組峰，每個(gè)峰有兩個(gè)H，AA’BB’系統(tǒng)）第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定3?,4?–二OR

1)黃酮（醇）

H-5’6.7~7.1,d,J=8.5HzH-6’7.9,dd,J=8.5,2.5HzH-2’7.2,d,J=2.5Hz

2)異黃酮，二氫黃酮（醇）

H-2’,5’,6’6.7~7.1m（峰復(fù)雜）B環(huán)質(zhì)子第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定3′,4′,5′-三OR

H-2’,6’

：6.5~7.5R=R′′,為一個(gè)單峰s(2H);RR′′

，間位偶合為兩個(gè)二重峰d(J=2Hz)B環(huán)質(zhì)子第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定C環(huán)質(zhì)子

區(qū)別各類黃酮的主要依據(jù)1)黃酮H-36.3s(常與A環(huán)質(zhì)子重疊)2)異黃酮H-27.6~7.8(用DMSO-d6作溶劑時(shí)為8.5~8.7)第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定3)二氫黃酮(2位為S構(gòu)型)H-25.2,dd,J=11and5HzHa-32.8~3.0,dd,J=17and11HzHe-32.8,dd,J=17and5Hz(

Ha-3>He-3)C環(huán)質(zhì)子第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定

4）二氫黃酮醇H-24.9,d,J=11HzH-34.3,d,J=11Hz(絕對(duì)構(gòu)型用CD或ORD測(cè)定)5）查耳酮H-6.7~7.4,d,J=17HzH-7.3~7.7,d,J=17Hz6）橙酮芐基質(zhì)子6.5~6.7sαβ第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定

1）黃酮苷類化合物上糖的端基質(zhì)子信號(hào)

黃酮醇-3-O-葡萄糖苷

5.70~6.00

黃酮醇-3-O-鼠李糖苷5.00~5.10

黃酮類-7-O-葡萄糖苷4.80~5.20

黃酮類-4’-O-葡萄糖苷黃酮類-5-O-葡萄糖苷黃酮類-6及8-C-糖苷糖上質(zhì)子第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定

2）端基以外的糖上質(zhì)子:3~4,

鼠李糖C5-CH3:0.8~1.2,d,J=6.5Hz其它取代基

CH3CO-

脂肪族乙酰氧基1.65~2.10(確定糖數(shù))

芳香族乙酰氧基2.30~2.50(確定酚羥基數(shù))第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定

2）端基以外的糖上質(zhì)子:3~4,

鼠李糖C5-CH3:0.8~1.2,d,J=6.5Hz其它取代基

CH3CO-

脂肪族乙酰氧基1.65~2.10(確定糖數(shù))

芳香族乙酰氧基2.30~2.50(確定酚羥基數(shù))

第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定CH3O-

甲氧基質(zhì)子信號(hào)一般在：3.50~4.10

可通過(guò)NOE核磁共振技術(shù)及二維技術(shù)確定基位置－OH溶劑一般采用DMSO-d6(無(wú)水)作測(cè)試溶劑5-OH12.40；7-OH10.9；3-OH9.7；4’-OH>10(這些信號(hào)加D2O后消失)其它取代基第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定三核磁共振法2.核磁共振碳譜（13CNMR）根據(jù)C＝O的化學(xué)位移確定黃酮骨架

a.174~184黃酮(醇),異黃酮,橙酮

b.188~197查耳酮,二氫黃酮(醇)第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定黃酮104~112異黃酮122~126黃酮醇136橙酮111~112查耳酮116~130二氫黃酮42~45二氫黃酮醇712.核磁共振碳譜（13CNMR）根據(jù)C-3的化學(xué)位移細(xì)分第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定取代基位移2.核磁共振碳譜（13CNMR）第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定B環(huán)上含氧取代基2.核磁共振碳譜（13CNMR）~155~155146-148~135~145~145第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定例：下列一個(gè)化合物的碳信號(hào)歸屬第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定四、質(zhì)譜（MS）1.電子轟擊質(zhì)譜（EI-MS）苷元：可得到M+，且為基峰；苷：得不到M+，可得苷元碎片，可制備衍生物。2.場(chǎng)解析質(zhì)譜（FD-MS）和快原子轟擊質(zhì)譜（FAB-MS）用于測(cè)定極性較強(qiáng)的苷類化合物，可得到M+

，M++1，M++Na，M++K峰，且給出糖基碎片峰。第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定3.黃酮類化合物苷元的EI-MS裂解途徑途徑I

（RDA裂解）第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定利用A1+和B1+可確定A環(huán)和B環(huán)的取代情況

A1+.B1+.5,7-二羥基黃酮1521025,7,4??-三羥基黃酮(芹菜素)1521185,7-二羥基,4?-甲氧基黃酮(刺槐素)152132第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定途徑-II：黃酮類:途徑-I為主

M+常為基峰,還有[M-28]+,A1+(s),B1+(s),及[A1+H]+,[A1-28]+,B2+,[B2-28]+等。黃酮醇類:主要按途徑-II進(jìn)行

M+常為基峰,碎片離子主要有B2+和[B2-28]+及[A1+H]+,此外還有[M-H]+,[M-15]+等。第四節(jié)黃酮類化合物的檢識(shí)與結(jié)構(gòu)測(cè)定（二）結(jié)構(gòu)測(cè)定第一節(jié)緒論第二節(jié)理化性質(zhì)與顏色反應(yīng)第三節(jié)提取分離方法第四節(jié)結(jié)構(gòu)鑒定第五節(jié)結(jié)構(gòu)研究實(shí)例

本章內(nèi)容

例1：某黃色結(jié)晶I，鹽酸鎂粉反應(yīng)(＋)，Molish反應(yīng)(＋)，F(xiàn)eCl3反應(yīng)(＋)，ZrOCl2反應(yīng)呈黃色，但加入枸櫞酸后黃色褪去。

I的UVnm如下:MeOH252267(sh)346NaOMe261399AlCl3272426AlCl3/HCl260274357385NaOAc254400NaOAc/H3BO3256378

I的1H-NMR(DMSO-d6,TMS)：7.41(1H,dd,J=8,3Hz),6.92(1H,d,J=8Hz),6.70(1H,d,J=3Hz),6.62(1H,d,J=2Hz),6.43(1H,d,J=2Hz),6.38(1H,s),5.05(1H,d,J=7Hz)，其余略。FAB-MS示分子中含一分子葡萄糖,苷元的分子式為C15H10O6,推斷化合物的結(jié)構(gòu)，并寫出推導(dǎo)過(guò)程。

化學(xué)反應(yīng)顯示該化合物為5－羥基黃酮苷，結(jié)合紫外譜