1、微生物臨床送檢標本的接種,張 瑞 君,微生物檢驗的質量保證,臨床標本的微生物學檢驗，與臨床標本的其它實驗室檢驗是一樣的，質量保證工作必須貫穿于實驗室工作的整個過程,包括分析前（標本的正確采集、運送）、分析中（培養(yǎng)、分離、鑒定和藥敏試驗等）和分析后（結果報告、解釋、臨床反饋）的質量管理。 在這三個階段對我們實驗起到至關重要作用的分析前質量，它是由臨床醫(yī)護人員來進行控制的，標本留取的正確與否、時機是否恰當都是由他們來監(jiān)控的。但是，我們完全可以在我們實驗之前，標本接收的時候對所接收的標本進行初步的質量控制，如從留取標本的容器、所留標本的外觀質量、等項目進行檢查。再一個非常重要的環(huán)節(jié)就是我們工作人員對

2、標本的接種，這將影響到檢驗結果的準確性、及時性、合理性，今天我將主要介紹一下我們微生物實驗室對臨床不同標本的初次接種。,2,分析后,一、微生物檢驗的質量控制,分析中,分析前,分析前階段按時間順序，該階段始于來自臨床醫(yī)師的申請，包括檢驗要求、患者準備、原始樣本采集、運送到實驗室并在實驗室內部的傳遞，至檢驗分析過程開始時結束。,保證檢驗項目申請的科學、合理性；根據(jù)臨床醫(yī)師的檢驗要求，患者的病情正確準備；原始樣本的正確采集及運送。,1.檢驗結果的正確發(fā)布；2.咨詢服務；3.檢驗樣品的保存及處理。,包括授權者應系統(tǒng)性的評審檢驗結果，評價其與可利用的患者有關臨床信息的符合程度，并授權發(fā)布；結果、原始樣品

3、與其它實驗室樣品的保存應符合經(jīng)批準的政策；不再用于檢驗樣品的安全處置應符合當?shù)仃P于醫(yī)療廢物處置法規(guī)和有關廢物管理的建議。,主要是指實驗室接到標本后檢驗分析開始到出具結果前的整個實驗過程。,定 義：,主要內容：,所有過程：,主要工作：,3,1. 取樣容器,二、微生物檢驗的相關用品,4,2.接種工具,接種環(huán),接種針,無菌拭子,酒精燈,二、微生物檢驗的相關用品,5,3.培養(yǎng)基,二、微生物檢驗的相關用品,6,（1）,（2）,分析中的質量控制,A、外 觀,C、容器的選擇,B、標 示,D、留取的標本量,A、正確的接種時間,B、選擇正確的培養(yǎng)基,C、選擇正確的接種方法,D、選擇正確的培養(yǎng)環(huán)境,E、正確的放置

4、培養(yǎng)基,三、微生物檢驗的接種要求,7,科別 姓名 床號 采樣時間,8/4 16:20,8/4 16:20,N 5-18 王xx,8/4 16:20,N 5-18 王xx,標 示,8,標 示,標本的標示 培養(yǎng)皿：急診不需編號，但一定要在培養(yǎng)皿上做標示，包括：科別、患者姓名、接種時間（日、時、分）； 化驗單：完整填寫樣本接收時間（日、時、分）,9,接 種 時 間,10,分離培養(yǎng)基,血瓊脂平板：,巧克力平板：,麥康凱平板：,SS瓊脂平板：,血液培養(yǎng)瓶：,適于給類細菌生長，一般細菌檢驗標本的分離，都應接種此平板。,其中含有和因子，適于接種疑有嗜血桿菌、奈瑟菌的標本。,有較強的抑菌力，用于志賀菌和沙門菌

5、的分離。因選 擇性過強，可影響檢出率，所以，使用時最好加一種弱選擇平板以配對互補。,用于血液、骨髓中分離常見病原菌。,具中等強度選擇性，抑菌力略強，有少數(shù)革蘭陰性菌不生長。在麥康凱平板上能否生長，是非發(fā)酵菌鑒定的一個依據(jù)。,11,接種方法,本法主要用于雜菌量較多的標本。 先將標本均勻涂布于平板表面邊緣一小區(qū)（第一區(qū)）內，約占平板1/5面積，再在二、三、.區(qū)依次連續(xù)劃線。每劃完一個區(qū)，均將接種環(huán)滅菌一次。每一小區(qū)的劃線均接觸上一區(qū)的接種線12次，使菌量逐漸減少，以獲得單個菌落。,平板劃線分離法,斜面接種法,液體接種法,穿刺接種法,傾注平板法,涂布接種法,連續(xù)劃線分離法,分區(qū)劃線分離法,本法主要用

6、于雜菌不多多的標本。 用接種環(huán)取標本少許，于平板平板1/5處密集涂布，然后來回做曲線連續(xù)劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。,常用于紙片法藥物敏感性測定,用于單個菌落的純培養(yǎng)、保存菌種或觀察細菌的某些特性,多用于一些液體生化試驗管的接種,測定牛乳、飲水和尿液等標本細菌數(shù),主要用于半固體培養(yǎng)基、明膠及雙糖管的接種,12,圖 示,13,正確的涂布結果,第一區(qū)： 各種細菌密集涂布，形成菌苔； 在后幾區(qū) 可見有所分離所有細菌的單個菌落。,14,錯誤涂法,15,正確的放置培養(yǎng)基,1、加蓋、倒置（底朝上） 3、放置于合適的培養(yǎng)環(huán)境 2、不可疊加太高（不超過4個）,16,四、各種標本的接種,1、痰、

7、咽拭子,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項,血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板,培養(yǎng)環(huán)境,35，5%10%CO2，1824h,分區(qū)劃線接種法,不可用棉拭子直接分區(qū)劃線； 不可不分區(qū)而連續(xù)劃線； 初始劃線一定要密涂；,盡快送檢 立即接種,17,四、各種標本的接種,2、尿液,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項,血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板,培養(yǎng)環(huán)境,35，1824h,連續(xù)劃線一次完成 定量接種法。標準接種環(huán)法。10ul，結果乘以100,不可用棉拭子直接劃線； 可不分區(qū)而連續(xù)劃線； 初始劃線一定要密涂；,盡快送檢 立即接種,18,四、各種標本的接種,3、分泌物,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項,血瓊脂平

8、板、麥康凱瓊脂平板,培養(yǎng)環(huán)境,35，1824h,分區(qū)劃線接種法,不可用棉拭子直接分區(qū)劃線； 不可不分區(qū)而連續(xù)劃線； 初始劃線一定要密涂；,盡快送檢 立即接種,19,四、各種標本的接種,4、糞便,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項,血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、ss瓊脂平板 不同的檢查目的，可選用不同的培養(yǎng)基,培養(yǎng)環(huán)境,35，1824h,分區(qū)劃線接種法,一般不作涂片檢查。雜菌多 不可用棉拭子直接分區(qū)劃線； 不可不分區(qū)而連續(xù)劃線； 初始劃線一定要密涂；,盡快送檢 立即接種,20,四、各種標本的接種,5、血液、骨髓,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項,雙相血培養(yǎng)瓶,培養(yǎng)環(huán)境,35，5%10%CO2，7天后方可

9、報告陰性,液體接種法,每日觀察血培養(yǎng)瓶的變化； 每日對血培養(yǎng)瓶進行顛倒混勻。,盡快送檢 立即接種,21,四、各種標本的接種,6、腦脊液,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項,血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板,培養(yǎng)環(huán)境,35，5%10%CO2，1824h,分區(qū)劃線接種法,不可冷藏 不可用棉拭子直接分區(qū)劃線； 不可不分區(qū)而連續(xù)劃線； 初始劃線一定要密涂；,盡快送檢 立即接種,22,四、各種標本的接種,7、胸水、腹水、心包液、關節(jié)腔積液等,接種培養(yǎng)基,接種方法,注意事項,血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、可選擇血培養(yǎng)瓶,培養(yǎng)環(huán)境,35，5%10%CO2，1824h,分區(qū)劃線接種法,不可冷藏 不可用棉拭子