實驗三血涂片的制作和

血細(xì)胞的觀察、

計數(shù)、血型鑒定《普通生物學(xué)》——實驗三血涂片的制作和

血細(xì)胞的觀察、

1實驗?zāi)康恼莆昭科闹谱?，了解各種血細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特點掌握人體微量采血和用血細(xì)胞計數(shù)板進行細(xì)胞直接鏡檢計數(shù)的方法掌握ABO血型的鑒定方法實驗?zāi)康恼莆昭科闹谱?，了解各種血細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特點2材料和用品材料人血或兔血主要用品生物顯微鏡,采血針,雙凹載玻片,血細(xì)胞計數(shù)板紅細(xì)胞稀釋液（氯化鈉、硫酸鈉、氯化高汞）白細(xì)胞稀釋液（冰醋酸、龍膽紫）標(biāo)準(zhǔn)A、B血清瑞氏（Wright）染液材料和用品材料3實驗內(nèi)容與方法

實驗內(nèi)容與方法4（一）ABO血型鑒定1．實驗原理紅細(xì)胞膜上具有血型糖蛋白，作為抗原，也稱為凝集原；ABO血型就是根據(jù)紅細(xì)胞表面抗原來確定的，根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。血清中含有相應(yīng)的特異性抗體稱為凝集素。凝集原和相應(yīng)的凝集素特異性結(jié)合，使紅細(xì)胞凝集成團，進而引起紅細(xì)胞破裂，產(chǎn)生溶血。ABO血型鑒定的原理是利用紅細(xì)胞凝集試驗，將待測血液分別與已知含A抗體和B抗體的標(biāo)準(zhǔn)血清混合，觀察是否發(fā)生凝集現(xiàn)象，判斷待測血液紅細(xì)胞上有何種抗原，由此確定待測血液的血型。（一）ABO血型鑒定1．實驗原理5ABO血型分類ABO血型分類6ABO血型正反定型結(jié)果ABO血型正反定型結(jié)果7（一）ABO血型鑒定2．血型鑒定方法標(biāo)記凹載玻片：左上角寫A，右上角寫B(tài)。分別吸取標(biāo)準(zhǔn)A血清和標(biāo)準(zhǔn)B血清各1滴滴于雙凹載玻片左端和右端。采血針刺破左手無名指尖，待血液出來后，用2支毛細(xì)滴管吸取血液，分別加入到玻片左、右兩側(cè)的血清內(nèi)，并用牙簽攪拌，使標(biāo)準(zhǔn)血清與血液混勻。（切勿混用毛細(xì)滴管和牙簽?。┦殖植ＦD(zhuǎn)動數(shù)次，轉(zhuǎn)動時玻片應(yīng)保持在一個水平面上，然后置室溫下5min后觀察結(jié)果。肉眼觀察：如果外觀略呈花邊狀或鋸齒狀，看上去有沉淀，則多為凝集；如果血滴呈均勻狀態(tài)，邊緣整齊，則多為不凝集。進一步在低倍鏡下觀察：在低倍鏡下，如果觀察到紅細(xì)胞凝集成團，或尚有少數(shù)游離細(xì)胞，則為凝集現(xiàn)象；如果紅細(xì)胞均為游離狀態(tài)，則為不凝集。根據(jù)鏡下所見有無凝集現(xiàn)象判定血型。（一）ABO血型鑒定2．血型鑒定方法8（二）血涂片的制作和血細(xì)胞的觀察1．血涂片的制作用酒精棉球擦拭消毒指尖，用采血針刺破指尖，從采血針眼處擠出綠豆大小血滴，用清潔玻片面的一端輕輕接觸血滴，使血滴附于玻片面上（注意勿觸及皮膚，否則血在玻片上就不能成滴）以左手拿該片的兩端，迅速用右手拿住另一載玻片的一端，在左手載玻片上由前向后接觸血滴，使兩載玻片約成45°角，輕輕移動，使血滴成一直線，然后由前向后推為一均勻的薄片涂片在空氣中干燥后置于染色架上，滴加瑞氏染色液，使涂片被染色液覆蓋染1分鐘后，再加等量的緩沖液于染色液上，浸染約5~8分鐘此時涂片表面呈現(xiàn)一層古銅色用蒸餾水迅速沖洗，見涂片呈粉紅色后，自然晾干（二）血涂片的制作和血細(xì)胞的觀察1．血涂片的制作9血涂片的制作和ppt課件10（二）血涂片的制作和血細(xì)胞的觀察2．血細(xì)胞觀察

制作良好的血涂片厚薄適宜，血膜分布均勻，呈粉紅色。選一厚薄適宜部位置顯微鏡下觀察。先用低倍鏡觀察全片，了解涂片染色、細(xì)胞分布情況，再用油鏡觀察(1)紅細(xì)胞數(shù)量最多，體積小而圓、均勻分布，呈紅色的圓盤狀，邊緣厚，著色較深，中央薄，著色較淺，無細(xì)胞核、細(xì)胞器，胞質(zhì)內(nèi)充滿血紅蛋白。(2)白細(xì)胞白細(xì)胞數(shù)量較紅細(xì)胞數(shù)量少，但胞體大，細(xì)胞核明顯，極易與紅細(xì)胞區(qū)別開。（二）血涂片的制作和血細(xì)胞的觀察2．血細(xì)胞觀察11嗜中性粒細(xì)胞是白細(xì)胞中較多的一種，約占白細(xì)胞總數(shù)50-70%。體積比紅細(xì)胞大，主要的特征是胞質(zhì)中的特殊顆粒細(xì)小，分布均勻，著淡紫紅色。胞核著深紫紅色，一般分3—5葉，葉間以染色質(zhì)絲相連。核分葉的多少與該細(xì)胞年齡有關(guān)，如核為桿狀，則為嗜中性粒細(xì)胞的幼稚型。嗜酸性粒細(xì)胞比中性粒細(xì)胞略大，數(shù)量少，約占7%以下。核常分兩葉，著紫藍色。主要特點是胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大、圓形的顆粒，色鮮紅或桔紅。嗜堿性粒細(xì)胞數(shù)量很少，約占1%以下。在一般血涂片上不易找到，體積比上述2種白細(xì)胞稍小。胞質(zhì)中分散著許多大小不一的深紫藍色顆粒。胞核形狀不定,圓形或分葉，也染成紫色，但染色略淺，一般都被顆粒遮蓋，形狀不清。嗜中性粒細(xì)胞是白細(xì)胞中較多的一種，約占白細(xì)胞總數(shù)50-712淋巴細(xì)胞數(shù)量較多，約占20%-40%，可見中、小型，淋巴細(xì)胞。其中小淋巴細(xì)胞最多,略大于紅細(xì)胞。核大而圓,幾乎占據(jù)整個細(xì)胞，染成深藍紫色。胞質(zhì)極少，僅在核的一側(cè)出現(xiàn)一線狀天藍色或淡藍色的胞質(zhì)。中淋巴細(xì)胞比紅細(xì)胞大，胞質(zhì)較小淋巴細(xì)胞的稍多，著色較淺。核圓形或卵圓形，位于細(xì)胞中部，也染成深藍紫色。單核細(xì)胞數(shù)量少，約占2%-8%，是細(xì)胞中體積最大的一種，胞核呈腎形、馬蹄形，常在細(xì)胞一側(cè)，著色比淋巴細(xì)胞淺。血小板為形狀不規(guī)則的細(xì)胞小體，其周圍部分為淺藍色，中央有細(xì)小的紫色顆粒，常聚集成群，分布于紅細(xì)胞之間。高倍鏡下一般只能看到成堆的紫色顆粒，在油鏡下才能看到顆粒周圍的淺色胞質(zhì)部分。淋巴細(xì)胞數(shù)量較多，約占20%-40%，可見中、小型，淋巴13血涂片的制作和ppt課件14（三）血細(xì)胞計數(shù)1．血細(xì)胞計數(shù)板的構(gòu)造計數(shù)板是一塊特制的長方形厚玻璃板，板面的中部有4條直槽，內(nèi)側(cè)兩槽中間有一條橫槽把中部隔成二長方形的平臺。平臺比整個玻璃板的平面低0.1mm，當(dāng)放上蓋玻片后，平臺與蓋玻片之間距離（即高度）為0.1mm。平臺中心部分各以3mm長，3mm寬精確劃分為9個大方格，稱為計數(shù)室，每個大方格面積為1mm3，體積為0.1mm3。四角的大方格，又各分為16個中方格，適用于白細(xì)胞計數(shù)。中央的大方格則由雙線劃分為25個中方格，每個中方格面積為0.04mm3，體積為0.004mm3。每個中方格又各分成16個小方格，適用于紅細(xì)胞計數(shù)。（三）血細(xì)胞計數(shù)1．血細(xì)胞計數(shù)板的構(gòu)造15

162．血細(xì)胞計數(shù)（1）兔血稀釋1.5ml塑料離心管：0.38ml白細(xì)胞稀釋液放入小試管內(nèi)+0.02ml兔血5ml塑料離心管：3.98ml紅細(xì)胞稀釋液＋0.02ml兔血血液應(yīng)加入試管底部，滴入計數(shù)室前試管搖振1-2min。將蓋玻片放在計數(shù)板正中，用白色小號Tip頭吸取搖勻的稀釋血液，將一小滴血液滴在蓋玻片邊緣的玻片上，使稀釋血液借毛細(xì)管現(xiàn)象而自動流入計數(shù)室內(nèi)。如滴入過多，溢出并流入兩側(cè)深槽內(nèi)，使蓋玻片浮起，體積改變，會影響計數(shù)結(jié)果，需用濾紙片把多余的溶液吸出，以深槽內(nèi)沒有溶液為宜。如滴入溶液過少，經(jīng)多次充液，易造成氣泡，應(yīng)洗凈計數(shù)室，干燥后重做。紅細(xì)胞和白細(xì)胞的計數(shù)，各使用一計數(shù)室。血液稀釋液滴入計數(shù)室后，須靜置2-3min，然后在低倍顯微鏡下計數(shù)。2．血細(xì)胞計數(shù)（1）兔血稀釋172．血細(xì)胞計數(shù)（2）計數(shù)計數(shù)白細(xì)胞時，數(shù)四角4個大方格的白細(xì)胞總數(shù)計數(shù)紅細(xì)胞時，數(shù)中央大方格的四角的4個中方格和中央的一個中方格（共5個中方格）的紅細(xì)胞總數(shù)計數(shù)時應(yīng)循一定的路徑，對橫跨刻度上的血細(xì)胞，依照“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則進行計數(shù)。計數(shù)白細(xì)胞時，如發(fā)現(xiàn)各大格的白細(xì)胞數(shù)目相差8個以上；計數(shù)紅細(xì)胞時，如各中方格的紅細(xì)胞數(shù)目相差20個以上，表示血細(xì)胞分布不均勻，必須把稀釋液搖勻后重新計數(shù)。2．血細(xì)胞計數(shù)（2）計數(shù)182．血細(xì)胞計數(shù)（3）計算

細(xì)胞數(shù)＝計數(shù)板相應(yīng)方格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)×稀釋倍數(shù)×1/計數(shù)室總體積

白細(xì)胞數(shù)＝4個大方格內(nèi)數(shù)得白細(xì)胞總數(shù)×20倍×1/1×1×0.1×4mm3，即乘以50，即得每mm3血內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)

紅細(xì)胞數(shù)＝中央大方格中的5個中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞總數(shù)×200倍×1/0.2×0.2×0.1×5mm3，即乘以10，000，即得每mm3血內(nèi)紅細(xì)胞總數(shù)按目前臨床上血細(xì)胞計數(shù)采用的通用單位，將以上所獲每毫升血液中所含血細(xì)胞數(shù)量換算為各血細(xì)胞在每升血液中的數(shù)量2．血細(xì)胞計數(shù)（3）計算192．血細(xì)胞計數(shù)（4）清洗血細(xì)胞計數(shù)板

蓋玻片及計數(shù)板用過之后，必