還原糖和總糖的測(cè)定一一3,5-二硝基水楊酸比色法一、材料、主要儀器和試劑1、 材料小麥面粉；精密pH試紙。2、 主要儀器（1）具塞玻璃刻度試管：20mLx11（3）燒杯：100mLx1（5）容量瓶：（1）具塞玻璃刻度試管：20mLx11（3）燒杯：100mLx1（5）容量瓶：100mLx3（7）恒溫水浴鍋（9）離心機(jī)（4）三角瓶：100mLx1（6）刻度吸管：1mLx1；2mLx2；10mLx1（8）沸水?。?0）分光光度計(jì)3、試劑（1） 1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)確稱取80°C烘至恒重的分析純葡萄糖100mg,置于小燒杯中，加少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100mL，混勻，4C冰箱中保存?zhèn)溆?。?） 3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑將6.3gDNS和262mL2MNaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加蒸餾水定容至1000mL，貯于棕色瓶中備用。（3） 碘-碘化鉀溶液：稱取5g碘和10g碘化鉀，溶于100mL蒸餾水中。（4） 酚酞指示劑：稱取0.1g酚酞，溶于250mL70%乙醇中。（5） 6MHC1和6MNaOH各100mL。二、操作步驟制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線取7支20mL具塞刻度試管編號(hào)，按表1分別加入濃度為1mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、蒸餾水和3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑，配成不同葡萄糖含量的反應(yīng)液。表1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作管號(hào)1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（mL）蒸餾水（mL）DNS(mL)葡萄糖含量（mg）光密度值（OD540nm）0021.5010.21.81.50.220.41.61.50.430.61.41.50.640.81.21.50.851.01.01.51.061.20.81.51.2將各管搖勻，在沸水浴中準(zhǔn)確加熱5min，取出，冷卻至室溫，用蒸餾水定容至20mL，加塞后顛倒混勻，在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色。調(diào)波長(zhǎng)540nm，用0號(hào)管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)出1?6

號(hào)管的光密度值。以光密度值為縱坐標(biāo)，葡萄糖含量(mg)為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品中還原糖和總糖的測(cè)定還原糖的提取準(zhǔn)確稱取3.00g食用面粉，放入100mL燒杯中，先用少量蒸餾水調(diào)成糊狀，然后加入50mL蒸餾水，攪勻，置于50°C恒溫水浴中保溫20min，使還原糖浸出。將浸出液(含沉淀)轉(zhuǎn)移到50mL離心管中，于4000r/min下離心5min，沉淀可用20mL蒸餾水洗一次，再離心，將二次離心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測(cè)液?？偺堑乃夂吞崛?zhǔn)確稱取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸餾水及10mL6MHCl，置沸水浴中加熱水解30min(水解是否完全可用碘-碘化鉀溶液檢查)。待三角瓶中的水解液冷卻后，加入1滴酚歐指示劑，用6mol/LNaOH中和至微紅色，用蒸餾水定容在100mL容量瓶中，混勻。將定容后的水解液過(guò)濾，取濾液10mL,移入另一100mL容量瓶中定容，混勻，作為總糖待測(cè)液。顯色和比色計(jì)算出7、8號(hào)管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上分別查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)，取計(jì)算出7、8號(hào)管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上分別查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)，表2樣品還原糖測(cè)定管號(hào)還原糖待測(cè)液(mL)總糖待測(cè)液(mL)蒸餾水(mL)DNS(mL)光密度值(OD540nm)查曲線匍萄糖量(mg)70.51.51.580.51.51.59111.51011三、結(jié)果與計(jì)算:按下式計(jì)算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。