1、a，1。安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物系人類染色體標(biāo)本的制備及G顯帶核型分析，a，2。目標(biāo)和要求。1.掌握染色體標(biāo)本的制備方法和G顯帶技術(shù)。2.熟悉人外周血淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)方法和G顯帶染色體的核型分析技術(shù)。實驗原理，染色體作為細(xì)胞遺傳信息的載體，出現(xiàn)在有絲分裂中。用于制備人類染色體標(biāo)本的材料可以是骨髓細(xì)胞、外周血淋巴細(xì)胞、絨毛細(xì)胞、羊水細(xì)胞等。最簡單的方法之一是取少量外周靜脈血進行短期培養(yǎng)，然后用秋水仙堿處理(秋水仙堿可以阻斷有絲分裂細(xì)胞中微管的聚集，使紡錘體不能形成，從而使有絲分裂停滯在中期，此時染色體具有最典型的形態(tài))，然后用低滲透性和固定性處理它以獲得更多的中期相用于核型分析。4、染色體顯帶是

2、經(jīng)過特殊處理后，每條染色體上沿縱軸有一定數(shù)量的不同著色程度和不同寬度的水平條紋。染色體帶是染色體固有的穩(wěn)定特征。染色體G顯帶是眾多顯帶技術(shù)之一。染色體標(biāo)本用胰蛋白酶處理，然后用姬姆薩染料溶液染色。g顯帶技術(shù)因其方法簡單、重復(fù)性好、顯帶清晰、可長期保存而被廣泛應(yīng)用。核型是指體細(xì)胞中期的所有染色體，這些染色體按其大小和形態(tài)特征排列。每個體細(xì)胞包含兩組相同的染色體，用2n表示。核型分析是細(xì)胞遺傳學(xué)中一種重要的研究方法，在染色體疾病、白血病和腫瘤等臨床疾病的診斷和研究中具有重要意義。a，5，人類體細(xì)胞的正常核型，a組，b組，c組，d組，e組，f組，亞著絲粒染色體，45，亞著絲粒染色體，無伴侶，612，

3、x，亞著絲粒染色體，1315，近著絲粒染色體，伴侶，亞著絲粒染色體近著絲粒染色體帶衛(wèi)星，Y染色體稍大，長臂平行延伸，無衛(wèi)星，基因組和核型，基因組：生物體的單倍體染色體組成稱為生物體基因組，它代表所有儲存的遺傳信息，a，6，顯帶染色體：321，1234，和特殊染色方法被用來使染色體顯示沿其長軸交替明暗或不同染色深度的條紋。正常男性：46，XY，正常女性：46，XX，正常人細(xì)胞染色體帶型，a，7，實驗用品，1儀器：采血儀，潔凈工作臺，培養(yǎng)瓶，恒溫培養(yǎng)箱，恒溫水浴罐，10毫升刻度離心機，低速離心機，量筒，載玻片，托盤天平，光學(xué)顯微鏡，染缸，電材料：人外周靜脈血。試劑3: RPMI-1640培養(yǎng)基、小

4、牛血清、肝素、植物血凝素(PHA)、秋水仙堿(20g/ml)、0.075mol/L氯化鉀低滲溶液、0.85%生理鹽水、固定液(目前使用的甲醇3360冰醋酸=:1)、姬姆沙原液，以及，a，8，實驗步驟，(1)制備人外周血染色體標(biāo)本，收集1ml人外周靜脈血，將其迅速與適量肝素混合進行抗凝。2.在干凈的工作臺上向RPMI-1640培養(yǎng)基中加入抗凝劑，每瓶加入0.30.5毫升全血。輕輕攪拌均勻。3.37讓培養(yǎng)箱靜置約72小時(24小時后水平搖動燒瓶一次，以懸浮和混合血細(xì)胞)。4.培養(yǎng)6872小時(即培養(yǎng)結(jié)束前24小時)，向每個瓶中加入秋水仙堿(20g/ml)，直至最終濃度為0.10.2g/ml，輕輕搖

5、動燒瓶并充分混合，繼續(xù)培養(yǎng)24小時。5。停止培養(yǎng)，吹氣并均勻混合培養(yǎng)物，將其轉(zhuǎn)移到10毫升玻璃離心管中，平衡，并以1800轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心6分鐘。a，9，6。低滲上清液。加入8毫升在37預(yù)熱的0.075毫升/升氯化鉀，輕輕吹氣，與秸稈混合，在37低滲處理20分鐘。7.預(yù)固定，加入1毫升新制備的固定溶液(甲醇：冰醋酸=:1)，輕輕混合，以1800rpm離心6分鐘。8.固定：棄去上清液，加入8毫升上述新鮮固定液，輕輕混合，室溫靜置固定20分鐘。9.丟棄上清液并再次固定。10.棄去上清液，根據(jù)沉淀量加入適量的新鮮固定液，輕輕混合制成磨砂懸浮液。11.壓片：取12滴上述混懸液，滴在干凈的沾有冰水的載

6、玻片上或干燥，吹走，用火吹干。12.37放置在培養(yǎng)箱中34天或在70烘烤2小時進行老化處理，以便為條帶分析做準(zhǔn)備。a，10，實驗方法和步驟，1。預(yù)處理：實驗前3-4小時，取健康小鼠，每只腹腔注射001秋水仙堿03-04毫升。小心不要損傷內(nèi)臟。2.取股骨：用一只手的拇指和食指握住老鼠的頭，用另一只手拉它的尾巴，并向后拉它的頸椎。被殺死后，立即用剪刀剪掉后腿的毛，取出老鼠的股骨，去掉上面的肌肉，然后清洗。人類1號染色體g顯帶。胰蛋白酶的制備：在含有45毫升0.85%生理鹽水的染缸中加入3毫升0.25%的胰蛋白酶溶液，調(diào)節(jié)酸堿度至6.87.2，并將其置于37水浴中預(yù)熱。2.胰蛋白酶消化處理：將老化后

7、的樣品放入胰蛋白酶溶液中23分鐘，不斷搖動載玻片，確保效果均勻充分。3.沖洗：用0.85%的生理鹽水快速沖洗，以停止胰蛋白酶的作用。4.染色：用吉姆薩工作液染色1015分鐘。5.沖洗并干燥：用緩慢流動的自來水沖洗載玻片，然后用空氣或吹風(fēng)機吹干。6.顯微鏡檢查：在光學(xué)顯微鏡下觀察和分析核型。核型分析，a，11，(3) G顯帶1。選擇染色體分布均勻、長度適中的G顯帶核型照片，先進行計數(shù)，然后剪去每條染色體。2.配對：同源染色體具有相同的形狀和帶型；根據(jù)這一原則，46條染色體根據(jù)它們的大小、形狀、著絲粒位置、衛(wèi)星存在和G顯帶模式分成23對。3.染色體排列：按大小順序排列23對染色體，末端有一對性染色

8、體，將排列好的23對染色體分組附在實驗報告紙上。這樣，通過剪切和粘貼匹配的正常人染色體圖是正常人染色體組型圖，可以寫成46，XX或46，XY。a，12，正常男性染色體G顯帶核型，a，13，人類染色體G顯帶特征公式：一個光頭，兩條蛇，三只蝴蝶，四個鞭炮，五個黑腰6號是一張小白臉，七個上，八個下，九個苗條，十個長臂，近十一個低，十二個高，十三個四十五，中間，十六個q2疤痕，十七個帶腳鐐的長臂，十八個小肚，十九個十一個腰和二十個頭重，其中，低滲時間非常重要。如果處理時間過長，細(xì)胞膜會過早破裂，導(dǎo)致染色體丟失。如果處理時間不夠，染色體離散度會很差，不利于計數(shù)分析。2.G顯帶過程中的關(guān)鍵因素包括胰蛋白酶的作用時間、溫度和pH值。胰蛋白酶溶液應(yīng)在37下充分預(yù)熱，溶液的酸堿度應(yīng)保持在6.87.2，以