1、關于山藥構(gòu)造造就褐化反響的研究論文關鍵詞:山藥構(gòu)造造就外植體褐化抗氧化劑造就基質(zhì)論文摘要:筆者從山藥差異外植體(葉、莖段、零余子)、造就基中添加抗氧化劑和差異造就基質(zhì)3個方面舉行試驗研究。結(jié)果表白,山藥差異外植體的褐化程度也不一樣,莖段褐化程度最輕;S造就基中添加150g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)能有用按捺外植體的褐化;在山藥組培苗的快繁階段接納液體基質(zhì)造就方法能明顯低落褐化程度,進步山藥組培苗成活率。山藥(hineseya)具有較高的藥用代價及營養(yǎng)代價，重要食用器官為地下塊莖，為普通化的滋補食品，通過構(gòu)造造就技能不但可舉行快速生殖，并且能使精良品種種性得以保存連續(xù)1,2。但山藥在構(gòu)造造就歷

2、程中存在著嚴峻的褐化發(fā)應，常常創(chuàng)造山藥組培苗或外植體枯死及其基部造就基顏色黑褐化，這種褐化征象又稱為酚污染，嚴峻影響外植體的脫分化和造就物的再分化3。因此，為了山藥構(gòu)造造就工場化育苗的順遂舉行，筆者就山藥構(gòu)造造就歷程中的褐化征象及有用操縱等方面舉行了研究探究。1質(zhì)料與要領1.1質(zhì)料供試質(zhì)料為寸金薯葉片、莖段、零余子等常用組培外植體為質(zhì)料2，山藥品種寸金薯來自福建龍巖大池鎮(zhèn)。1.2要領2結(jié)果與闡發(fā)2.1差異外植體的褐化反響由此次試驗結(jié)果可知，使用山藥差異外植體舉行構(gòu)造造就時，其褐化的程度也差異。當外植體為含節(jié)間的莖段時，其褐化程度最輕，當外植體為切成小方塊的零余子時，褐化征象最嚴峻，葉片的褐化程

3、度居中。表1為此次試驗不雅察統(tǒng)計，由表中的原始數(shù)據(jù)可看出，零余子褐化程度極其嚴峻，在試驗不雅察歷程中創(chuàng)造接納零余子小塊為外植體的造就基均大面積出現(xiàn)黑褐色征象，乃至創(chuàng)造有外植體枯死。大概是由于自己零余子內(nèi)所含酚類物質(zhì)較多，再加上舉行接種前切成小塊質(zhì)料，損傷面較大，損傷面細胞中的酚類物質(zhì)，與氧氣聚合產(chǎn)生氧化反響，形成較多的有毒醌類物質(zhì)，擴散到造就基中，從而按捺別的酶的活性，迫害整個外植體構(gòu)造7,8。2.2差異外源物質(zhì)對褐化的按捺作用按照試驗不雅察結(jié)果，參加3種外源物質(zhì)在早期均能有用按捺外植體的褐化，但隨著造就時間的延伸，3種外源物質(zhì)按捺褐化作用開始分化，處置懲罰S+0.1%活性炭最早創(chuàng)造外植體褐化

4、，并且隨著造就時間的再次延伸，褐化征象越來越重，外植體基部造就基褐化塊直徑最大到達4；S+80g/L半胱氨酸組合在褐化按捺作用上較好于處置懲罰，此次試驗表示出最正確按捺結(jié)果的是A組合，即：S+150g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，其在造就早期創(chuàng)造只有2個樣本有略微褐化征象，并且隨著造就時間的漸漸增長，褐化程度表示也并不十明白顯，僅僅在造就35d擺布時，在外植體基部造就基出現(xiàn)了少量的褐化征象，并且褐化塊的直徑僅為0.8擺布，遍地理褐化按捺作用趨勢見圖1所示，組合B與組合的產(chǎn)生褐化均勻瓶數(shù)在同一造就時間段均高于組合A，同時組合A在造就20d至40d時間段出現(xiàn)褐化樣本數(shù)增幅不大，以是圖1組合A的按捺

5、作用趨勢圖也較組合B與組合安穩(wěn)，因此組合A對樣本褐化的按捺起到了較好的作用。2.3差異造就基質(zhì)對外植體褐化的影響外植體褐化征象在固體基質(zhì)造就與液體基質(zhì)造就兩種方法表示差異十明白顯，按照試驗結(jié)果，外植體的褐化程度在加了0.7%瓊脂的固體造就基中表示顯著大于液體造就基，在造就時間到達15d擺布時，外植體基部的固體造就基均出現(xiàn)較顯著的褐化征象，以外植體基部為中央，造就基褐化均勻直徑為1.5；造就時間漸漸延伸至30d，組培苗基部造就基褐化直徑到達了4擺布，部門組培苗出現(xiàn)輕度枯化征象。液體造就方法在造就時間到達30d時，未創(chuàng)造組培苗有顯著的褐化征象，外植體生長狀態(tài)精良，但造就時間達40d后，有少量外植體

6、出現(xiàn)枯化征象，緣故原由大概是因酚類物質(zhì)氧化反響產(chǎn)生的有毒醌類物質(zhì)在液體中輕易被稀釋，在短時間內(nèi)無法在液體造就基中形成一個有用作用濃度點，以是外植體生長狀態(tài)在一按時間內(nèi)正常。外植體褐化率與造就時間在固體造就與液體造就之間的區(qū)別如圖2所示，液體造就的外植體褐化率在30d后僅為3%擺布，而固體造就褐化率在此時間段到達了50%，兩種處置懲罰在圖2表示出的走勢有明顯區(qū)別，液體造就方法比固體造就方法更相宜山藥組培苗的快繁。3討論褐化是指植物構(gòu)造造就歷程中，由于外植體構(gòu)造被切割和接種快繁時，損傷切面細胞中酚類物質(zhì)底物在酚氧化酶的作用下與氧氣聚合而產(chǎn)生氧化反響，形成有毒的醌類物質(zhì)，外植體切面敏捷釀成棕褐色或暗

7、褐色，并漸漸擴散至造就基中，按捺別的酶的活性，導致構(gòu)造代謝紊亂，生長受按捺，終極致使外植體殞命5,9,10。構(gòu)造造就中按捺褐變要領如今已有大量的研究，如選擇相宜的外植體、造就溫度、PH值，造就時對外植體舉行屢次轉(zhuǎn)移，在造就基中添加防褐劑抗氧化劑，如抗壞血酸(V)、亞硫酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等4,6,11。但在山藥構(gòu)造造就中還鮮見相干按捺外植體褐化報道。研究表白，山藥構(gòu)造造就中差異外植體褐化程度也差異，山藥植株后期結(jié)出的零余子褐化程度最嚴峻，而其幼嫩節(jié)間部褐化程度最輕。在造就基中添加抗氧化劑均在一按時間內(nèi)能有用按捺外植體的褐化，但山藥外植體愈傷構(gòu)造分化的時間約莫為25d擺布2，以是，只有

8、S+150g/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)為最相宜配方。因山藥組培苗快繁周期約莫30d擺布2，而液體基質(zhì)造就方法正幸虧這一段時間內(nèi)能使有毒醌類物質(zhì)無法形成一個有用作用濃度點，因此，在山藥組培苗的快繁階段接納未加瓊脂的液體造就基能有用防范其褐化，進步成活率。褐化是植物構(gòu)造造就中較為普及的征象，要從根底上辦理這種褐化題目，需對褐化產(chǎn)生的緣故原由、生理生化、遺傳因素及植物品種等方面舉行更深化的研究。參考文獻1顏昌敬.植物構(gòu)造造就手冊.上海:上?？茖W技能出書社,1990.2蔡建榮,曾軍,等.懷山藥莖段構(gòu)造造就及增殖的研究J.福建農(nóng)業(yè)科技,2002,(2):14-15.3agerA,Harel.PlyphenlxidasesinplantsJ.Phytheistry,1979,18:193-215.5魯旭東.植物構(gòu)造造就中褐變的產(chǎn)生與防范J.農(nóng)業(yè)與技能,1999,19(4):9.