1、 上海交通大學博士學位論文Apelin-13對大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響及其機制的研究姓名：李卉申請學位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學（心血管?。┲笇Ы處煟悍轿ㄒ?0090401 是年 個氨基酸原前體肽，在體內(nèi)被分解為一，一，在心肌缺血再灌注損傷中的作用及作用機粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的實驗依據(jù)及新的臨床應用思路。 對心肌梗死面積，心肌細胞凋亡的影響方法取雄性大鼠，隨機分為假手術組，對照組組， 目的探討一對大鼠缺血再灌注心肌保護效應的機制，是否，及對線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的影響?，G 結(jié)果照組明顯減少，組，組及組相對梗死面積與對照組相比無顯 上海交通大學博士學位論文 ， 一， 疭 ：琻琣 籺琲， 琩琻：， 珽，甃

2、琍 琣，琺 縮略詞表線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔 蝞曲再灌注損傷搶救激酶 日期： 本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權上海交通大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。不保密囪。、學位論文作者簽名：蒼哥 對心血管系統(tǒng)功能的影響，他們予麻醉的 】琇珹疐，【縎，瓹： 上海交通大學博士學位論文，琍 一對大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響血供后并不是完全有益的，缺血再灌注過程中會導致所謂的心肌缺血再灌注損傷。心肌缺血再灌注后，心肌細胞

3、功能、代謝障礙及形態(tài)結(jié)構破壞反而加重。如何做到既保證盡早恢復缺血組織的血流，又減輕再灌注損傷的發(fā)生便成為缺血性心臟病防治中所要解決的又一重要課題。有效防治再灌注損傷的重要前提是闡明其發(fā)病機制。因此，關于痭損傷病理機制的研究越來越受到 于雙蒸水中，調(diào)定值到。疽海壕艸迫克尤氳冰箱避光保存?zhèn)溆?。磷酸鹽緩沖液染液：精密稱取薊疭主要儀器設備和耗材 假手術組：開胸置縫線而不結(jié)扎，頸靜脈給予同等容量生理鹽水。參照文獻嘲，略做改動，大鼠稱重，戊巴比妥腹腔注射分離皮下喉部肌肉，暴露氣管，氣管切開，接人工呼吸機，呼吸頻率再灌注結(jié)束后，再度開胸，重新原位結(jié)扎前降支，從左室心 琇，缺再灌注結(jié)束后，垂直于心臟長軸中線處

4、切下厚度心肌組織，行約茲潭諧媸瘢到正常細胞核呈藍色，凋亡細胞胞核呈深淺不一的棕褐色。每個標本觀 軟件分析，計算凋亡細胞數(shù)占總細胞數(shù)百分比，取其平均值為心肌細胞凋亡指數(shù)，以此反應凋亡程度。具體操作步驟如下：尤氳鞍酌窴工作液，孵育琍沖洗，巍蛋白 胄屢淶姆獗找褐封閉內(nèi)源性過氧化酶，室溫封閉琍 避光反應琍沖洗，需新琍沖洗，次。工作液，滴于切片上，覆蓋組織，室溫顯色，畉櫳孿逝渲統(tǒng)計學方法：數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)標準差硎荊肧 一 亡指數(shù)分別為繭和，二者之間差異有統(tǒng)計學意義 門染色結(jié)暴，紅色箭頭示謂亡細胞核鷇琑痯 櫚蟯鮒甘謀冉希篜 發(fā)癥而死亡。 可避免地要結(jié)扎部分心肌造成心肌損傷均可使段抬高，從而產(chǎn)生干擾。所以，

5、焦谷氨酸所替代，使其生物活性作用增強，主要作用于心血管系統(tǒng)。廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及各種外周組織中，能通過旁分泌、自分泌形式而發(fā)揮作用，具有降低血壓，擴張血管，調(diào)節(jié)飲食攝入，水鹽代謝及體液平衡，呼吸及生物節(jié)律等多種生物學效應，其在心血管系統(tǒng)，下丘腦及脂肪胰島軸中的作用尤為重要。大量的早期研究集中在及諦腦嗉把9艿姆植技捌鋗的表達上，目前的研究多數(shù)集中在對心血管系統(tǒng)功能的調(diào)節(jié)作用。國外許多研究證實具有很強的正性肌力作用，能夠降低收縮壓及舒張壓。 氟醚后處理不僅具有心肌保護作用，而且它的機制可能與途徑的激活以及做為鞍遵盍J芴錋的配體，在心肌缺血再灌注損傷中的作用雙重染色法測定心肌梗死面積 一組與對照

6、組相比較，缺血危險區(qū)面積與左室面積的 ，：】，琹 瑀】瓸琈縇 ，瓵縅疨瓸， ，【】縃瓵 現(xiàn)猼琫瑀，琍 琙籥 琣， ，一縎 在心肌再灌注損傷中起著極為重要的保護作用，上述這些保護方法均能夠活 鹽均能消除缺血后處理的減少心肌梗死面積的效應，證明缺血后處理的心肌保、和等。等研究發(fā)現(xiàn)在 學作用，尤其是在心血管系統(tǒng)中具有重要的調(diào)節(jié)作用。具有正性肌力， 狤兔抗大鼠多克隆抗體辣根過氧化物酶劑I窖蚩雇肐種萍種萍英國公司美國公司美國公司碧云天生物技術研究所碧云天生物技術研究所美國公司美國公司粉 ：，甘氨酸琁 琒封閉液：閻譚郟電轉(zhuǎn)儀甉超純水器 上海上凈凈化公司四川亞西橡塑機器有限公司低溫設備廠痥，注射一痥。注射痥

7、。組：再灌注前本猜鱟鋋 方法檢測珽甽癎將上清吸出至的管中，胄；取上清，分裝樣品制備：調(diào)整樣品蛋白質(zhì)濃度使其接近，每個樣品孔保證蛋白上樣郾紡旱纈狿將玻璃板洗干凈，固定于電泳槽上； 使凝膠的上下端均能浸，在未加樣孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應；電泳：將電壓調(diào)至比玖锨把亟敕擲虢漢螅分鐘，取出凝膠于最左邊一孔凝膠下部切去一角以標示凝膠的方向；濃縮膠濃度鞍字蝕覵聚丙烯酰胺凝膠轉(zhuǎn)移至固相支持體 后用玻璃移液管作滾筒，擠出濾紙間的所有氣泡；凝前的左下角置于膜的標記角上，排除氣泡；取出膜在中洗滌?；加入H標記的羊抗兔二抗 顯影半定量吸去液體，置入上襝低持釁毓猓雜昂蠊鄄旖峁肔將細胞液從培養(yǎng)皿中吸出放入離心管

8、，充分混勻，用細胞計數(shù)板 激光共聚焦顯像觀察心肌線粒體膜電位的變化饔檬奔湮。饔檬奔湮。蠹尤際： 一對心肌梗死面積的影響得鱝芄凰跣爛婊珹櫸直鷂，鑫狦缺血再灌注后各組心肌梗死面積的比較， 表達的影響方法檢測琾琾的表達 的表達較槊饗栽齦，組及組 雩： 法檢測蛋白的表達囤各組嘍怨餉芏戎檔謀冉希 芎嘍怨餉芏戎檔謀冉?，t口一對心肌細胞線粒體膜電位的影響猯：；對氧化應激引起的線齄體膜電位變化的影響 圈激光共聚焦顯微鏡觀察氧化應激引起的線粒體膜電位的變化卸 痳 吵卜圈缺氧復氧引起的三組熒光強度變化的比較，口 與途徑時，這些激酶被激活而抑制細胞的凋亡，稱為再灌注損傷挽救激酶化肌醇磷脂肌醇環(huán)上的而得名，是一個包括

9、許多脂質(zhì)激酶的家族。此激酶家族有多種亞型，可分成類，類，類，唷鏘類梢桓齙鶻諮腔和一個催化亞基組成。當酪氨酸激酶受體被配體激活后，結(jié)合并激活驪荒技僥澆隤結(jié)合形成異二聚體，隨之活化，催化膜表面的磷酸肌醇二磷酸使土字家覽敵約竘猟一珿一 等，抑制線粒體保瓹的釋放，阻斷凋亡的發(fā)生。而當應用特異性信號 及厝舊舛募爛婊謅組梗死面積為具有保護缺血再灌注損傷心肌的效應。方法檢測琾蛋白的表達結(jié)果發(fā)現(xiàn)榱秸叩謀澩錁隙哉兆槊饗隕，進一步驗證了亡，縮小心肌梗死面積，產(chǎn)生保護心肌效應，結(jié)果與等研究結(jié)果一 糖原合成酶激酶一屬于保守絲氨酸蘇氨酸激酶家族，這一酶家族木返鶻諞覽滌贕是否也通過激活萊藕磐揪蹲饔糜贕前國內(nèi)外還沒有報道。

10、本實驗發(fā)現(xiàn)再灌注時給予一可以使的表達增加，預先給予抑制劑或者種萍罰后，取消了一的這種作用，做為面積，說明表達增加，使其失活，從而縮小梗死面積，用靶點。 凋亡和壞死啪醒芯勘礱魅毖!毖醯賈碌南赴鸆藁姿嵫巍以損傷模型證實再灌注損傷拯救激酶的激活可抑制再灌注期間的開放。幕钚裕裥砸鏌種艷信號轉(zhuǎn)導作用，確切作用還需要進一步研究。隨后又有一系列的研究報道預適 方法檢測到 ，篈疓 琘 ， 簍瓹，【縈珿 瓹，： 甁甁，縋：縁 瓹，琇【】，縎疉 珻狣【】瓸鋤， 甴能夠保護缺血再灌注心肌，縮小心肌梗死面積，抑制心肌細胞凋瓵通過激活珽信號轉(zhuǎn)導途徑保護再灌注心肌。是一心肌保護作用機制的中間連接點，其上游調(diào)節(jié)通路是臼笛槎

11、栽諤宕笫驲癎的磷酸化情況的觀察應在再灌注末多個價 對心血管功能具有重要的調(diào)節(jié)作用，在一些心血管疾病中如心衰，高血壓等中也扮演著重要角色。與肥胖，糖脂代謝均有著密切， 前體一，較常見。在體內(nèi)同樣條件下產(chǎn)生的長、短肽于心血管系統(tǒng)。在低氧時，低氧誘導因子一筧虻謀澩鐫黽涌。在哺乳期，上游 分解為短的似魏蚢的啟動子。餛恃篴虯的組織學分布 的心臟作用的血管作用 是強效的動靜脈擴張劑。刃予清醒大鼠靜脈注射，及平均循環(huán)充盈壓呈劑量依賴性下降，證明然而，的血管作用是復雜的，遠遠不止激活那么簡單。在人以上研究說明，在血管內(nèi)膜受損時，直接作用于平滑肌細胞，肌動蛋白輕鏈磷酸化使血管收縮，在血管內(nèi)膜完整時，引起內(nèi)皮細胞釋放，在心衰時的表達 在心衰時的作用 度，發(fā)現(xiàn)在穩(wěn)定性心絞痛組濃度較正常組降低，通過條件回進一步的研究。與心肌缺血一再灌注損傷一再灌注模型中發(fā)現(xiàn)再灌注時予彈丸式注射 因此，而褐色脂肪組織表達水平很低。上述研究說明，確實是新的脂與健康的個體相比，單純高脂血癥的患者血漿確診冠心病的血透病人，血漿中取入選