1、電阻抗法白細(xì)胞檢測(cè)原理,1,PPT學(xué)習(xí)交流,細(xì)胞計(jì)數(shù)電阻抗原理,2,PPT學(xué)習(xí)交流,把用等滲電解質(zhì)溶液（稀釋液）稀釋的細(xì)胞懸液倒入到一個(gè)不導(dǎo)電的容器中，將小孔管，也稱傳感器插到細(xì)胞懸液中，小孔是電阻抗法細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)重要部分，其內(nèi)充滿了稀釋液，并有一個(gè)電極，其外側(cè)細(xì)胞懸液中有一個(gè)外電極。當(dāng)電流接通后，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生穩(wěn)定的電流，細(xì)胞懸液通過(guò)有固定直徑和厚度的小孔向小孔內(nèi)部流動(dòng)，計(jì)數(shù)孔直徑一般100um，厚度為75um左右。因?yàn)樾】字車錆M了具有傳導(dǎo)性的液體，其電子脈沖是穩(wěn)定的。如果供給的電流I和阻抗Z是穩(wěn)定的，那么根據(jù)歐姆定律，通過(guò)小孔的電壓E也是不變的。當(dāng)懸液中一個(gè)細(xì)胞通過(guò)小孔時(shí)，由于

2、細(xì)胞有極小的傳導(dǎo)性，細(xì)胞的導(dǎo)電性質(zhì)比等滲的稀釋液要低，在電路中小孔感應(yīng)區(qū)內(nèi)電阻增加，于瞬間引起了電壓變化而出現(xiàn)一個(gè)脈沖信號(hào)，這被稱為通過(guò)脈沖，電壓增加程度取決于細(xì)胞體積，細(xì)胞體積越大，引起的電壓變化越大，產(chǎn)生的脈沖振幅越高。通過(guò)對(duì)脈沖大小的測(cè)量可以測(cè)定出細(xì)胞體積，記錄脈沖的數(shù)目可以得到細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果；經(jīng)過(guò)對(duì)各種細(xì)胞所產(chǎn)生脈沖大小的電子選擇，可以區(qū)分不同種類的細(xì)胞，并進(jìn)行分析。,3,PPT學(xué)習(xí)交流,電阻抗法白細(xì)胞分群及計(jì)算方法,根據(jù)脈沖的大小，即可人為地將血內(nèi)的白細(xì)胞分成幾群（二分群或三分群） 電阻法白細(xì)胞“分類”實(shí)際上是根據(jù)溶血?jiǎng)┳饔煤蟮陌准?xì)胞體積大小的分群，其測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)只是根據(jù)白細(xì)胞體積的大小

3、，而體積大小并不是細(xì)胞形態(tài)惟一的指標(biāo)。,4,PPT學(xué)習(xí)交流,直方圖與脈沖信號(hào)的關(guān)系,5,PPT學(xué)習(xí)交流,白細(xì)胞體積分布直方圖,6,PPT學(xué)習(xí)交流,經(jīng)過(guò)溶血?jiǎng)┨幚砗蟮陌准?xì)胞根據(jù)體積大小可以初步確認(rèn)其相應(yīng)的種類：第一亞群（小細(xì)胞群）是淋巴細(xì)胞（LYM);第二個(gè)亞群是單個(gè)核細(xì)胞區(qū)（MONO),也被稱為中間細(xì)胞（MID)；相當(dāng)于粒細(xì)胞的細(xì)胞群（GRAN)位于第三亞群（大細(xì)胞群）。例如位于3590fl的顆粒被計(jì)數(shù)為淋巴細(xì)胞，90160fl的顆粒計(jì)數(shù)為單核細(xì)胞，160fl以上的顆粒計(jì)數(shù)為粒細(xì)胞。,7,PPT學(xué)習(xí)交流,在白細(xì)胞計(jì)數(shù)池中除加入一定量的稀釋液外還加入了溶血?jiǎng)?，此溶血?jiǎng)┮环矫媸辜t細(xì)胞迅速溶解；另一

4、方面使白細(xì)胞漿經(jīng)細(xì)胞膜滲出，胞膜緊裹在細(xì)胞核或存在的顆粒物質(zhì)周圍。經(jīng)此處理后的白細(xì)胞體積與其自然體積無(wú)關(guān)，含有顆粒的粒細(xì)胞經(jīng)溶血?jiǎng)┨幚砗蟊葻o(wú)顆粒的單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞體積要大些，但其真實(shí)體積與單核細(xì)胞相等或更小。白血病細(xì)胞、異性淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等多出現(xiàn)在單個(gè)核細(xì)胞區(qū)域，少數(shù)也可見(jiàn)于淋巴細(xì)胞或粒細(xì)胞區(qū)。所以白細(xì)胞直方圖并不能代表自然狀況，但可以用于判斷白細(xì)胞各體積群分布情況。,8,PPT學(xué)習(xí)交流,正常白細(xì)胞直方圖,9,PPT學(xué)習(xí)交流,異常白細(xì)胞直方圖,10,PPT學(xué)習(xí)交流,異常白細(xì)胞直方圖,11,PPT學(xué)習(xí)交流,異常白細(xì)胞直方圖,12,PPT學(xué)習(xí)交流,異常白細(xì)胞直方圖,

5、13,PPT學(xué)習(xí)交流,異常白細(xì)胞直方圖,14,PPT學(xué)習(xí)交流,異常白細(xì)胞直方圖,15,PPT學(xué)習(xí)交流,白細(xì)胞直方圖變化的意義,主要是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員如何做好儀器計(jì)數(shù)的質(zhì)量控制及判斷是否“涂片復(fù)檢”。 1.判斷白細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)是否受到其他因素的干擾 某些貧血的病理性紅細(xì)胞、新生兒紅細(xì)胞等，對(duì)溶血?jiǎng)┯休^強(qiáng)的抵抗力，使之不溶解或不完全溶解而影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)； 血液內(nèi)有較多的有核紅細(xì)胞，溶解后紅細(xì)胞的核當(dāng)做白細(xì)胞計(jì)數(shù)； 血小板聚集成團(tuán)，誤計(jì)數(shù)為白細(xì)胞等，影響了白細(xì)胞計(jì)數(shù)，此時(shí)白細(xì)胞直方圖也可發(fā)生相應(yīng)的改變，因而觀察圖形變化可判斷儀器的工作狀態(tài)。,16,PPT學(xué)習(xí)交流,白細(xì)胞直方圖變化的意義,2.判斷直方圖

6、是否符合篩選標(biāo)準(zhǔn)，決定涂片鏡檢 電阻抗法儀器白細(xì)胞“分類”（僅是體積的分群）結(jié)果，只是用于健康體檢或無(wú)明顯血液學(xué)檢查異常結(jié)果及白細(xì)胞各群分布直方圖正常的病人。換言之，在白細(xì)胞數(shù)明顯增高或減低，或末梢血出現(xiàn)形態(tài)不典型或幼稚細(xì)胞時(shí)，均可導(dǎo)致直方圖異常，此時(shí)細(xì)胞“分類”結(jié)果是不準(zhǔn)確的。因此，中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)會(huì)專家座談會(huì)明確規(guī)定，使用血細(xì)胞分析儀進(jìn)行白細(xì)胞“分類”時(shí)，必須具備：病人白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量均在正常范圍內(nèi)白細(xì)胞體積分布直方圖完全正常的情況下，才能作為白細(xì)胞分類結(jié)果用于臨床，否則必須涂片鏡檢。,17,PPT學(xué)習(xí)交流,掌握本實(shí)驗(yàn)室血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞正常直方圖,不同廠家、不同型號(hào)的儀

7、器白細(xì)胞體積分布直方圖是不完全相同的，但電阻法各類儀器白細(xì)胞直方圖的病理變化趨勢(shì)是一致的。因此，在分析各種病理變化的圖形之前，必須先掌握自己實(shí)驗(yàn)室所擁有的血細(xì)胞分析儀的白細(xì)胞正常直方圖。,18,PPT學(xué)習(xí)交流,電阻抗法紅細(xì)胞及血小板檢測(cè)原理,紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞比容測(cè)定原理 紅細(xì)胞通過(guò)小孔時(shí)，形成相應(yīng)大小的脈沖，脈沖的多少即紅細(xì)胞的數(shù)目，脈沖的高度代表單個(gè)脈沖細(xì)胞的體積。脈沖高度疊加，經(jīng)換算即可得紅細(xì)胞數(shù)，得出紅細(xì)胞比容。,19,PPT學(xué)習(xí)交流,血紅蛋白測(cè)定原理,20,PPT學(xué)習(xí)交流,血紅蛋白測(cè)定原理,被稀釋的血液加入溶血?jiǎng)┖螅t細(xì)胞溶解，釋放血紅蛋白，后者與溶血?jiǎng)┲杏嘘P(guān)成分結(jié)合形成血紅蛋白衍生

8、物，進(jìn)入血紅蛋白測(cè)試系統(tǒng)，在特定波長(zhǎng)（一般530nm550nm)下比色，吸光度的變化與液體中血紅蛋白含量成正比，儀器便可顯示其濃度。國(guó)際血液標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（ICSH)推薦的氰化高鐵（HiCN）法，最大吸收在540nm。校正儀器必須以HiCN值為標(biāo)準(zhǔn)。為了減少溶血?jiǎng)┑亩拘?，避免含氰血紅蛋白衍生物檢測(cè)后的污物處理，今年來(lái)有些血細(xì)胞分析儀使用非氰化溶血?jiǎng)ㄈ鏢LS）。實(shí)驗(yàn)證明，形成的衍生物（SLS-Hb)與HiCN吸收光譜相似，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性、準(zhǔn)確性達(dá)到含有氰化物溶血?jiǎng)┩瑯铀健?21,PPT學(xué)習(xí)交流,正常紅細(xì)胞直方圖,22,PPT學(xué)習(xí)交流,正常紅細(xì)胞直方圖,儀器在36360fl的范圍內(nèi)分析紅細(xì)胞。正

9、常紅細(xì)胞主要分布在50200fl范圍內(nèi)，直方圖上可見(jiàn)兩個(gè)細(xì)胞群體：從50125fl區(qū)域有一個(gè)幾乎兩側(cè)對(duì)稱、較狹窄的正態(tài)分布曲線（紅細(xì)胞主群），主峰右側(cè)約分布在125200fl區(qū)域的細(xì)胞，為大紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞。,23,PPT學(xué)習(xí)交流,異常紅細(xì)胞直方圖,24,PPT學(xué)習(xí)交流,異常紅細(xì)胞直方圖,25,PPT學(xué)習(xí)交流,異常紅細(xì)胞直方圖,1.缺鐵性貧血的直方圖：其特點(diǎn)為曲線峰左移，峰底變寬，顯示小細(xì)胞不均一性。外周血涂片顯示紅細(xì)胞體積大小不均，中央淡染區(qū)明顯增大，小紅細(xì)胞明顯增多。 2.輕型珠蛋白生成障礙性貧血的直方圖：圖形表現(xiàn)為曲線峰左移，峰底變窄，顯示小細(xì)胞均一性。外周血涂片顯示紅細(xì)胞體積減小，但

10、大小變化不明顯，有時(shí)可見(jiàn)靶形紅細(xì)胞。,26,PPT學(xué)習(xí)交流,異常紅細(xì)胞直方圖,3.鐵粒幼細(xì)胞性貧血的直方圖：圖形表現(xiàn)為曲線峰左移，可呈“雙峰”形，峰底明顯變寬。外周血涂片顯示紅細(xì)胞體積明顯大小不均，存在明顯的小紅細(xì)胞和大紅細(xì)胞或正常紅細(xì)胞兩個(gè)細(xì)胞群，呈“雙形性”改變，但以小細(xì)胞低色素最為突出。缺鐵性貧血經(jīng)鐵劑治療有效，在3周左右時(shí)也可出現(xiàn)類似的“雙峰”狀圖形，但峰底更寬。,27,PPT學(xué)習(xí)交流,異常紅細(xì)胞直方圖,4.葉酸或VitB12缺乏引起巨幼紅細(xì)胞貧血的直方圖:治療前的直方圖曲線峰變低、右移，峰底明顯變寬，顯示明顯的大細(xì)胞不均一性，是葉酸或VitB12缺乏引起巨幼細(xì)胞性貧血的重要直方圖特征

11、。外周血涂片顯示紅細(xì)胞體積大小不均，橢圓形的大紅細(xì)胞明顯增多；而且部分中性粒細(xì)胞核分葉增多。,28,PPT學(xué)習(xí)交流,異常紅細(xì)胞直方圖,5.急性失血性貧血的直方圖：直方圖的曲線峰變低，其它特點(diǎn)與正常紅細(xì)胞直方圖一致。,29,PPT學(xué)習(xí)交流,異常紅細(xì)胞直方圖,30,PPT學(xué)習(xí)交流,異常紅細(xì)胞直方圖,31,PPT學(xué)習(xí)交流,異常紅細(xì)胞直方圖,32,PPT學(xué)習(xí)交流,異常紅細(xì)胞直方圖,33,PPT學(xué)習(xí)交流,電阻抗法血小板檢測(cè)原理,血小板隨紅細(xì)胞一起在一個(gè)系統(tǒng)中進(jìn)行檢測(cè)，由于血小板體積與紅細(xì)胞體積有明顯的差異，儀器設(shè)定了特定的閾值，將高于閾值者定于紅細(xì)胞，反之為血小板，檢測(cè)數(shù)據(jù)經(jīng)儀器內(nèi)部的計(jì)算機(jī)處理后分別給

12、出血小板與紅細(xì)胞數(shù)目。血小板分別儲(chǔ)存于64個(gè)通道內(nèi)，直方圖范圍為230fl。不過(guò)，不同儀器的血小板直方圖范圍不一。MPV就是此平整曲線所含的群體算術(shù)平均體積，所以，MPV也就是PLT體積分布直方圖的產(chǎn)物。,34,PPT學(xué)習(xí)交流,電阻抗法血小板計(jì)數(shù)原理,35,PPT學(xué)習(xí)交流,正常血小板直方圖,36,PPT學(xué)習(xí)交流,各類血小板直方圖,37,PPT學(xué)習(xí)交流,異常血小板直方圖,1.巨大血小板增多的血小板直方圖：與正常直方圖相比，圖形分布峰右移，特別是與橫坐標(biāo)的接近或重合點(diǎn)明顯右移，同時(shí)MPV明顯增高，有時(shí)儀器不顯示MPV值；有的儀器在35fl處可見(jiàn)一個(gè)小峰。血片上可見(jiàn)較多的大血小板。 2.小血小板增多的血小板直方圖：與正常直方圖相比，圖形分布峰左移，特別是與橫坐標(biāo)的接近或重合點(diǎn)明顯左移，同時(shí)MPV值明顯減低。血片上可見(jiàn)較多的小血小板。,38,PPT學(xué)習(xí)交流,異常血小