第十單元生物技術(shù)實踐嘉

專題二十二微生物的利用

五年高考真題4gd

考點一微生物的實驗室培養(yǎng)

1.（2015?江蘇卷，19）做“微生物的分離與培養(yǎng)”實驗時，下列敘述正確的是（）

A.高壓滅菌加熱結(jié)束時，打開放氣閥使壓力表指針I(yè)可到零后，開啟鍋蓋

B.倒平板時，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上

C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落

D.用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時，應(yīng)標記在皿底上

解析本題主要考查微生物的分離與培養(yǎng)實驗，意在考查考生對實驗現(xiàn)象和結(jié)果進行解

釋、分析和處理能力。難度適中。A項錯，高壓滅菌加熱結(jié)束后，讓其自然冷卻后再慢慢

打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物：B項錯，倒平板時左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐

形瓶，左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋；C

項錯，灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；D項對，皿底

的標記不會因為蓋子混淆而混淆。

答案D

2.（2012?全國，5）下列關(guān)于細菌的敘述，正確的是（）

A.不同種類細菌的生長均需要相同碳源

B.常用液體培養(yǎng)基分離獲得細菌單菌落

C.細菌大量培養(yǎng)過程中，芽抱形成于細菌生長的調(diào)整期

D.培養(yǎng)基中含有高濃度NaCl有利「金黃色葡萄球菌的篩選

解析本題考杳微生物的營養(yǎng)、生長等相關(guān)知識。金黃色葡萄球菌能在含有高濃度NaCl

的培養(yǎng)基中正常生長、繁殖，其他微生物則不能，故可用含高濃度NaCl的選擇培養(yǎng)基來

篩選金黃色葡萄球菌，選項D正確；自養(yǎng)型細菌（如硬化細菌）可直接利用空氣中的氯1作

碳源，異養(yǎng)型細菌（如大腸桿菌）只能利用培養(yǎng)基中現(xiàn)成的有機碳源（如前萄糖），選項A

錯誤；常利用固體培養(yǎng)基分離獲得細菌單菌落，選項B錯誤；細菌的生長曲線包括調(diào)整期、

對數(shù)期、穩(wěn)定期、衰亡期四個階段，芽也形成于細菌生長的穩(wěn)定期，選項C錯誤。

答案D

3.（2012?北京理綜，5）高中生物學實驗中，在接種時不進行嚴格無菌操作對實驗結(jié)果影響

最大的一項是（）

A.將少許干酵母加入到新鮮的葡萄汁中

B.將毛霉菌液接種在切成小塊的鮮豆腐上

C.將轉(zhuǎn)基因植物葉片接種到無菌培養(yǎng)基上

D.將土壤浸出液涂布在無菌的選擇培養(yǎng)基.上

解析本題綜合考查生物學中不同實驗操作的要求，意在考查考生的理解與分析能力。A

選項錯誤：將少許T?酵母加入到新鮮的葡萄汁中進行釀酒時，在缺氮、酸性環(huán)境下其他雜

菌很難生長，故不嚴格滅菌對其影響不大；B選項錯誤：腐乳制作中將毛雷菌液接種在切

成小塊的鮮豆腐上，毛霉生長繁殖快且抗雜菌能力強，故不嚴格滅菌對實驗結(jié)果影響不大;

C選項正確：進行植物組織培養(yǎng)時，植物材料體積小、抗性差，而微生物繁殖快、生長迅

速，從而爭奪培養(yǎng)基中的營養(yǎng)，其產(chǎn)生的代謝廢物還會毒害培養(yǎng)材料，故培養(yǎng)材料一旦被

微生物（如細菌）污染，將嚴重影響實驗結(jié)果；D選項錯誤：選擇培養(yǎng)基中已經(jīng)加入了某種

化學物質(zhì)，以抵制不需要的微生物生長，促進所需要的微生物生長，另外土壤浸出液本身

也含有一定量的微生物，因此將土壤浸出液涂布在無菌的選擇培養(yǎng)基上時不進行嚴格的無

菌操作，對實驗結(jié)果影響不大。

答案C

4.（2014?江蘇卷，30）為了獲得￡-胡蘿卜素產(chǎn)品，某小組開展了產(chǎn)尸-胡蘿卜素酵母的篩選

與色素提取實驗。請回答下列問題：

（1）實驗用的培養(yǎng)皿常用的兩種滅菌方法是；為了減少滅菌后器皿被

污染，滅菌前應(yīng)該o

（2）為了篩選出酵母菌，培養(yǎng)基中添加了青霉素，其目的是。

（3）下圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是。（填序號）

①安全閥、放氣閥、壓力表

②放氣閥、安全閥、壓力表

③安全閥、放氣閥、溫度表

④放氣閥、安全閥、溫度表

（4）為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3塊相同平板上劃線，結(jié)果其中一塊平板的

各劃線區(qū)均未見菌生長，最可能的原因是o

（5）為增加外胡蘿卜素提取量,在研磨酵母細胞時，添加石英砂的目的是；

研磨時（填“需要”或“不需要”）添加CaC03,理由是

解析（1）微生物培養(yǎng)時常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、灼燒滅菌等，培養(yǎng)

皿常用高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌。將培養(yǎng)皿放入滅菌鍋之前通常用牛皮紙或報紙包扎避免

火菌后的再次污染。（2）青霉素能破以細菌的細胞壁并能抑制細菌的繁殖，因此添加青霉

素可抑制細菌的生長。；3）乙連接軟管為排（放）氣閥，甲為安全閥，丙是壓力表。（4）三塊

平板有兩塊平板長有菌落，說明含有菌株并可在培養(yǎng)基上生長；而其中一塊未見菌落，說

明菌株死亡，因此，應(yīng)是在接種過程中接種環(huán)灼燒后未足夠冷卻，使菌株因溫度過高被殺

死。（5）石英砂有助于研磨充分。CaCOi用于中和酸性物質(zhì)，￡-胡蘿卜素較耐酸，因此不

需添加。

答案（1）干熱滅菌和濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌）用牛皮紙（報紙）包扎器皿（2）抑制細

菌（放線菌）生長（3）①

（4）接種環(huán)溫度過高，菌被殺死（5）有助于研磨充分不需要外胡蘿卜素較耐酸

5.（2013?四川理綜，10）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽抱桿菌的a

一淀粉酶基因轉(zhuǎn)入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種（過程如圖

(4)小

考點二微生物的篩選、分離與計數(shù)

1.(2013?江蘇，18)某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是

()

A.培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌

B.轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進行劃線

C.接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

D.培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次

解析本題考查微生物的分離和培養(yǎng)過程中的操作要求和培養(yǎng)條件等相關(guān)知識，意在考

查考生的知識運用能力和實驗處理能力。培養(yǎng)微生物的過程中應(yīng)先滅菌再倒平板，A錯誤：

每一次劃線前都要進行接種環(huán)的灼燒滅菌，B正確；接種后的培養(yǎng)皿應(yīng)在恒溫培養(yǎng)箱中進

行培養(yǎng)，光照會影響溫度等條件，C錯誤；培養(yǎng)過程中觀察間隔的時間一般不超過24h,

D錯誤。

答案B

2.(2015?江蘇卷，31)人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃，可用來發(fā)酵處理秸稈，提高秸

稈的營養(yǎng)價值。為了增強發(fā)酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對其降

解纖維素能力進行了研究。請回答下列問題：

(1)在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項不需要的是(填序號)。

①酒精燈②培養(yǎng)皿③顯微鏡④無菌水

(2)在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是。

(3)向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時，若試管口粘附有培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈的原

因是O

(4)剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)

生這種反應(yīng)。研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落(見下圖)。

圖中降解圈大小與纖維素酶的有關(guān)。圖中降解纖維素能力最強的菌株是

(填圖中序號)，

牌解■

(5)研究人員用篩選到的纖維素酶高產(chǎn)菌株J1和J4,在不同溫度和pH條件下進行發(fā)酵,

測得發(fā)酵液中施活性的結(jié)果見下圖，推測菌株________更適合用于人工瘤胃發(fā)酵，理由是

50

40

30

20

10

0515253545176575,

溫度汽

解析本題主要考查培養(yǎng)基的配制和微生物的培養(yǎng)，意在考查生物實驗、理解能力和綜合

運用能力，難度適中。

(1)樣品稀釋和涂布平板的操作不需要顯微鏡。(2)涂布平板時若培養(yǎng)基表面的菌懸液過

多，菌體堆積，影響分離效果。(3)試管口粘附的培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈，避免培

養(yǎng)基污染棉塞,,(4)菌株產(chǎn)生的降解纖維素酶的量越多、活性越高，會使降解圈越大。降

解纖維素能力最強的菌株是①，因其菌株菌落小，但降解圈大。(5)分析圖中曲線可知,

J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下前的活性更高，而發(fā)酵過程會產(chǎn)熱和酸，故該菌株最適

合用于人工瘤胃發(fā)醇。

答案⑴③

(2)培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積，影響分離效果

(3)避免培養(yǎng)基污染棉塞

(4)量與活性①

(5)J4發(fā)酵過程會產(chǎn)熱和產(chǎn)酸，J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高

3.(2014?課標卷【，39)植物桔稈中的纖維素可被某些微生物分解回答下列問題。

(1)分解秸稈中纖維索的微生物能分泌纖維索酶，該醯是由3種組分組成的復合酹，其中

的葡萄糖甘酶可將_______分解成_________。

⑵在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，CR可與纖維素形成色復合物。用

含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的

（3）為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設(shè)計了甲、乙兩種

培養(yǎng)基（成分見下表）：

酵母膏無機鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水

培養(yǎng)

++++—++

基甲

培養(yǎng)

+++—+++

基基

注：“+”表示有，“一”表示無。

據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲（填“能”或“不能”）月于分離和鑒別纖維素分解菌，原因

是_______________________________________________________________

培養(yǎng)基乙（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是

解析（1）纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類

物質(zhì)。纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，如下圖:

纖維素酶葡萄糖普酶

纖維素纖維二糖葡萄糖

（2）剛果紅與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解后，紅色復合物無法形成,

出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解

菌。

（3）分離和鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，且需以纖維素為唯一碳源。

答案（1）纖維二糖葡萄糖

（2）紅透明圈

(3)不能液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落不能培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會形成CR-

纖維素紅色復合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌

4.(2014?課標全國卷II,39改編)為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測定了該河流

水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作。回答下列問題：

(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后

的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是

然后，將】mL水樣稀釋10()倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當

培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37o據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為

(2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操作時，接種環(huán)通過滅菌。在第

二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是

(3)示意圖A和B中，表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果.

解析(1)稀釋涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間，檢測培養(yǎng)

基平板滅菌是否合格；每升水樣中的活菌數(shù)為：(39+38+37)/3=38,再除以0.1乘以

100,得到1亳升中的函數(shù)，再乘以1000就是1升中的菌數(shù)，故為3.8X10'。(2)用平板

劃線法先將接種環(huán)灼燒滅菌再劃線。第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開

始劃線，達到稀釋的目的，使得最后能夠得到單個菌落。(3)根據(jù)圖示可知，B為稀釋涂

布平板法接種后培養(yǎng)得到的菌落。

答案(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8X107(2)灼燒