1、實(shí)驗(yàn)三土壤微生物的分離與純化,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?二、實(shí)驗(yàn)原理 三、實(shí)驗(yàn)器材 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 六、 思考題,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.學(xué)習(xí)從混雜的微生物群體中分離與純化微 生物菌種的方法。 2.綜合練習(xí)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的各種無(wú)菌操作技術(shù)。,二、實(shí)驗(yàn)原理,土壤是微生物生活的大本營(yíng)，為了獲得某種微生物的純培養(yǎng)，一般是根據(jù)該微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑，淘汰其他一些不需要的微生物，再用各種方法分離、純化該微生物，直至得到純菌株。,稀釋涂板法、稀釋混合平板法、劃線(xiàn)分離,三、實(shí)驗(yàn)器材,實(shí)驗(yàn)材料：新鮮土壤。 培養(yǎng)基：滅菌的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、高氏一號(hào)培養(yǎng)基

2、、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。 實(shí)驗(yàn)儀器與用具 無(wú)菌水：帶有玻璃珠裝有90ml無(wú)菌水三角瓶、裝有9mL無(wú)菌水的試管。 其它：無(wú)菌培養(yǎng)皿、無(wú)菌吸管、無(wú)菌三角玻棒、電子天平、記號(hào)筆、接種環(huán)、酒精燈、火柴等,四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,稀釋涂板法 稀釋混合平板法（混菌法） 劃線(xiàn)分離 微生物的培養(yǎng),各濃度做三個(gè)平皿,挑選單菌落接種斜面,實(shí) 驗(yàn) 總 流 程,從土壤分離微生物操作過(guò)程,制備土壤稀釋液： 1. 稱(chēng)取土壤10g，放入90mL無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩 20min，即為稀釋10-1的土壤懸液。 2. 另取裝有9mL無(wú)菌水試管5支，用記號(hào)筆分別編上10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。取已稀釋成10-1的土壤液，

3、振蕩后靜止0.5min，用無(wú)菌吸管吸取1mL土壤懸液加入10-2的無(wú)菌水的試管中，并在試管內(nèi)輕輕吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成10-2土壤稀釋液。同法依次連續(xù)稀釋至10-3 10-4、10-5 、10-6土壤稀釋液。 在土壤稀釋過(guò)程中，需換用不同的吸管（或槍頭）,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1（微生物的分離稀釋涂平板法）,倒平板,將培養(yǎng)基加熱融化，待冷卻至5560 時(shí)，倒平板。,吸取稀釋液取一吸管，以無(wú)菌操作法分別吸取10-4、10-5、 10-6土壤稀釋液0.1mL，加在已制好的平板培養(yǎng)基上。 涂板用玻璃刮鏟將稀釋液在培養(yǎng)機(jī)上充分混勻鋪平，倒置于恒溫箱培養(yǎng)。 計(jì)算出每克土壤中細(xì)菌的數(shù)量。即用某一培養(yǎng)皿內(nèi)真菌的菌落

4、數(shù)乘以該培養(yǎng)皿接種液的稀釋倍數(shù)即得。 挑取單個(gè)菌落，進(jìn)行劃線(xiàn)分離。,微生物的分離平板涂抹法,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容2（微生物的分離混合法）,吸取稀釋液 以無(wú)菌操作法分別吸取10-4、10-5 、 10-6土壤稀釋液0.1mL，加在滅菌的空培養(yǎng)皿中。 倒入已融化的培養(yǎng)基 混菌 在平坦的桌面上，水平輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液、培養(yǎng)基充分混勻鋪平，凝固后倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 計(jì)算出每克土壤中放線(xiàn)菌的數(shù)量。 挑取單個(gè)菌落，進(jìn)行劃線(xiàn)分離,混勻凝固,2830 培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)內(nèi)容3（微生物的分離平板劃線(xiàn)法）,制平板。 凝固后，用接種環(huán)取相應(yīng)的菌液一環(huán)（10-1）在平板上劃線(xiàn)。 1.連續(xù)劃線(xiàn)法：將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基

5、表面作連續(xù)劃線(xiàn)。完畢后，倒置于28300C溫室培養(yǎng)。 2.分區(qū)劃線(xiàn)法：用接種環(huán)以無(wú)菌操作挑取土壤稀釋液1環(huán)，先在培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線(xiàn)34條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約600C角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過(guò)第一次劃線(xiàn)部分作第二次劃線(xiàn)會(huì)，同法依次作第三次和第四次劃線(xiàn)。劃線(xiàn)完畢，蓋上皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)。 挑取單個(gè)菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，如果不純，再移植純化，最后得到純培養(yǎng)。,平板劃線(xiàn)菌落分離效果圖,挑取單個(gè)菌落接種于斜面培養(yǎng)基上，如果不純，再移植純化，最后得到純培養(yǎng)。,五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果,1.你所做的涂布平板法和劃線(xiàn)法是否得到了單菌落？如果不是請(qǐng)分析其原因并重做。 2.在三種不同平板培養(yǎng)基上你分離得