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1、實驗一 血清免疫球蛋白IgG的提取,目的,掌握血清免疫球蛋白IgG提取原理； 熟悉血清免疫球蛋白IgG提取操作過程和方法,原 理,IgG是血清中主要的免疫球蛋白，占全部抗體含量的7075，在臨床免疫學(xué)檢驗技術(shù)中常用到的第二抗體就是通過用純化人IgG作抗原免疫動物而來 分離純化IgG的技術(shù)有多種，通常采用綜合技術(shù)，其中鹽析沉淀法常用于IgG的粗制品的提取,原理,蛋白質(zhì)顆粒在水溶液中 親水膠體 蛋白質(zhì)顆粒在鹽溶液中 既不含水膜又不帶電荷的不穩(wěn)定顆粒,蛋白質(zhì)在不同濃度的鹽溶液中相對溶解度不同，血清免疫球蛋白主要為球蛋白，它在一定濃度中性鹽溶液中易于沉淀，而其他蛋白質(zhì)組分在此時不易沉淀，通過離心可將兩

2、者分離。,原理,材料,樣本 正常人血清 試劑 生理鹽水、飽和硫酸銨溶液、 透析緩沖液 主要器材 離心機(jī) 冰箱 透析袋 紫外分光光度計等,操作步驟,1.25ML血清1.25ML生理鹽水 滴加飽和硫酸銨溶液2.5ML,棄去上清液（含清蛋白）,沉淀溶于生理鹽水,使體積達(dá)1.25ML 滴加飽和硫酸銨溶液0.625ML,棄去上清液（、球蛋白）,沉淀（球蛋白及少量球蛋白）,上清液（球蛋白）,沉淀為球蛋白,室溫靜置30min, 離心4000rpm,10min,重復(fù)一遍,紫外分光光的計測定蛋白含量,沉淀放入透析袋， 充分透析，去除NH4+,室溫靜置30min, 離心4000rpm,10min,注意事項,蛋白質(zhì)的濃度、鹽的濃度、PH值、溫度對鹽析的效果有影響 飽和硫酸銨溶液的滴加方式 鹽析后放置時間、離心操作的速度、時間 透析袋的使用,方法評價,硫酸銨水中溶解度高，受溫度影響小，不易使蛋白質(zhì)變性，操作簡單，為鹽析中常用的中性鹽 硫酸銨中含有氮，會干擾蛋白質(zhì)的測定，且溶液的緩沖能力差，故多用于大量蛋白的粗提。若要獲得純化的免疫球蛋白，必須經(jīng)過凝膠過濾、離子交換層析和親和層析進(jìn)一步提純,結(jié)果判斷,效價可用免疫雙擴(kuò)散試驗判斷 特異性則可通過雙擴(kuò)、免疫電泳或交叉凝集試驗進(jìn)行考察,思

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