1、分類號(hào)學(xué)位論文密級(jí)指導(dǎo)教師姓名迕垣麴握（監(jiān)昱直昌盔堂！焦琺金嬰童院申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別亟專業(yè)名稱盒昌型堂論文提交日期互生且論文答辯期魚生魚目學(xué)位授予單位和日期直昌盔堂互生且日答辯委員會(huì)主席評(píng)閱人年月南昌大學(xué)級(jí)碩士論文陋：縮略語(yǔ)曲一血黃曲霉毒素黃曲霉毒素，牛血清白蛋白辛酸一硫酸銨沉淀酶聯(lián)免疫吸附法膠體金免疫層析高效液相色譜辣根過(guò)氧化物酶抑制濃度免疫球蛋白異丙基硫代半乳糖癌癥研究機(jī)構(gòu)培養(yǎng)基肝細(xì)胞癌變半數(shù)致死劑量單克隆抗體硝酸纖維素膜吸光度磷酸緩沖液磷酸緩沖液吐溫聚乙二醇噬菌斑形成單位噬菌體展示聚丙烯酰胺凝膠電泳緩沖鹽溶液薄層層析法世界衛(wèi)生組織。溴氯一一吲哚一半乳糖苷南昌大學(xué)級(jí)碩士論文摘要黃曲霉毒素（，簡(jiǎn)稱

2、）是真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物，主要由黃曲霉、寄生曲霉和特曲霉產(chǎn)生，廣泛存在于花生、棉籽、玉米、小麥和稻米等農(nóng)產(chǎn)品中。因具有強(qiáng)烈的毒性和致癌性，年被世界衛(wèi)生組織（）的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為類致癌物。是一類結(jié)構(gòu)類似化合物，已經(jīng)分離鑒定出黃益霉毒素（，簡(jiǎn)稱）、等二十余種，其中以毒性最強(qiáng)。為了防止含量超標(biāo)的農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)入人類食物鏈，許多國(guó)家已經(jīng)制定了農(nóng)產(chǎn)品中的限量標(biāo)準(zhǔn)。因此，建立一種快速檢測(cè)的方法具有重要意義。本論文研究的內(nèi)容主要包括以下兩個(gè)方面：膠體金免疫層析快速檢測(cè)方法的研究）利用辛酸硫酸銨鹽析法純化小鼠腹水中抗單克隆抗體，分別采取間接非競(jìng)爭(zhēng)和對(duì)純化后抗體的活性和純度進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示抗體和腹水效價(jià)分別為：和：

3、，圖譜顯示兩條帶，分別為抗體的重鏈和輕鏈。（采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金。膠體金標(biāo)記抗體經(jīng)純化后，使用點(diǎn)噴平臺(tái)系統(tǒng)將金標(biāo)抗體噴在玻璃纖維膜上；將一（檢測(cè)線）和驢抗鼠（質(zhì)控線）分別噴在硝酸纖維素膜（，）上，檢測(cè)線和質(zhì)控線兩者之間相距。干燥后依次將、玻璃纖維（膠金墊）、樣本墊、濾紙、吸水紙粘貼在膠板上，使用切刀切成的試紙條，裝入檢測(cè)卡中密封保存。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)確定了試紙條的工藝參數(shù)，具體如下：膠體金粒徑為，膠體金標(biāo)記抗體量為斗，膠體金標(biāo)記抗體純化后稀釋至值為，型號(hào)為，上包被和驢抗鼠的濃度分別為、。由上述條件組裝的試紙條最低檢測(cè)限為，與赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、桔霉素、展青霉毒

4、素?zé)o交叉反應(yīng)，重復(fù)性為。根據(jù)試紙條行業(yè)經(jīng)驗(yàn)推算，試紙條在可保存?zhèn)€月。（）分別用試紙條和方法檢測(cè)份樣品中的含量，用甲南昌大學(xué)級(jí)碩士論文醇一水（：，含氯化鈉）提取，離心后取上清。用稀釋上清液，使甲醇含量為，即為試紙條和的樣品測(cè)定液。通過(guò)試紙條檢測(cè)，份樣品中僅號(hào)花生和號(hào)花生樣品呈陽(yáng)性，其它樣品均為陰性。經(jīng)測(cè)定，號(hào)花生和號(hào)花生樣品中含量分別和（此測(cè)定值指樣品測(cè)定液中的含量），其它樣品中含量均低于，兩種方法的檢測(cè)結(jié)果一致。采用噬菌體隨機(jī)展示肽庫(kù)淘選模擬表位（）以抗單克隆抗體為靶分子，從噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)中進(jìn)行輪親和淘選。從第輪噬菌平板上隨機(jī)挑選個(gè)噬菌斑，經(jīng)間接和間接競(jìng)爭(zhēng)鑒定，獲得了個(gè)能與抗，單克隆抗體結(jié)合的

5、陽(yáng)性噬菌體克隆，其中個(gè)能被黃曲霉毒素抑制，分別為（）、和。（）提取上述個(gè)噬菌體的，進(jìn)行測(cè)序。根據(jù)噬菌體文庫(kù)簡(jiǎn)要遺傳密碼將插入的序列翻譯成氮基酸序列。結(jié)果顯示和為同一序列，并與、展現(xiàn)出（）共有序列，其中為任意氨基酸。（）用上述個(gè)噬菌體替代?？乖謩e建立間接競(jìng)爭(zhēng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果顯示競(jìng)爭(zhēng)曲線最好，其線性范圍為，。為，檢測(cè)下限為。（）用替代一建立分析方法，進(jìn)行樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，回收率在之間。用此方法檢測(cè)了份樣品中，的含量，結(jié)果顯示僅有份花生樣品中的含量超過(guò)我國(guó)規(guī)定的限量標(biāo)準(zhǔn)，。關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素單克隆抗體膠體金免疫層析噬菌體展示肽庫(kù)模擬表位墮墨查蘭！竺！望雯主笙苧聊，（），：（）（），（），：，（），（

6、）（）：，“咖，（），】，（），（），（：，）南昌大學(xué)級(jí)碩士論文，（）（）“，（），）（）腳，（），（）（：口南昌大學(xué)級(jí)碩士論文第一章黃曲霉毒素。膠體金免疫層析方法的研究第一節(jié)文獻(xiàn)綜述黃曲霉毒素及其研究進(jìn)展黃曲霉毒素（，簡(jiǎn)稱）是真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物，主要由黃曲霉（、寄生曲霉（）口特：霉（）產(chǎn)生”。廣泛存在于花生、棉籽、玉米、小麥和稻米等農(nóng)產(chǎn)品中，是目前化學(xué)致癌物中最強(qiáng)的一種致癌誘變劑，其毒性比氰化鉀強(qiáng)倍，比工業(yè)堿（砒霜）強(qiáng)倍；其致癌性：甲基亞硝胺強(qiáng)倍，比二甲基偶氮苯強(qiáng)倍。對(duì)它們的了解可追溯到年，在英國(guó)東南部的農(nóng)村中，約有十萬(wàn)只火雞在幾個(gè)月內(nèi)，死于一種原因不明的疾病，當(dāng)時(shí)叫做“火雞病”。非洲的肯尼

7、亞和烏干達(dá)也在小鴨中發(fā)現(xiàn)這種類似的疾病，鴨子死亡很多。當(dāng)吲進(jìn)行有關(guān)農(nóng)藥、病毒、致病微生物等的檢查，均未找到原因。仔細(xì)凋查后發(fā)現(xiàn)，這種早期火雞病的流行都與倫敦的一家碾粉廠供應(yīng)的飼料有關(guān)，而該碾粉廠所供應(yīng)的飼料都含有從巴西運(yùn)來(lái)的花生粉。用這種花生粉對(duì)小雞和小鴨進(jìn)行實(shí)驗(yàn)后，證明都具有強(qiáng)烈的毒性，呈現(xiàn)出典型的“火雞病”癥狀，并從花生粉中分離出產(chǎn)毒的黃曲霉和黃曲霉毒素科。從此，引起了世界人們廣泛的關(guān)注和高度重視。黃曲霉毒素的化學(xué)結(jié)構(gòu)及性質(zhì)翻黃曲霉毒素是一類結(jié)構(gòu)類似的化合物，在紫外線下都發(fā)熒光。根據(jù)熒光顏色及其結(jié)構(gòu)分別命名為黃曲霉毒素（）、】、毒醇、等。目前已分離鑒定出的有二十余種，其中。毒性最強(qiáng)（圖）。

8、黃曲霉毒素的相對(duì)分子質(zhì)量為，幾乎不溶于水，易溶于油和一些有機(jī)溶劑，如氯仿和甲醇，但不溶于乙醚、石油醚和正己烷。在紫外線下，、發(fā)藍(lán)色熒光，、發(fā)黃綠色熒光。母體的基本結(jié)構(gòu)為二呋哺環(huán)和香豆素，其中是二氫呋喃氧雜萘鄰?fù)难苌?，含有一個(gè)雙呋喃環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰?fù)ㄏ愣顾兀Ｇ罢吲c毒性和致癌性有關(guān)，后者加強(qiáng)了前者的毒性和致癌性。這類毒素因含有大環(huán)共軛體系，熱穩(wěn)定性非常好，分解溫度為。南昌大掌級(jí)碩士論文【黃曲霉毒素，黃曲霉毒素：黃曲霉毒素黃曲霉毒素黃曲霉毒素，黃曲霉毒素二圖黃曲霉毒素，：，】的分子結(jié)構(gòu)式垃，黃曲霉毒素中毒及其對(duì)人畜的危害由于具有強(qiáng)烈的毒性和致癌性，年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織（）的癌癥研究機(jī)構(gòu)

9、（，）劃定為類致癌物。的靶器官是動(dòng)物的肝臟，可導(dǎo)致肝炎，肝硬化，肝壞死等。臨床表現(xiàn)有胃部不適、食欲減退、惡心、嘔吐，腹脹及肝區(qū)觸痛等；嚴(yán)重者出現(xiàn)水腫、昏迷，以至抽搐而死。受損害的個(gè)體因動(dòng)物種類、年齡、性別和營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)而有很大的差異。比較敏感的動(dòng)物為雛鴨、兔、貓、小豬。以雛鴨為對(duì)象，半致死劑量（）為毫克公斤體重。據(jù)美國(guó)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)家統(tǒng)計(jì)，由于食用污染的飼料，每年至少要使美國(guó)畜牧業(yè)遭受的經(jīng)濟(jì)損失。在我國(guó)，由此而帶來(lái)的畜牧業(yè)損失可能會(huì)更大一。在發(fā)展中國(guó)家，食用被污染的食物與癌癥的發(fā)病率呈正相關(guān)性。亞洲和非洲的疾病研究機(jī)構(gòu)的研究工作表明，食物中與肝細(xì)胞癌變（“。，）呈正相關(guān)性。流行病學(xué)研究顯示，熱帶和亞熱

10、帶（非洲東部與東南亞）人群中肝癌的發(fā)病率與每日膳食中的攝入量存在正相關(guān)關(guān)系，。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文黃曲霉毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)由于的危害及分布的廣泛性，世界各國(guó)非常重視食品和飼料中的含量標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題。世界各國(guó)大都制定了限量標(biāo)準(zhǔn)，要求很嚴(yán)格。我國(guó)也對(duì)有關(guān)食品和飼料中的允許量作了規(guī)定。我國(guó)對(duì)食品中的最高允許含量見表：表中國(guó)對(duì)食品中】的最高允許含量【】品種限量（，）玉米、花生及其制品大米、植物油（除玉米油、花生油）其它糧食、豆類、發(fā)酵食品嬰幼兒配方食品不得檢出我國(guó)飼料和飼料添加劑中的允許量見表：表中國(guó)的飼料和飼料添加劑中的允許含型產(chǎn)品名稱標(biāo)準(zhǔn)，）試驗(yàn)方法黃曲霉毒素的污染及防控黃曲霉毒素的污染世界各國(guó)的農(nóng)產(chǎn)品普遍受

11、到的污染，通常在熱帶和亞熱帶地區(qū)食品污染較為嚴(yán)重，其中以花生和玉米污染率最高。年在個(gè)省的糧食中分離得到株黃曲霉中，以廣西地區(qū)產(chǎn)毒的黃曲霉最多，檢出率為。年我國(guó)對(duì)部分省市（廣西、江蘇、河北、北京）的糧油食品中的進(jìn)行了調(diào)查，結(jié)果花生樣品污染率為，玉米污染率僅為，而且其污染水平未超過(guò)我國(guó)現(xiàn)行食品中允許量（）標(biāo)準(zhǔn)?！侩S機(jī)抽檢了南昌大學(xué)級(jí)碩士論文卡塔爾市場(chǎng)上的份樣品（谷物、堅(jiān)果、香料等），檢測(cè)結(jié)果顯示份樣品被黃曲霉毒素污染，含量為。（）等【隨機(jī)抽檢了尼日利亞市場(chǎng)的份有殼瓜子樣品，檢測(cè)結(jié)果顯示，的含量超過(guò)，的樣品占，超過(guò)的樣品占。黃藍(lán)霉毒素的防霉去毒為了防止對(duì)食品的污染，最根本的措旌就是防霉，去毒只是在污

12、染后防止人類受害的補(bǔ)救辦法。的產(chǎn)生和污染程度受地區(qū)、季節(jié)以及作物生長(zhǎng)、收獲、貯存等條件影響。有研究表明，當(dāng)溫度在，相對(duì)濕度在以上時(shí)，產(chǎn)量最高。因此糧食作物收獲后不能長(zhǎng)時(shí)間堆放在田間，應(yīng)及時(shí)運(yùn)到場(chǎng)地上麗于或烘干，使水分達(dá)到平衡水分以下，同時(shí)要控制溫度在以下。在收獲、運(yùn)輸、貯存過(guò)程中，還要注意保持作物的完整性，這樣就可有效地防止霉菌的生長(zhǎng)與產(chǎn)毒。去毒方法大致分為物理方法、化學(xué)方法和生物學(xué)方法。物理去毒方法有大米碾白法、水浸搓洗法、揀除霉粒法、烹調(diào)去毒，其中以水浸搓洗法的效果較為顯著。北京糧科所利用水洗加搓洗次可使的，污染的大米去毒吼在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，物理方法的去毒效果不理想，因此采用化學(xué)方法較為居

13、多，其中包括加酸法、加氧化劑、加二硫化物、加鹽法以及加堿法。馮定遠(yuǎn)【】報(bào)道添加次氯酸鈉處理含有黃曲酶毒素的花生餅、，分別使黃曲霉毒素總量減少、和，。雖然物理方法和化學(xué)方法都能有效地去除一定的，但是這類方法對(duì)食品的色、香、味以及營(yíng)養(yǎng)成分均有不同程度的破壞和不良影響。因此，人們希望采用生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)以及生物分子學(xué)的方法對(duì)進(jìn)行體外生物化學(xué)轉(zhuǎn)化，姒期達(dá)到更安全有效的解毒目的。在這方面研究最早的研究組報(bào)道，喂食含化學(xué)抗氧化劑叔丁基對(duì)甲酚（）、，二叔丁基對(duì)甲酚（）等飼料的大鼠抗的能力有所提高。這些抗氧化劑可誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶：亞基（）的表達(dá)，使其對(duì)一，環(huán)氧化物表現(xiàn)出高催化活性，從而該酶可有效得

14、抑帶，與口結(jié)合【】。最近發(fā)現(xiàn)真菌粗酶（多酶混合物）是一種可在體外直接對(duì)進(jìn)行解毒的多酶混合物，它使樣品中的含量明顯減少。宋艷萍等】選擇活性炭作為固定真菌粗酶的載體，利用固定化真菌解毒酶法去除花生油中，含為南昌大學(xué)級(jí)碩士論文的油樣經(jīng)固定化真菌粗酶柱處理后的含量降低到班以下。有文獻(xiàn)報(bào)道某些乳酸菌能去除一定的黃曲霉毒素。李志剛等【】將乳酸菌細(xì)胞與黃曲霉毒素在生理鹽水中相混合，在振蕩培養(yǎng)冪后檢測(cè)生理鹽水中黃曲霉毒素的含量。結(jié)果表明，在使用的株乳酸菌中，乳酸菌結(jié)合黃曲霉毒素的強(qiáng)度在之間，其中干酪乳桿菌干酪亞種吸附黃曲霉毒素，能力最強(qiáng)。黃曲霉毒素的檢測(cè)方法黃曲霉毒素的檢測(cè)方法包括薄層色譜法（）、高效液相色譜

15、法（）、酶聯(lián)免疫吸附法（）、微柱法、紫外分光光度法、免疫親和柱一熒光法和免疫親和柱一法以及膠體金免疫層析法等。目前，主要采用的是、和。薄層色譜法是在世紀(jì)年代發(fā)展起來(lái)的，該方法針對(duì)不同的樣品，用適宜的有機(jī)溶劑把從樣品中提取出來(lái)，經(jīng)純化再在薄層板上展開層析、分離，利用的熒光性，根據(jù)熒光斑點(diǎn)的強(qiáng)弱，與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較測(cè)其含量。我國(guó)也是把薄層色譜法作為標(biāo)準(zhǔn)方法，在玉米、花生和大豆等農(nóng)作物中其檢出限為】。但其靈敏度低，樣品前處理繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)和凈化不理想，熒光強(qiáng)度的目測(cè)精確性差，操作人員暴露于大量的有潛在危害的有機(jī)溶劑中，而且要與高濃度標(biāo)準(zhǔn)品接觸等缺點(diǎn)，因此并不適合大批量的樣品的快速檢測(cè)。高效液相色譜法是在

16、世紀(jì)年代中期發(fā)展起來(lái)的，隨著色譜柱填充材料化學(xué)的發(fā)展及儀器的逐步改進(jìn)，分析的靈敏度和重現(xiàn)性均得到明顯改善。如果配以熒光檢測(cè)器，在適宜的流動(dòng)相下，采用反相柱，可使多種黃曲霉毒素能同時(shí)分離。法具有靈敏度高、分離能力強(qiáng)、特異性好和測(cè)定結(jié)果可靠等特點(diǎn)，所以適合做確證實(shí)驗(yàn)。隨著黃曲霉毒素特異性抗體的獲得、免疫親和柱的應(yīng)用、熒光技術(shù)的增強(qiáng)以及樣品處理和分析自動(dòng)化技術(shù)的發(fā)展，法得到了進(jìn)一步的發(fā)展。但如果食品成分復(fù)雜，在進(jìn)行液相色譜分離前，需對(duì)樣品作徹底有效的凈化處理，不適合于大批量樣品的檢測(cè)，并且設(shè)備儀器昂貴，實(shí)驗(yàn)成本高以及對(duì)實(shí)驗(yàn)技能要求較高，不易普及推廣【】。酶聯(lián)免疫吸附法的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原

17、或抗體的酶標(biāo)記。最初由荷蘭學(xué)者和瑞典學(xué)者與幾乎同時(shí)提出，當(dāng)時(shí)主南昌大學(xué)級(jí)碩士論文要用于病毒的檢測(cè)，年代中后期開始用于真菌毒素的檢測(cè)。法快速、靈敏、準(zhǔn)確、可定量、操作簡(jiǎn)便，且對(duì)樣品純度要求不高，特別適用于大批量樣品的檢測(cè)，現(xiàn)已得到廣泛的使用。該法已經(jīng)成為我國(guó)國(guó)標(biāo)第二法，在玉米、花生和大豆等農(nóng)作物中其檢出限為【】。因?yàn)槊副旧淼牟环€(wěn)定性，用此方法檢驗(yàn)有可能帶來(lái)假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，而且研制出的快速測(cè)試盒多以測(cè)定最具毒性的種屬為主，在食品和飼料工業(yè)上多采用它來(lái)界定食品或飼料中的超標(biāo)問(wèn)題。所以法的檢測(cè)精確度需要進(jìn)一步提高。此外，實(shí)驗(yàn)需要特殊儀器設(shè)備，并不適合現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。膠體金免疫層析技術(shù)（，）是年代繼三

18、大標(biāo)記技術(shù)（熒光素、放射性同位素和酶）后發(fā)展起來(lái)的固相標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)。該方法最大特點(diǎn)是單份測(cè)定、簡(jiǎn)單快速、特異敏感、不需儀器設(shè)備和試劑，幾分鐘內(nèi)就可用肉眼觀察到顏色鮮明的檢測(cè)結(jié)果，并可保存其檢測(cè)結(jié)果。近年來(lái)，膠體金免疫層析技術(shù)已成為當(dāng)今最快速的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)之一，并越來(lái)越受到相關(guān)研究領(lǐng)域的關(guān)注。膠體金技術(shù)的研究進(jìn)展早在一個(gè)世紀(jì)以前，化學(xué)家就對(duì)膠體金進(jìn)行了研究，當(dāng)時(shí)只是研究它的結(jié)構(gòu)和金屬性質(zhì)。在年和把煙草花葉病毒吸附到金顆粒上，在電子顯微鏡下觀察見金離子呈高電子密度。然而膠體金技術(shù)作為標(biāo)記物應(yīng)用于免疫組織化學(xué)研究是在年，和首先將兔抗沙門氏菌抗血清與膠體金顆粒結(jié)合，用直接免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)沙門

19、氏菌的表面抗原【】。此后，他們還把膠體金與抗膠原血清、植物血凝素、卵白蛋白、人免疫球蛋白輕鏈、牛血清白蛋白結(jié)合應(yīng)用。年建立了用銀顯影液增強(qiáng)光鏡下金顆?？梢娦缘拿庖呓疸y染色法（，）。年等人在免疫金銀法基礎(chǔ)上成功地進(jìn)行了彩色免疫金銀染色，使得結(jié)果更加鮮艷奪目。隨著膠體金技術(shù)的逐步完善和成熟，進(jìn)入年代后此項(xiàng)技術(shù)得到了迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用【，】。膠體金的性質(zhì)和特點(diǎn)氯金酸（）在還原劑作用下，可還原聚合成一定大小的金顆粒，形成南昌大學(xué)級(jí)碩士論文帶負(fù)電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金顆粒由一個(gè)基礎(chǔ)金核及包圍在外的雙離子層構(gòu)成，緊連在金核表面的是內(nèi)層負(fù)離子（），外層離子層則分散

20、在膠體間溶液中，以維持膠體金游離于溶膠間的懸液狀態(tài)（圖）。膠體金顆粒圖膠體金的結(jié)構(gòu)示意圖具有很高的電子密度，在電子顯微鏡下可以很清楚地觀察膠體金的顆粒形態(tài)。膠體金具有膠體的多種特性，如電解質(zhì)能夠破壞其膠體的穩(wěn)定狀態(tài)，使膠體金顆粒發(fā)生聚沉；某些蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)對(duì)膠體金有保護(hù)、加強(qiáng)穩(wěn)定性的作用，。膠體金免疫層析技術(shù)的基本原理膠體金免疫層析法是進(jìn)入年代后國(guó)內(nèi)外興起的一種快速診斷技術(shù)，己經(jīng)成為當(dāng)今最快速敏感的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)之一，其主要材料是玻璃纖維、硝酸纖維素膜、樣本墊、吸水紙、底板等（圖）。作用原理是將特異的抗體或抗原先固圈膠體金免疫層析試紙條示意圖定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，當(dāng)該干燥的硝酸纖維素

21、一端浸入或加入樣品檢測(cè)液后，由于硝酸纖維素膜的毛細(xì)管作用，樣品和膠體金復(fù)合物將沿著該膜向前移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至固定有抗體或抗原的區(qū)域時(shí)，樣品中相應(yīng)的抗原或抗體即與該抗體或抗原發(fā)生特異性結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)特異性的免疫診斷（圖）。與其它檢測(cè)方法相比，該方法最大的特點(diǎn)是單份檢測(cè)、簡(jiǎn)單快速、特異靈敏，不需要儀器設(shè)備和南昌大學(xué)級(jí)碩士論文、塑黲？樣品墊膠金墊膜檢測(cè)線質(zhì)控線吸水紙?chǎng)取ｅ谨兑惶蚍鈭D試紙條作用原理圖輔助試劑，幾分鐘內(nèi)就可用肉眼觀察到試驗(yàn)結(jié)果，并可長(zhǎng)期保存實(shí)驗(yàn)結(jié)果。特別適用于廣大基層單位、醫(yī)院、野外作業(yè)人員以及大批量時(shí)間緊的檢測(cè)和大面積普查等。膠體金免疫層析試紙條的設(shè)計(jì)方式大致有兩種。既可以采用夾心法原理，

22、也可以采用競(jìng)爭(zhēng)法原理進(jìn)行設(shè)計(jì)，關(guān)鍵取決于待檢物的特點(diǎn)。如果是待檢物是大分子化合物，可采取夾心法檢測(cè)。如果待檢物是小分子，應(yīng)采用競(jìng)爭(zhēng)法設(shè)計(jì)【，】。膠體金的制備方法膠體金溶液的制備方法常用的是化學(xué)還原法，基本的原理是向一定濃度的氯金酸溶液內(nèi)加入一定量的還原劑使金離子變成金原子。目前常用的還原劑有：白磷、乙醇、過(guò)氧化氫、硼氫化鈉、抗壞血酸、檸檬酸鈉、鞣酸等。目前應(yīng)用最多的是采用檸檬酸鈉還原四氯金酸法。白磷還原法所得的顆粒為；抗壞血酸還原法制備的金顆粒為；用檸檬酸三鈉還原法，通過(guò)加入檸檬酸三鈉量不同，可獲得不同顏色和不同大小的金顆粒。乙醚超聲波還原法所得金顆粒為；鞣酸。檸檬酸鈉還原法為的金顆粒；而硼氫

23、化鈉還原法所得金顆粒最小，僅【。膠體金蛋白復(fù)合體的制備膠體金顆粒表面可以包被一層生物大分子（如蛋白）來(lái)穩(wěn)定和保護(hù)這些粒子，以免受外來(lái)電解質(zhì)的影響而相互凝聚在一起。但這些蛋白在標(biāo)記前必須要經(jīng)過(guò)前南昌大學(xué)級(jí)碩士論文處理，如去除高濃度的鹽分，高濃度的鹽分往往干擾蛋白與膠體金的吸附結(jié)合，或?qū)е履z體金粒子的凝聚，這一步往往采用低濃度緩沖液中進(jìn)行。當(dāng)?shù)鞍浊疤幚硗瓿珊?，?biāo)記前要確定膠體金與蛋白結(jié)合的最佳值。這是因蛋白的凈電荷取決于溶液的值，在時(shí)為中性。由于在時(shí)蛋白溶解度最小，因此這時(shí)蛋白水化程度最小，最容易吸附到疏水的金粒子表面。但在實(shí)際的膠體金標(biāo)記制備中，一般調(diào)整膠體金溶液為，以使蛋白帶正電，膠體金顆粒表

24、面帶負(fù)電，有利于結(jié)合更穩(wěn)定【。膠體金免疫層析技術(shù)的應(yīng)用膠體金免疫層析試紙條就是層析技術(shù)用于體外快速診斷的一個(gè)重要發(fā)展方向，是在單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)和新材料技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新型檢測(cè)技術(shù)。現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于臨床診斷及藥物檢測(cè)等領(lǐng)域。如早孕【、病毒【】、抗生素和獸藥殘留【】、癌癥等【，的檢測(cè)。左庭婷等【采用檸檬酸鹽還原法制備膠體金顆粒，標(biāo)記型肉毒毒素的多克隆抗體，制成免疫層析檢測(cè)試紙條，檢測(cè)限可達(dá)，與金黃色葡萄球菌腸毒素等抗原無(wú)交叉反應(yīng)。楊書豪等以抗甲胎蛋白（）單克隆抗體和分別包被硝酸纖維膜和標(biāo)記膠體金顆粒，配合其它材料，建立了快速檢測(cè)血清的膠體金免疫層析分析（）試紙條，最低檢測(cè)值為

25、，線性范圍。賴衛(wèi)華等【采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金顆粒標(biāo)記抗赭曲霉毒素單抗，采用競(jìng)爭(zhēng)原理制備試紙條，檢測(cè)限為咖，檢測(cè)時(shí)間為。等報(bào)道以檸檬酸三鈉還原法制備了的膠體金標(biāo)記抗多抗，包被于硝酸纖維素膜上組裝成試紙條，最低檢測(cè)限達(dá)到，檢測(cè)時(shí)間為。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文主要研究?jī)?nèi)容和意義主要研究?jī)?nèi)容本研究是研制膠體金免疫層析試紙條，其內(nèi)容主要包括小鼠腹水中抗】單克隆抗體的純化、膠體金的制備、金標(biāo)抗體及純化、玻璃纖維上包被金標(biāo)抗體、上包被和驢抗鼠等。試紙條檢測(cè)結(jié)果的影響因素主要有膠體金顆粒的大小、金標(biāo)抗體量、金標(biāo)抗體稀釋度（值）、上包被的抗原和二抗?jié)舛纫约暗牟牧系?，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)確定各個(gè)影響因素的參數(shù)。為了考

26、查試紙條的質(zhì)量，對(duì)試紙條的靈敏度、交叉反應(yīng)、穩(wěn)定性、重復(fù)性、假陰性、假陽(yáng)性等參數(shù)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。分別用本研制的試紙條和自建的對(duì)隨機(jī)抽樣的玉米、大米、花生樣品進(jìn)行檢測(cè)，比較兩種方法的檢測(cè)結(jié)果，初步判斷試紙條的準(zhǔn)確性。研究意義，是真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物，主要由黃曲霉、寄生曲霉和特曲霉產(chǎn)生，廣泛存在于花生、棉籽、玉米、小麥和稻米等農(nóng)產(chǎn)品中，是目前化學(xué)致癌物中最強(qiáng)的一種致癌劑和誘變劑。為了防止被污染的農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)入人類消費(fèi)鏈中，及時(shí)檢測(cè)將是一種有效的手段。目前，的檢測(cè)方法主要有、等，但這些方法均需要一定的儀器設(shè)備，樣品的前處理要求比較高，檢測(cè)時(shí)間也較長(zhǎng)，不能滿足面對(duì)突發(fā)事件和現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的要求。膠體金免疫層析試紙

27、條不僅具有快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)便、無(wú)需儀器設(shè)備等特點(diǎn)，而且結(jié)果判斷直觀、可靠、檢測(cè)過(guò)程中標(biāo)本處理簡(jiǎn)單、容易被基層單位人員掌握，因此可以大大提高檢測(cè)效率，十分適合現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。雖然此方法目前還未能定量，但作為一種快速篩查的手段，既可節(jié)省檢測(cè)成本，又可使廣大基層單位開展食品中的檢測(cè)和監(jiān)控工作，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會(huì)價(jià)值。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文實(shí)驗(yàn)材料第二節(jié)材料和方法一小鼠抗單抗腹水純品一標(biāo)準(zhǔn)品偶聯(lián)抗原（）赭曲霉毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇桔青霉素、展青霉素、玉米赤霉烯酮氯金酸（）孑酶標(biāo)板一羊抗鼠：酶標(biāo)二抗檸檬酸三鈉、碳酸鉀牛血清白蛋白硝酸纖維素膜、玻璃纖維樣品墊、吸水紙玉米、花生、

28、大米儀器和設(shè)備中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所公司北京標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心公司公司公司公司公司公司上?；瘜W(xué)試劑公司公司公司德國(guó)公司德國(guó)公司取自不同地區(qū)的農(nóng)戶、超市三維噴點(diǎn)平臺(tái)系統(tǒng)美國(guó)公司切刀美國(guó)公司紫外可見光分光光度計(jì)瑞典公司一透射電鏡日本公司高速冷凍離心機(jī)公司離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器磁力攪拌加熱器德國(guó)公司酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀芬蘭公司微量移液器芬蘭公司恒溫烘箱美國(guó)公司南昌大學(xué)級(jí)碩士論文型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀主要溶液的配制聚丙烯酰胺凝膠電泳試劑的配制醋酸溶液：量取冰醋酸，加蒸餾水定容至。醋酸鈉溶液：稱取無(wú)水醋酸鈉加蒸餾水定容至。醋酸一醋酸鈉緩沖液（）：醋酸與醋酸鈉混勻后，取混合液加蒸餾水至。（）溶液

29、：稱，加超純水至，微熱使其溶解，置棕色試劑瓶中，。貯存。（）：取，加超純水至，置棕色瓶中，。貯存。（）：稱，加超純水至。臨用前配置。樣品溶解液：內(nèi)含，巰基乙醇，蔗糖或甘油，溴酚藍(lán)，緩沖液。分離膠貯存液：稱丙烯酰胺和，甲叉雙丙烯酰胺溶于超純水中，最后定容至，過(guò)濾后置棕色試劑瓶中，貯存。濃縮膠貯液：稱丙烯酰胺和，甲叉雙丙烯酰胺溶于超純水中，最后定容至，過(guò)濾后置棕色試劑瓶中，。貯存。分離膠緩沖液（緩沖液）：稱，加少許超純水，使其溶解，再加約調(diào)至。最后用超純水定容至，。貯存。濃縮膠緩沖液（！緩沖液）：稱，加少許超純水，使其溶解，再加約調(diào)至。最后用超純水定容至，。貯存。電極緩沖液（內(nèi)含，一甘氨酸緩沖液）

30、：稱，甘氨酸，加入，加超純水使其溶解后定容至。瓊脂糖溶液：稱瓊脂糖，加電極緩沖液，加熱使其溶解，。貯存。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文考馬斯亮藍(lán)染色液：每甲醇、蒸餾水、冰乙酸混合物（：）中，溶解考馬斯亮藍(lán)，過(guò)濾除去未溶物。脫色液：甲醇：蒸餾水：冰乙酸：膠體金試紙條試劑的配制（）：，加蒸餾水定容至，調(diào)至。】標(biāo)準(zhǔn)液稀釋液：甲醇加定容至。標(biāo)準(zhǔn)品濃度系列：用甲醇稀釋標(biāo)準(zhǔn)品至，加入適量的稀釋至，使其含拘甲醇，再用甲醇：（：，）依次稀釋，使其終濃度為、。：稱取，用超純水定容至。：稱取，用超純水定容至。蔗糖：，稱取蔗糖，用超純水溶解定容至膠體金重懸液：蔗糖、一、的的。溶液：稱，加超純水溶解定容至。試劑的配制：，一，加蒸

31、餾水定容至：稱，加蒸餾水溶解，定容到。脫脂牛奶封閉液：稱脫脂牛奶，加蒸餾水溶解，定容到。終止液（）：蒸餾水，逐滴加入濃硫酸（）。底物液：鄰苯二胺溶于檸檬酸和緩沖溶液中，同時(shí)加入，現(xiàn)配現(xiàn)用。實(shí)驗(yàn)方法抗單克隆抗體的純化選用辛酸一硫酸銨鹽析法純化單克隆抗體，步驟如下：（）取腹水加入的乙酸緩沖液，用南昌大學(xué)級(jí)碩士論文的調(diào)至。室溫?cái)嚢柘轮鸬尉徛尤胄了?，按每毫升稀釋前的腹水加攪拌，靜置。（）離心，取上清。上清經(jīng)砂芯漏斗過(guò)濾，加入體積的（），在。冰浴下加入的硫酸銨，靜置。（），離心，棄上清，沉淀溶于中進(jìn)行透析兩天，每天換液次?？箚慰寺】贵w效果的評(píng)價(jià)抗單抗的蛋白回收率取稀釋至適量濃度的原始腹水和純化后的單抗

32、分別于和測(cè)定吸光值（，），按下列公式計(jì)算蛋白含量：蛋白量（）（）稀釋倍數(shù)。每毫升原始腹水中提取得到的抗體量即為蛋白回收量；提取所得抗體量與原始腹水中抗體量之百分比即為蛋白回收率。抗單抗活性的測(cè)定采用間接非競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定單抗的活性，步驟如下：（）采用方陣滴定確定包被抗原（）的最佳濃度。（）每孔加肛的包被抗原（溶于溶液中），。包被過(guò)夜。取出恢復(fù)至室溫，傾去包被液，洗次，每次洗，每次扣干。的脫脂牛奶封阻，保溫。（、）取出恢復(fù)至室溫，傾去封阻液，洗次，每次洗，每次扣干。每孔加“以倍比稀釋的抗體和陰性血清，。保溫。（）取出恢復(fù)至室溫，洗次，每次洗，每孔加：稀釋的羊抗鼠：，。保溫。（）取出恢復(fù)至室溫，洗次，每次

33、洗，每孔加肛底物（現(xiàn)用現(xiàn)配），避光保溫保。（）每孔加肛的硫酸終止液。以空白對(duì)照調(diào)零，測(cè)吸光值。以原始腹水、純化的抗體兩倍于陰性血清的吸光值時(shí)的最大稀釋倍數(shù)作為效價(jià)?？埂繂慰辜兌鹊臏y(cè)定采用電泳鑒定抗單抗的純度，具體步驟如下：（）將凝膠板依次用蒸餾水、水、無(wú)水乙醇、蒸餾水洗滌干凈，然后使其南昌大學(xué)級(jí)碩士論文自然風(fēng)干。試樣格（梳子）臨用前用無(wú)水乙醇擦試，讓其揮干。安裝玻璃板、板條，并將玻璃板固定在電泳槽中，以瓊脂封底。（）配制的分離膠：依次將蒸餾水、丙烯酰銨貯存液、（）溶液、溶液、過(guò)硫酸銨、混合，立即沿壁注入制膠板中，直至剩余的板寬比梳子長(zhǎng)度多，小心地在膠上覆蓋一薄層蒸餾水。（）在分離膠聚合的過(guò)程中

34、，配置的濃縮膠：依次混合蒸餾水、丙烯酰銨貯存液、（）溶液、過(guò)硫酸銨、。在灌膠前才加入。（）分離膠聚合完后，倒去蒸餾水，用濾紙吸干膠面上殘余的水。灌注濃縮膠至適當(dāng)高度，立即插入干凈的的梳子，避免產(chǎn)生氣泡。濃縮膠聚合完后，小心拔出梳子，用移液器吸取電極緩沖液清洗加樣孔數(shù)次，以除去未聚合的丙烯酰銨。在上下電泳槽中加入足夠的電泳緩沖液。（）分別在原始腹水和純化后的抗體中加入等體積的樣品溶解液，使蛋白的終濃度為，混合后在沸水中加熱，冷卻室溫后即可上樣。用微量進(jìn)樣器依次上樣，初始電壓為，當(dāng)染料進(jìn)入分離膠后，將電壓提高到，繼續(xù)電泳直至染料到達(dá)離凝膠底部處。（）從電泳裝置上卸下玻璃板，用鑷子小心撬開玻璃板，除

35、去濃縮膠部分，將分離膠移入固定液中，直至染料由藍(lán)綠色變?yōu)辄S色。除去固定液，加入染色液，室溫染色?；厥杖旧海瑢⒛z浸泡于脫色液中，直至背景脫至無(wú)色。膠體金免疫層析試紙條的研制制備膠體金準(zhǔn)確稱取氯金酸溶于雙蒸水中，配成氯金酸鹽溶液，然后將氯金酸溶液加入一個(gè)裝有超純水的圓底燒瓶中，加熱煮沸。煮沸后立即加入檸檬酸三鈉溶液（加入為號(hào)膠體金、加入為號(hào)、加入為號(hào)）。當(dāng)溶液的顏色變?yōu)橥该鞯募t色時(shí)，繼續(xù)回流后停止加熱，從電熱套式恒溫器中取出，冷卻至室溫，。貯存?zhèn)溆?。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文分析膠體金質(zhì)量取一滴制備好的膠體金溶液滴至覆蓋有膜的鎳網(wǎng)，取出放置空氣干燥，然后在透射電鏡下觀察膠體金顆粒的大小是否均勻一致，有

36、無(wú)橢圓形及多角形。通過(guò)放大拍片后測(cè)量膠體金顆粒直徑大小，取多個(gè)點(diǎn)計(jì)算膠體金顆粒的平均直徑及標(biāo)準(zhǔn)差，前者反映顆粒的大小，后者說(shuō)明顆粒是否均勻一致。用紫外可見分光光度計(jì)在可見光范圍內(nèi)（）進(jìn)行掃描膠體金，獲得膠體金可見光區(qū)吸收光譜，記錄最大吸收波長(zhǎng)。膠體金標(biāo)記抗體用溶液將膠體金溶液調(diào)值均為，用磁力攪拌器均勻攪拌，然后緩慢滴加入抗單克隆抗體至膠體金溶液中，繼續(xù)攪拌。加入，使終濃度為。繼續(xù)攪拌，加入溶液，使終濃度為，繼續(xù)攪拌。離心，取上清。離心，小心吸去上清，膠體金緩沖液（蔗糖、的的）重懸沉淀。玻璃纖維上點(diǎn)噴金標(biāo)抗體玻璃纖維浸置于蔗糖中，。干燥。用三維點(diǎn)噴平臺(tái)系統(tǒng)以將金標(biāo)抗體點(diǎn)噴在玻璃纖維上，干燥，此稱

37、膠金墊。上點(diǎn)噴檢測(cè)線和質(zhì)控線用三維點(diǎn)噴平臺(tái)系統(tǒng)以雎將一點(diǎn)噴在上，即為檢測(cè)線。在離檢測(cè)線處噴上驢抗鼠，即為質(zhì)控線，干燥。組裝試紙條試紙條組裝步驟如下：（）取出一塊膠板，將噴有檢測(cè)線和質(zhì)控線的粘貼在膠板的中央?yún)^(qū)。然后將膠金墊粘在的正下方，兩者之間重疊約。（）樣本墊粘貼于膠金墊正下方，但使膠板的下邊緣與樣本墊留約。然后濾紙貼在上面留有的處，并與部分樣本墊重疊。吸水紙粘貼于的南昌大學(xué)級(jí)碩士論文正上方，與重疊約，即為組裝成的試紙條（圖）。（）用公司切刀將上述試紙條切割成的試紙條裝入檢測(cè)卡中，放入帶干燥劑的鋁箔袋中密封保存（圖）。疆羈蛩強(qiáng)疆？。一一，。隧鏊麓萋麓簧鷲鷲囊麓膠金墊馨黎罄辮黧愛(ài)鹱樣本墊濾紙正視

38、圖側(cè)視圖圖試紙條組裝圖圖試紙條和檢測(cè)卡的樣品圖南昌大學(xué)級(jí)碩士論文，試紙條的結(jié)果判定取肛待測(cè)液加入檢測(cè)孔中，后，當(dāng)檢測(cè)線和質(zhì)控線分別出現(xiàn)紅色條帶，判定為陰性。當(dāng)檢測(cè)線無(wú)條紅色條帶，質(zhì)控線出現(xiàn)紅色條帶，判定為陽(yáng)性。當(dāng)檢測(cè)線和質(zhì)控線均未出紅色條帶，試紙條無(wú)效（圖）。圖一試紙條結(jié)果的判定試紙條檢測(cè)結(jié)果的主要影響因素的研究膠體金顆粒大小的選擇各取粒徑為、和的膠體金于干凈的燒杯中，調(diào)值均為。用磁力攪拌器均勻攪拌，分別標(biāo)記，的抗單克隆抗體，標(biāo)記步驟同。組裝試紙條步驟同，分別做質(zhì)量評(píng)價(jià)。最佳金標(biāo)記抗體量的確定本實(shí)驗(yàn)采用競(jìng)爭(zhēng)原理設(shè)計(jì)，抗體先進(jìn)行不完全標(biāo)記，然后再補(bǔ)加進(jìn)行完全標(biāo)記。取個(gè)干凈的小燒杯，各加入中確定的

39、膠體金溶液，用調(diào)均至。用磁力攪拌器均勻攪拌，同時(shí)分別緩慢加入、抗單克隆抗體，標(biāo)記步驟同。組裝試紙條同，分別做質(zhì)量評(píng)價(jià)。金標(biāo)抗體稀釋度（值）的確定取個(gè)干凈的小燒杯，各加入中確定的膠體金溶液，用溶液調(diào)值均為，標(biāo)記中確定的抗體量。將純化后南昌大學(xué)級(jí)碩士論文的金標(biāo)記抗體用膠體金緩沖液稀釋，紫外可見分光光讀計(jì)進(jìn)行掃描。用膠體金稀釋緩沖液分別稀釋至值為、，每個(gè)條件各點(diǎn)噴在一條玻璃纖維上，干燥。組裝試紙條同，分別做質(zhì)量評(píng)價(jià)。上檢測(cè)抗原濃度的確定取出條，分別點(diǎn)噴、的，干燥。在離檢測(cè)線右邊處噴上的驢抗鼠，干燥。將上述條分別與膠金墊、樣品墊和吸水紙依次組裝在膠板上，用切刀切成試紙條裝入檢測(cè)卡，分別做質(zhì)量評(píng)價(jià)。材料

40、型號(hào)的選擇取出型號(hào)分別為、的各一條，按中確定的條件點(diǎn)噴和二抗驢抗鼠，。干燥。將四種膜分別與膠金墊、樣品墊和吸水紙依次組裝在底板上，用切刀切成試紙條裝入檢測(cè)卡，分別做質(zhì)量評(píng)價(jià)。試紙條的質(zhì)量評(píng)價(jià)檢測(cè)液中甲醇含量對(duì)試制條的影響配制甲醇含量為、的。取出若干檢測(cè)卡，用移液槍分別吸取此上述不同甲醇含量的加入檢測(cè)孔中。后判斷檢測(cè)結(jié)果。試紙條的靈敏度和檢測(cè)范圍用甲醇稀釋標(biāo)準(zhǔn)品至（純甲醇溶解），加入適量的稀釋濃度至恥，使標(biāo)品溶液中甲醇含量為。再用甲醇：（：，）依次稀釋上述標(biāo)品溶液，使終濃度為、。分別吸取上述不同濃度的標(biāo)品溶液加入試紙條檢測(cè)卡孔中，后判斷結(jié)果，每個(gè)濃度重復(fù)次。試紙條的特異性分別配制黃曲霉毒素、赭曲

41、霉毒素、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、桔霉素和展青霉毒標(biāo)準(zhǔn)品，濃度分別為、。分別用移液槍吸取肛加入試紙條檢測(cè)孔中，每個(gè)濃度重復(fù)次，判斷試紙條的特異性。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文試紙條的重復(fù)性取出條試紙條，分別測(cè)定濃度為、的標(biāo)品溶液。標(biāo)品溶液重復(fù)次，其它濃度每個(gè)重復(fù)次，后判斷結(jié)果，觀察其重復(fù)性。試紙條的穩(wěn)定性將試紙條密封分別保存于、和。，觀察不同溫度對(duì)試紙條的影響。保存于。的試紙條每天取出條分別測(cè)定濃度為、的標(biāo)品溶液。保存于。的試紙條每天取出條分別測(cè)定濃度為、的標(biāo)品溶液。保存于。的試紙條每周取出條分別測(cè)定濃度為、的標(biāo)品溶液。試紙條的假陽(yáng)性和假陰性率用試紙條速測(cè)卡檢測(cè)例陰性樣本（小于本試紙條的靈敏度）

42、和例陽(yáng)性樣本（大于本試紙條的靈敏度）。假陽(yáng)性率和假陰性率的計(jì)算公式為：假陽(yáng)性率壟型塑絲鍪試紙條檢測(cè)樣品假陰性率望型圭塑絲望用自制的膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)不同地區(qū)的份樣品：份大米、份花生、份玉米。具體步驟如下：將樣品碾磨粉碎，分別稱取，每份樣品加入提取液（每中含甲醇，蒸餾水，氯化鈉），在振蕩器上激烈振搖，離心，吸出上清液，分別用稀釋至甲醇含量為，即為樣品檢測(cè)液。分別加入于試紙條檢測(cè)孔中，每個(gè)樣品重復(fù)次，后判斷結(jié)果。檢測(cè)天然樣品（）通過(guò)方陣滴定確定包被抗原和抗體的最佳濃度。（）包被一偶聯(lián)抗原，建立司接競(jìng)爭(zhēng)標(biāo)準(zhǔn)曲線。（）提取樣品中進(jìn)行檢測(cè)（方法同）。）與試紙條的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，驗(yàn)證試紙條的準(zhǔn)確性

43、。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文第三節(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果抗單克隆抗體的回收率將純化后的抗體和腹水分別進(jìn)行紫外掃描，測(cè)定和處值。根據(jù)公式蛋白量（）（）稀釋倍數(shù)，以原始腹水為參照，計(jì)算出蛋白含量和回收率，見表。表抗，單克隆抗體的蛋白回收率旦?。海〕室?！堡竺：！型匹絲！壘生壘堡！蛋白含量（）蛋白同收率（）抗，單克隆抗體的純度小鼠腹水經(jīng)辛酸一硫酸銨鹽析法沉淀后知，抗體純化后無(wú)雜蛋白，僅出現(xiàn)兩條帶為輕鏈，約。通過(guò)鑒定。由圖可一條為重鏈，約；另一條圖腹水和純化的抗體的電泳圖泳道：腹水泳道：純化的抗體泳道：南昌大學(xué)級(jí)碩士論文抗單克隆抗體的活性通過(guò)間接非競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定抗體的效價(jià)，以吸光值大于陰性血清倍的最大抗體稀釋倍數(shù)作為抗體效價(jià)，測(cè)得

44、腹水和純化的單抗效價(jià)分別為：和，：。制備膠體金的結(jié)果膠體金溶液經(jīng)紫外可見分光光度計(jì)掃描，在的下有最大吸收峰（表）。經(jīng)透射電鏡測(cè)得號(hào)、號(hào)、號(hào)膠體金粒徑分別為、，（圖。）。表制備不同粒徑的膠體金膠體金的透射電鏡的照片顯示，除號(hào)膠體金分散性相對(duì)較差外，號(hào)和號(hào)基本沒(méi)有成堆成團(tuán)的現(xiàn)象，膠體金顆粒大小均勻。從紫外掃描圖可以看出，三種膠體金的波峰較尖，這也說(shuō)明膠體金顆粒大小均勻（圖）。圖膠體金電鏡掃描圖膠體金電鏡掃描圖膠體金電鏡掃描圖（）南昌大學(xué)級(jí)碩士論文可對(duì)，、一一，。一翼。；一一一一：二。一一。、。：一：；“”“挑啦凹繃枷枷鯽呻一岫“圖衄膠體金紫外掃描膠體金紫外掃描膠體金紫外掃描試紙條檢測(cè)結(jié)果的主要影響

45、因素的研究膠體金顆粒大小的確定表膠體金顆粒大小的選擇結(jié)果注：“”表示檢測(cè)線條帶深“”表示檢測(cè)線條帶淡“一”表示檢測(cè)線無(wú)條帶由表可知，由粒徑為的膠體金組裝的試紙條，當(dāng)檢測(cè)標(biāo)品，檢測(cè)線不顯紅色條帶。而由粒徑為和的膠體金組裝的試紙條，當(dāng)檢測(cè)標(biāo)品，檢測(cè)線出現(xiàn)淺紅色條帶。因此，本實(shí)驗(yàn)選用粒徑的膠體金。膠體金標(biāo)記抗體量確定表不同標(biāo)記抗體量試紙條的檢測(cè)結(jié)果注：“”表示檢測(cè)線條帶深“”表示檢測(cè)線條帶淡“一”表示檢測(cè)線無(wú)條帶由表可知，當(dāng)體積為的膠體金標(biāo)記抗體量達(dá)到時(shí)，陰性檢南昌大學(xué)級(jí)碩士論文測(cè)時(shí)，檢測(cè)線顯深紅色條帶；標(biāo)品檢測(cè)，檢測(cè)線不顯紅色條帶。當(dāng)標(biāo)記抗體量為、昭時(shí)，陰性檢測(cè)，檢測(cè)線條帶逐漸變淡。當(dāng)標(biāo)記抗體量為

46、、昭時(shí)，標(biāo)品檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)線均出現(xiàn)紅色條帶。因此，本實(shí)驗(yàn)最適標(biāo)記抗體量為：。金標(biāo)抗體稀釋度（值）的確定表金標(biāo)抗體稀釋度選擇結(jié)果一注：“”表示檢測(cè)線條帶深“”表示檢測(cè)線條帶淡“”表示檢測(cè)線無(wú)條帶由表可知，當(dāng)金標(biāo)抗體稀釋至值為時(shí)，陰性檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)線顯深紅色條帶；標(biāo)品檢測(cè)，檢測(cè)線不顯條帶。當(dāng)金標(biāo)抗體稀釋至值為時(shí)，陰性檢測(cè)，檢測(cè)線條帶顯色相對(duì)偏淡；當(dāng)金標(biāo)抗體稀釋至值為時(shí)，標(biāo)品檢測(cè)，檢測(cè)線出現(xiàn)紅色條帶。因此，本實(shí)驗(yàn)金標(biāo)抗體最適稀釋度值為。上檢測(cè)抗原濃度的確定表上抗原濃度的篩選結(jié)果盟塑注：“”表示檢測(cè)線條帶深“”表示檢測(cè)線條帶淡“一”表示檢測(cè)線無(wú)條帶由表可知，當(dāng)上濃度為時(shí)，組裝的試紙條陰性檢測(cè)，檢測(cè)線不顯紅

47、色條帶。當(dāng)抗原濃度為，陰性檢測(cè)，檢測(cè)線條帶顯色較淡。當(dāng)抗原濃度達(dá)到時(shí)，陰性檢測(cè)，檢測(cè)線顯深紅色條帶；標(biāo)品檢測(cè)，檢測(cè)線出不顯條帶。當(dāng)抗原量達(dá)到咖時(shí)，南昌大學(xué)級(jí)碩士論文陰性檢測(cè)，檢測(cè)線顯深紅色條帶；標(biāo)品檢測(cè)，檢測(cè)線也出現(xiàn)淺紅色條帶。所以本實(shí)驗(yàn)選擇上點(diǎn)噴一抗原濃度為。型號(hào)的確定表型號(hào)確定的結(jié)果三生?。海〉?！翌！豎！竺型！墊！翌型！城?。盒吞?hào)標(biāo)品（咖）注：“”表示檢測(cè)線條帶深“”表示檢測(cè)線條帶淡“一”表示檢測(cè)線無(wú)條帶由表可知，當(dāng)用型號(hào)為組裝的試紙條進(jìn)行陰性檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)線條帶粗而均勻，標(biāo)品檢測(cè)，檢測(cè)線不顯條帶。當(dāng)型號(hào)為組裝的試紙條進(jìn)行陰性檢測(cè)時(shí)，條帶細(xì)而均勻，但標(biāo)品檢測(cè)，檢測(cè)線出現(xiàn)淺紅色條帶。當(dāng)型號(hào)為和

48、組裝的試紙條進(jìn)行陰性檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)線條帶粗而不均勻，呈顆粒線條狀。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇為型號(hào)。試紙條檢測(cè)液中甲醇含量的確定圖不同甲醇含量對(duì)試紙條的影響由圖可知，當(dāng)甲醇含量為時(shí)，檢測(cè)線條帶深而均勻；當(dāng)甲醇含量為時(shí)，檢測(cè)線條帶顏色相對(duì)稍弱；當(dāng)甲醇含量為檢測(cè)時(shí)，有部分金不能完全釋放且條帶不完整；當(dāng)甲醇含量為時(shí)，膠體金完全不能釋放。因此，選擇甲醇含量為的作為試紙條的檢測(cè)液。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文試紙條的靈敏度和檢測(cè)范圍閨一黃曲霉毒素?？焖贆z測(cè)試紙條的靈敏度由圖可見，在陰性對(duì)照中，檢測(cè)線和質(zhì)控線顯深紅色條帶；隨著檢測(cè)液中標(biāo)品濃度的逐漸增加，檢測(cè)線條帶逐漸減弱；當(dāng)標(biāo)品濃度達(dá)到時(shí)，檢測(cè)線不顯色；當(dāng)標(biāo)品濃度繼續(xù)增加至?xí)r

49、，檢測(cè)線均無(wú)紅色條帶；質(zhì)控線均出現(xiàn)深紅色條帶。由此判斷，該試紙條的靈敏度為，的濃度在范圍內(nèi)，試紙條均可檢測(cè)。試紙條的特異性表黃曲霉毒素?？焖贆z測(cè)試紙條的特異性里?。?！竺！堡！壘罌！喲堡璺墅試紙條檢測(cè)結(jié)果黃曲霉毒素，赭曲霉毒素一一。一玉米赤霉烯酮一一脫氧雪腐鐮刀菌烯醇一。一一桔霉素一。一展青霉毒素一一一一一注：“”表示為陽(yáng)性，“一”表示為陰性由表可知，黃曲霉毒素快速檢測(cè)試紙條與其它幾種真菌毒素未發(fā)生南昌大學(xué)級(jí)碩士論文交叉反應(yīng)，說(shuō)明該試紙條具有高度的特異性。試紙條的重復(fù)性條試紙條陰性檢測(cè)結(jié)果顯示，條試紙條檢測(cè)線出現(xiàn)深紅色條帶，僅條試紙條檢測(cè)線出現(xiàn)淺紅色條帶。條試紙條陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果顯示，檢測(cè)線均不出現(xiàn)

50、條帶，質(zhì)控線均出紅色條帶，由此判斷試紙條的重復(fù)性為。試紙條的假陰性、假陽(yáng)性和穩(wěn)定性試紙條檢測(cè)例未含的大米，出現(xiàn)一例陽(yáng)性結(jié)果。試紙條檢測(cè)例含的大米，結(jié)果全顯陽(yáng)性。經(jīng)檢測(cè)，試紙條分別在。和下保存?zhèn)€月、在保存天，試紙條均有效（試紙條未做更長(zhǎng)時(shí)間的保存實(shí)驗(yàn)）。根據(jù)試紙條行業(yè)經(jīng)驗(yàn)，試紙條在。保存天相當(dāng)于在。保存一個(gè)半月。因此，按上述行業(yè)經(jīng)驗(yàn)推算本試紙條在下的保存期約為個(gè)月。間接競(jìng)爭(zhēng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立通過(guò)方陣滴定確定了包被抗原的最佳濃度為，抗體的稀釋倍數(shù)為，二抗：稀釋倍數(shù)為，在此條件下建立了間接競(jìng)爭(zhēng)標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖）。線性范圍為，為，檢測(cè)下限為咖。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文邑料衾娟標(biāo)品濃度（）圖間接競(jìng)爭(zhēng)標(biāo)準(zhǔn)曲線試紙條和檢

51、測(cè)樣品的結(jié)果本試紙條的最低檢測(cè)限是，陰性判定為樣品檢測(cè)液中濃度低于，陽(yáng)性判定為樣品檢測(cè)液中濃度高于。份樣品經(jīng)試紙條檢測(cè)后，除了號(hào)花生和號(hào)花生樣品結(jié)果顯示為陽(yáng)性，其它均為陰性。檢測(cè)結(jié)果顯示也僅號(hào)花生和號(hào)花生檢測(cè)液中超過(guò)（表），兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致。表與檢測(cè)樣品中結(jié)果的比較注：表中的檢測(cè)液與試紙條相同，均為樣品提取液稀釋至甲醇含量為時(shí)的濃度。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文抗體的純化第四節(jié)討論試紙條對(duì)抗體的純度、活性和特異性要求較高。提純單克隆抗體的方法很多，從提純的純度和活性來(lái)說(shuō)的，其中親和層析法較好，但成本高，抗體得率和回收率低【。硫酸銨沉淀法簡(jiǎn)便可行，但抗體純度低。辛酸一硫酸銨法提取鼠源性培單抗得率高，具

52、有快速、簡(jiǎn)單易行、價(jià)格低廉等特點(diǎn)，且培抗體活性不易受破壞，辛酸在酸性條件下可沉淀腹水中的非蛋白。白麗等【】應(yīng)用辛酸硫酸銨法純化小鼠腹水和血清中的抗體，測(cè)定顯示兩條條帶；活細(xì)胞免疫熒光法測(cè)定抗體活性為。鄧瑞春采用辛酸硫酸銨法和離子交換葡聚糖凝膠法純化兔抗抗血清和羊抗抗血清，結(jié)果顯示用辛酸硫酸銨法和次純化的抗體效果一樣。但僅用硫酸銨純化抗體，抗體的純度和活性均遠(yuǎn)低于上述兩種方法。本實(shí)驗(yàn)分別使用了辛酸硫酸銨和硫酸銨法純化小鼠腹水中的抗單克隆抗體，抗體經(jīng)鑒定，辛酸硫酸銨法純化的抗體在圖譜上只出現(xiàn)兩條帶，分別為抗體的重鏈和輕鏈。而用硫酸銨純化的抗體則出現(xiàn)三條帶，說(shuō)明此方法未能除盡雜蛋白。另外從抗體的活性

53、測(cè)定結(jié)果可知，辛酸硫酸銨法純化抗體的活性要高于硫酸銨法純化抗體的活性。膠體金溶液的制各膠體金制備的方法般采用還原法，常用的還原劑有檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、白磷、硼氫化鈉等。目前，應(yīng)用最多的還原劑是檸檬酸鈉。影響膠體金溶液制備的因素有很多，除了對(duì)水質(zhì)和反應(yīng)玻璃器皿有高要求外，對(duì)還原劑加入量、還原劑是否一次性加入、攪拌的均勻程度、攪拌轉(zhuǎn)速、氯金酸溶液的初始沸騰時(shí)間、加入檸檬酸鈉后的繼續(xù)加熱反應(yīng)時(shí)間等都有相應(yīng)的要求。孫秀蘭等【認(rèn)為加入檸檬酸鈉后加熱反應(yīng)時(shí)間是影響膠體金制備的主要因素，其次是沸騰時(shí)問(wèn)和攪拌轉(zhuǎn)速。賀昕等【刮報(bào)道檸檬酸鈉溶液的加入量是影響膠體金制備的主要因素，反應(yīng)時(shí)間和攪拌強(qiáng)度對(duì)膠體金粒

54、徑的影響不大，但對(duì)膠體金的穩(wěn)定性、粒徑的均勻程度有直接的影響。本研究發(fā)現(xiàn)，確定檸檬酸鈉加入的速度對(duì)制各的膠體金粒徑分布影響較大。如果檸檬酸鈉緩慢加入，可導(dǎo)致膠體金顆粒不均勻，影響標(biāo)記南昌大學(xué)級(jí)碩士論文抗體效果。如果迅速加入檸檬酸鈉，制備的膠體金顆粒均勻。在膠體金免疫快速檢測(cè)試紙條中，檢測(cè)信號(hào)是由于膠體金在檢測(cè)線或質(zhì)控線上聚集而成，如果金顆粒太小就不能產(chǎn)生足夠的顏色信號(hào)，導(dǎo)致目測(cè)效果較差。如果金顆粒太大又會(huì)遇到空間位阻的問(wèn)題，空間位阻可以阻止小分子蛋白質(zhì)接近金顆粒的電位【。例如分子（），其最適的標(biāo)記金顆粒大小為砌【。本實(shí)驗(yàn)分別制備了粒徑為、的膠體金，試紙條的質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果表明，直徑為的膠體金組裝成

55、試紙條的抑制和目測(cè)效果均最佳。膠體金標(biāo)記蛋白膠體金標(biāo)記蛋白，實(shí)質(zhì)上就是蛋白等高分子物質(zhì)被吸附到膠體金顆粒表面的過(guò)程，但有關(guān)它的原理還沒(méi)有確切的描述，結(jié)合機(jī)制大概有以下幾方面：（）帶負(fù)電荷的金顆粒與蛋白上帶正電荷的氨基酸反應(yīng)；（）蛋白通過(guò)疏水作用吸附于金顆粒表面；（）通過(guò)蛋白中的半胱氨酸的硫殘基與金顆粒的電子層發(fā)生配位結(jié)合【。膠體金標(biāo)記蛋白的制備結(jié)果受多種因素影響，如顆粒大小、離子濃度、蛋白質(zhì)用量及標(biāo)記體系值等。其中影響最大的是標(biāo)記體系的值和蛋白質(zhì)用量【】。如果膠體金未調(diào)到最佳值，膠體金標(biāo)記蛋白后會(huì)就可能發(fā)生聚集。試驗(yàn)證明膠體金與蛋白的結(jié)合，在蛋白的等電點(diǎn)或稍高時(shí)是最強(qiáng)的。為了防止膠體金標(biāo)記蛋白

56、在后處理過(guò)程中出現(xiàn)分離、變性、聚沉等現(xiàn)象，常加入適量的牛血清白蛋白（）、卵白蛋白、聚乙二醇（）或明膠作穩(wěn)定劑。李余動(dòng)等】報(bào)道的膠體金免疫層析快速檢測(cè)氯霉素殘留中，使用穩(wěn)，定膠體金溶液。等【】選用的膠體金標(biāo)記抗卡那徽素單克隆抗體，用作為穩(wěn)定劑。等【峙艮道當(dāng)金標(biāo)抗體復(fù)合體系中添口的終濃度為時(shí)，金標(biāo)抗體復(fù)合物體系的穩(wěn)定性高。在本實(shí)驗(yàn)中，使終濃度為冪作為穩(wěn)定劑，結(jié)果顯示膠體金溶液未出現(xiàn)聚沉現(xiàn)象。標(biāo)記抗體量和稀釋度對(duì)試紙條質(zhì)量的影響目前，膠體金免疫層析試劑條的檢測(cè)方法包括雙抗夾心法、競(jìng)爭(zhēng)抗體法和競(jìng)爭(zhēng)抗原法。因?yàn)殡p抗夾心法不適合小分子檢測(cè)，所以本實(shí)驗(yàn)采用競(jìng)爭(zhēng)法原南昌大學(xué)級(jí)碩士論文理設(shè)計(jì)。因此，抗體標(biāo)記量尤

57、為關(guān)鍵。標(biāo)記抗體量過(guò)多，試紙條的靈敏度就會(huì)降低，達(dá)不到應(yīng)用的價(jià)值；反之，能提高靈敏度，但當(dāng)陰性檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)線條帶顯色會(huì)較淡，陽(yáng)性結(jié)果難以辨別。金標(biāo)抗體的稀釋度也是影響試紙條靈敏度的一個(gè)重要參數(shù)。當(dāng)標(biāo)記抗體量不變時(shí)，金標(biāo)抗體的稀釋度愈大，試紙條的靈敏度就愈高；反之，靈敏度就愈低。等【】報(bào)道選用的膠體金標(biāo)記抗單克隆抗體，根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)原理制成膠體金免疫層析試紙條，其最低檢測(cè)線可達(dá)，檢測(cè)時(shí)間為。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)，確定當(dāng)抗體標(biāo)記量為睨，抗體標(biāo)記物稀釋度值為時(shí)，試紙條最低檢測(cè)限達(dá)到。膜的選擇可用于膠體金免疫層析快速檢測(cè)的膜有尼龍膜、聚脂膜、玻璃纖維素膜、純纖維素膜、硝酸纖維素醋酸纖維素混合膜和硝酸纖維素膜

58、等。但在膠體金免疫層析實(shí)驗(yàn)中常用硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜的選擇要考慮蛋白結(jié)合力、均一性、孔徑大小、層析速率和抗張強(qiáng)度等幾個(gè)因素【】。目前己有專用于免疫層析的硝酸纖維素膜供應(yīng)廠商，如美國(guó)的公司、公司、德國(guó)的公司等都提供各種規(guī)格的硝酸纖維素膜。如果所選的硝酸纖維素膜不均一，那么檢測(cè)時(shí)流動(dòng)帶不整齊。孔徑大的硝酸纖維素膜，吸附抗原量增加，檢測(cè)的范圍就寬；孔徑小，吸附的抗原的能力降低，檢測(cè)的范圍也就窄。合適的抗原包被量既可以保證檢測(cè)的靈敏度和范圍，又可以保證檢測(cè)線和質(zhì)控線的顯色深淺在合適的范圍內(nèi)，便于觀察。本實(shí)驗(yàn)選用德國(guó)公司生產(chǎn)的硝酸纖維素膜具有蛋白吸附容量大、親水性能好、無(wú)須預(yù)處理等優(yōu)點(diǎn)，適合，膠體

59、金試紙條的制備。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文第五節(jié)小結(jié)本研究采用辛酸硫酸銨鹽析法純化小鼠腹水中抗單克隆抗體，經(jīng)間接和鑒定，獲得了高純度和高活性的單克隆抗體。采用檸檬酸三鈉還原法制備了膠體金，標(biāo)記抗單克隆抗體，制備了膠體金免疫層析試紙條。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)確定了制備試紙條的各個(gè)參數(shù)，當(dāng)膠體金顆粒粒徑為，金標(biāo)抗體量為。，金標(biāo)抗體稀釋度為值，膜的型號(hào)為，包被的偶聯(lián)抗原和二抗?jié)舛确謩e為、時(shí)，試紙條檢測(cè)的靈敏度為。膠體金免疫層析試紙條與赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、桔霉素、展青霉毒素?zé)o交叉反應(yīng)，重復(fù)性為。試紙條分別在和下保存?zhèn)€月、在保存天均有效（未做更長(zhǎng)時(shí)間保存實(shí)驗(yàn)）。根據(jù)試紙條行業(yè)經(jīng)驗(yàn)推算，試紙條在下的保存期約為個(gè)月。用該試紙條檢測(cè)不同地區(qū)的大米、玉米、花生樣品，結(jié)果篩查出份陽(yáng)性花生樣品。檢測(cè)結(jié)果顯示這份花生樣品中的濃度超過(guò)，其它樣品中的濃度均低于。用。膠體金免疫層析試紙條即可進(jìn)行單個(gè)樣品檢測(cè)，也可進(jìn)行批量樣品檢測(cè)，無(wú)需特殊儀器設(shè)備，左右即可通過(guò)肉眼觀察結(jié)果。雖然該試紙條不能實(shí)現(xiàn)定量分析，但對(duì)于快速篩查農(nóng)產(chǎn)品中是否超標(biāo)將是一種有效的手段。南昌大學(xué)級(jí)碩士論文第二章應(yīng)用噬菌體展示肽庫(kù)淘選黃曲霉毒素，模擬表位第一節(jié)文獻(xiàn)綜述噬菌體展示技術(shù)的概念噬菌體展示（）是將外源蛋白質(zhì)或多肽的基因表達(dá)產(chǎn)物與噬菌體衣殼蛋白融合，并在其表面展示，同時(shí)將其遺傳密碼信息整合到個(gè)體噬菌體的基因組中。該技術(shù)是世