1、第十六章 基因診斷,第一節(jié) 概述 一、什么是基因診斷 所謂基因診斷，就是在基因水平上對(duì)疾病或人體的狀態(tài)進(jìn)行診斷，它包括產(chǎn)前診斷，是一種新的臨床診斷方法。 是以DNA和RNA為診斷材料，利用分子生物學(xué)技術(shù)，通過(guò)檢查基因的結(jié)構(gòu)或表型來(lái)診斷疾病的方法和過(guò)程；其臨床意義在于能檢測(cè)DNA或RNA的結(jié)構(gòu)變動(dòng)與否，量的多少及表達(dá)情況等，以確定被檢查者是否存在基因水平的異常變化，以此作為疾病確診或進(jìn)行基因治療的依據(jù)。,二、基因診斷的概念界定以下6個(gè)方面內(nèi)容： （一）診斷水平 基因水平 （二）診斷技術(shù) 從方法學(xué)來(lái)說(shuō)，沒(méi)有特殊的基因診斷方法，就是分子生物學(xué)技術(shù)在臨床上的應(yīng)用。 （三）診斷材料 DNA和RNA 。

2、（四）診斷內(nèi)容 1、對(duì)于內(nèi)源性基因來(lái)說(shuō)：基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)是否異常。 2、對(duì)于外源性基因來(lái)說(shuō)：入侵基因的種類，是病毒核酸、細(xì)菌質(zhì)粒還是寄生蟲(chóng)DNA. （五）診斷途徑 1、直接檢查基因結(jié)構(gòu)是否存在：DNA點(diǎn)突變、缺失插入、基因重排、染色體畸變、mRNA剪接缺失錯(cuò)位或結(jié)構(gòu)變化等。 2、檢查基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA： 1）已經(jīng)轉(zhuǎn)錄還是沒(méi)有轉(zhuǎn)錄？ 2） 應(yīng)該轉(zhuǎn)錄還是不應(yīng)該轉(zhuǎn)錄？ 3）轉(zhuǎn)錄正常、過(guò)量還是過(guò)少？ 3、 檢查基因表型：正常還是異常，進(jìn)行分析研究。 （六） 診斷目的 1、 確診相應(yīng)疾病或得出相應(yīng)結(jié)論。 2、 是防治疾病或基因治療的根據(jù)。,三、基因診斷的思路 （一）基因是隨便能診斷的嗎？總不能亂診斷吧？

3、 （二）基因診斷和傳統(tǒng)的疾病診斷方法有什么區(qū)別 和聯(lián)系？ （三）基因診斷的理論基礎(chǔ)和技術(shù) 能不能診斷 診斷學(xué)基礎(chǔ) 怎樣診斷？ 為此，作下述討論。希望對(duì)大家有所幫助。,四、基因診斷方法和傳統(tǒng)的疾病診斷方法 表1 表型診斷（傳統(tǒng)方法） 基因診斷 （一）診斷依據(jù) 疾病表型變化 基因結(jié)構(gòu)異常和表達(dá)異常 （二）分 類 臨床診斷（病因、病解、病生） DNA診斷 血清學(xué)診斷 RNA診斷 生化學(xué)診斷 （三）特異性 表型改變?cè)诤芏嗲闆r下是非特 以探測(cè)基因?yàn)槟繕?biāo)，只要 異性的，往往難以明確診斷， 有特異性探針，利用分子 延誤病情如FOU? 雜交原理即可 診斷，具有 很高的特異性。 （四）敏感性 探針可用“放標(biāo)”或

4、“非放 診斷靈敏度高，標(biāo)本只需 微量，DNApg水平即可。 （五）早期診斷 因?yàn)楸硇透淖兺霈F(xiàn)較晚， 在表型改變之前，基因 難以早期診斷 結(jié)構(gòu)或表達(dá)已發(fā)生改變， 故往往可以早期診斷。,（六）基因診斷范圍廣 因?yàn)椋禾结樋蔀槿魏蝸?lái)源和種類，序列可為已知或未知，目標(biāo)可為特定基因或 特定基因組合，外源性或內(nèi)源性基因，所以適應(yīng)性強(qiáng)，診斷范圍廣。 被檢查基因是否處于活化狀態(tài)并不重要，故可對(duì)分化階段表達(dá)特異性基因及其異常進(jìn)行檢測(cè)和診斷，這對(duì)腫瘤（如CML）療效及預(yù)后尤為重要。 在感染性疾病的診斷，能檢查正在生長(zhǎng)或潛伏病原體，能明確既往感染或現(xiàn)行感染，對(duì)不易診斷（如產(chǎn)毒性E.coli）和不能安全培養(yǎng)（如立克

5、次體）進(jìn)行基因診斷，擴(kuò)大了實(shí)驗(yàn)室診斷范圍。,（七）二者關(guān)系 1. 基因診斷必須建立在臨床一般檢查的基礎(chǔ)上，它必須是臨床檢查的第二步或第三步手段。（不是隨便診斷） 2. 基因診斷是分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)發(fā)展到今天人們的一種設(shè)想，現(xiàn)在逐步走向臨床，變成現(xiàn)實(shí)。 3. 盡管實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用技術(shù)原理相同，但診斷對(duì)象是人的時(shí)候應(yīng)該慎重！（不能亂診斷） 4. 同臨床診斷一樣，忌不獨(dú)立思考，人云亦云（舉例）。,細(xì)胞膜,細(xì)胞核,DNA,mRNA,轉(zhuǎn)錄,翻譯,（protein）,臨床表現(xiàn),圖一 基因診斷與表型診斷,（五）基因診斷與診斷學(xué) （一）診斷是用醫(yī)學(xué)科學(xué)的方法對(duì)疾病的表現(xiàn)所作出的辯證邏輯的結(jié)論。診斷目的：

6、為了防御疾病和進(jìn)健康。 （二）診斷學(xué)是論述診斷疾病的基本原則和方法的一門(mén)課程。其基本原則就是研究癥狀體征發(fā)生的基本規(guī)律和機(jī)理以及建立診斷的思維程序?；驹\斷方法包括：詢問(wèn)病史、體檢、實(shí)驗(yàn)室檢查、以及其他檢查如：心電圖、超聲檢查、內(nèi)窺鏡、CT、核磁共振等等。 （三）基因診斷是診斷學(xué)的續(xù)寫(xiě)，是診斷學(xué)的新篇章，從這個(gè)意義上來(lái)說(shuō)： 基因診斷遵循診斷學(xué)的基本原則； 基因診斷的基礎(chǔ)是醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)，專業(yè)基礎(chǔ)是醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)，不同的是我們?cè)诨蛩缴希瑢W(xué)習(xí)和研究：基因解剖（結(jié)構(gòu)）、基因生理（轉(zhuǎn)錄翻譯等）、基因病解（結(jié)構(gòu)異常），基因病生（表達(dá)異常），然后主要應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)手段進(jìn)行基因診斷。,（六）基

7、因診斷的思維程序： 第一套：逆向遺傳學(xué)（reverse genetics） 思維程序 1.提取人類基因組（總）DNA； 2.建立DNA文庫(kù)（DNA BANK）； 3.克隆任一DNA 片段作為探針。 4.確立該探針在基因組中的位置；這種探針在基因組中的位置一旦被確定下來(lái)，就可以成為遺傳標(biāo)記（genetic marker）. 5.大量應(yīng)用此類新的遺傳標(biāo)記(用染色體步移法或染色體跳躍法)建立各條染色體的連鎖基因圖譜，最終建立整個(gè)人類的基因圖譜。 6.篩選遺傳病病人或疑有與基因有關(guān)的疾病的病人； 7.克隆病變基因8.比較正?；蚝彤惓；虻牟顒e推測(cè)正常異常基因產(chǎn)物（蛋白質(zhì)）在細(xì)胞中定位以及生理病理效應(yīng)

8、。,第二套 拿來(lái)主義 1.您診斷/研究的疾病是否：與/有/知道 1）基因有關(guān)； 2）該基因的正常/異常序列； 3）該基因結(jié)構(gòu)/表達(dá)異常的類型； 4）特異性探針/PCR引物； 5）轉(zhuǎn)錄物； 6）表達(dá)產(chǎn)物/表達(dá)產(chǎn)物功能/表達(dá)產(chǎn)物功能測(cè)定方法。 2.據(jù)1設(shè)計(jì)基因診斷方案。,第二節(jié) 基因診斷的分子生物學(xué)基礎(chǔ) 一、基因診斷的理論 （一）生物大分子結(jié)構(gòu)和功能 （二）基因組結(jié)構(gòu)和功能 （三）遺傳信息的復(fù)制和表達(dá) （四）基因表達(dá)的調(diào)控 （五）細(xì)胞通訊與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子機(jī)制 （六）癌基與抑癌基因 （七）基因與疾病,二、 基因診斷的技術(shù) （一）核酸分子雜交， 在這些方法中， 1.Southern印跡法 是最經(jīng)典

9、的基因分析方法，不但能檢出特異的DNA片段，而且能進(jìn)行定位和測(cè)定分子量，可用于基因的酶切圖譜分析、基因突變分析等。 2.Northern印跡法 可用于組織細(xì)胞中總RNA或mRNA的定性和定量分析。 3.斑點(diǎn)雜交 可用基因組中特定基因及其表達(dá)的定性及定量分析，方法簡(jiǎn)單、快速靈敏、樣品用量少；其缺點(diǎn)是不能鑒定所測(cè)基因的分子量，特異性不高，有一定比例的假陽(yáng)性。 4.原位雜交 可查明染色體中特定基因的位置，用于染色體疾病的診斷；原為雜交的結(jié)果是顯示有關(guān)核酸序列的空間位置情況，因此可檢出含核酸序列的具體細(xì)胞，細(xì)胞的具體定位，數(shù)目和類型，可檢出基因和基因產(chǎn)物的亞細(xì)胞定位。,(二）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）

10、PCR技術(shù)在基因診斷中已得到廣泛應(yīng)用。在應(yīng)用中，PCR常與其它技術(shù)如分子雜交，限制酶酶譜分析，單鏈構(gòu)象多態(tài)性檢測(cè)，限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析，DNA序列測(cè)定等聯(lián)合應(yīng)用。 （三）單鏈構(gòu)象多態(tài)性 單鏈構(gòu)象多態(tài)性（single strand conformation polymorphism,sscp）檢測(cè)是一種基于單鏈DNA構(gòu)象差別來(lái)檢測(cè)點(diǎn)突變的方法，常與PCR聯(lián)合應(yīng)用，稱為PCRSSCP技術(shù)。,（四）限制酶酶譜分析 基因突變可能導(dǎo)致基因上某一限制酶位點(diǎn)的丟失或其相對(duì)位置發(fā)生改變，以此酶消化待測(cè)DNA和野生型對(duì)照DNA，通過(guò)比較二者的酶切片段的長(zhǎng)度、數(shù)量上的差異就可判斷待測(cè)DNA的突變情況。 （五）

11、DNA序列測(cè)定 DNA序列測(cè)定是進(jìn)行基因突變檢測(cè)的最直接、最準(zhǔn)確的方法，可以確定突變的部位的突變的性質(zhì)。 （六）DNA芯片技術(shù) 應(yīng)用DNA芯片，可以檢測(cè)基因的結(jié)構(gòu)及其突變多態(tài)性，對(duì)基因表達(dá)的情況進(jìn)行分析。,三、基因診斷的內(nèi)容 （一）基因結(jié)構(gòu)異常（基因突變檢測(cè)） 、點(diǎn)突變 1）已知的點(diǎn)突變 2）未知的突變 2、少數(shù)核首酸的缺失或插入 3、大片段丟失或插入 4、基因重排（染色體易位） 5、基因擴(kuò)增 （二）基因表達(dá)異常（基因轉(zhuǎn)錄物探測(cè)） 1、mRNA相對(duì)定量 2、mRNA絕對(duì)定量 3、mRNA長(zhǎng)度分析,（三）連鎖分析 （了解內(nèi)容） 1、限制性片段長(zhǎng)度 2、性家系連鎖分析 3、連鎖不平衡 （四）病原體

12、的診斷 入侵基因的種類,四、基因診斷的途徑 （一）內(nèi)源性基因診斷的途徑主要有3種： 即：基因突變的檢測(cè) mRNA的探測(cè) 連鎖分析 采取哪一條途徑主要取決于： 對(duì)致病基因及其分子病理學(xué)的了解程度； 致病基因本身突變類型的復(fù)雜性。,（二）外源基因的入侵的病原體的診斷 1.入侵基因組DNA具有特異的DNA序列，以區(qū)別于別種生物體DNA序列。 2.能把這種特異的DNA序列制成具有特定信號(hào)的探針。 五、基因診斷的基本方法 （一）點(diǎn)突變 1、已知點(diǎn)突變 PCR/ASO探針斑點(diǎn)（或缺縫）雜交法 （1）據(jù)突變（位點(diǎn)序列：）a.設(shè)計(jì)一對(duì)引物，b.合成一對(duì)寡核苷酸探針（正常/突變序列雜合子） （2）提取患者基因組

13、（總）DNAPCR擴(kuò)增（突變序列） DNA片段（與ASO）斑點(diǎn)（或狹縫）雜交 洗脫條件：完全配對(duì)（牢）不洗脫； 不完全配對(duì)（不牢）易洗脫。,（3）結(jié)果分析： 與正常探針雜交，而不和突變探針雜交表示受檢者不存在這種基因； 只與突變探針雜交，說(shuō)明突變基因是純合子； 與正常/突變， 探針都可雜交， 說(shuō)明突變基因是雜合子； 與正常/突變探針都不雜交說(shuō)明不是已發(fā)現(xiàn)的突變。 2、未知點(diǎn)突度 SSCPPAGE法、測(cè)序法 提取DNADNA變性SSCPPAGE 測(cè)序確證 （二）少數(shù)較苷酸缺失或插入的診斷方法可以用（一）的方法,（五）基因擴(kuò)增 限制酶酶切待測(cè)基因的DNA或CDNA片段作為探針（位置改變）法光密度掃

14、描（定量）。 基因擴(kuò)增拷貝數(shù)增加（分子量）電泳行為改變雜交條帶位置改變與標(biāo)準(zhǔn)/正常對(duì)照定性/量掃描。,（四）基因重排（染色體易位） 多次/重PCR電泳分析、其前提是已知重排基因和重排位點(diǎn)的序列。,（三）大片段丟失 多次多重失PCR電泳分析 設(shè)計(jì)引物使獲得產(chǎn)物序列長(zhǎng)短不同，有固定大小，據(jù)不同長(zhǎng)短序列存在與否，檢測(cè)是否有某些基因片段的缺失與突變（注意正常對(duì)照）。,5,3,引物1,引物3,致病基因,引物4,引物2,5,3,引物1,引物3,（六）多態(tài)性分析 1、RFLP （）基本方法：PCR產(chǎn)物酶切產(chǎn)物電泳分析。基因連鎖分析（PCR/RFLP連鎖分析法）。 人群個(gè)體核苷酸序列的差異性、稱為DNA的多態(tài)

15、性。由此影響限制酶切部位點(diǎn)而致RFLP（限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性）。RFLP按照孟德?tīng)柗绞竭z傳。故： 可檢測(cè)人群中個(gè)體間存在的RFLP（限制酶酶譜分析） 遺傳病的基因診斷（連鎖分析）。如果一特定家庭（系）中，某一致病基因與特異性的多態(tài)性片段緊密連鎖（連鎖是指同一條染色體上相鄰近的基因一起被被遺傳），就可以用這種多態(tài)性片段作為“遺傳標(biāo)志”，來(lái)判斷家庭成員或胎兒基因組中是否攜帶有致病基因。對(duì)于某一限制酶來(lái)說(shuō)：酶切位點(diǎn)在人群中存在共性（可能一樣對(duì)核酶譜來(lái)說(shuō)存在多態(tài)性（不一樣）。 （） DNA多態(tài)性位點(diǎn)普遍存在整個(gè)人類基因組，估計(jì)每100個(gè)核苷酸便有一個(gè)發(fā)生突變，出現(xiàn)多態(tài)性。如果建立起一套以20CM間隔平

16、均分布于整個(gè)基因的RFLP位點(diǎn)，選用合適的探針，理論上可以對(duì)所有的遺傳病進(jìn)行基因診斷。,（3）關(guān)于基因連鎖分析 多數(shù)遺傳病診斷途徑， 因?yàn)椋航?jīng)基因突變檢測(cè)途徑，適用病種有限，原因是： a、致病的基因可在任何位點(diǎn)上產(chǎn)生突變，致使同一疾病有不同的突變類型。 b、不少致病基因僅僅知道在哪一號(hào)染色體位置，尚未克隆出來(lái)，對(duì)其結(jié)構(gòu)和分子機(jī)制毫無(wú)能知。 c、有的致病基因尚未確定。 基因連鎖分析必須具備的先決條件： a、家系中的關(guān)鍵成員（父母）為RFLP的雜合子，才能區(qū)分兩條同源染色體。連鎖遺傳病只要母親為某一RFLP的雜合子即可。 b、子代存在患病的純合子，這樣才能確定致病基因與哪條染色體RFLP共同遺傳。

17、 c、任何一種遺傳病、單獨(dú)使用一種RFLP、均有相當(dāng)一部分父母染色體無(wú)法區(qū)分、所以要聯(lián)用若干種RFLP及相當(dāng)探針，提交診斷。 d、待檢親代必須為生物學(xué)意義親代。,連鎖不平衡并不多見(jiàn)： 指某一個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)在基因和等位突變基因中的分布頻率有顯著差異。因此可用與特異等位基因連鎖這一多態(tài)性進(jìn)行基因診斷。如： 正常人酶切圖譜有9/9、22/9、22/22kb型，-地貧純合子只有9/9kb型（kan發(fā)現(xiàn)撕工島人-珠蛋白基因3BamHI的多態(tài)性位點(diǎn)）故不經(jīng)家系分析，僅以這一多態(tài)性即可用產(chǎn)前診斷。 RFLP連鎖分析可能常是可靠的。連鎖分析存在一定的錯(cuò)誤原因是： a、人為差錯(cuò)。b、RFSP連鎖分析方法本身的差錯(cuò)

18、程度（方法本身局限性。） 因?yàn)樵跍p數(shù)分裂中間傳染色體的某些區(qū)域可以發(fā)生重組和交換，從而使得原先共同遺傳的DNA突變與RFLP發(fā)生分離，這樣情況下作出連鎖分析結(jié)果就會(huì)發(fā)生錯(cuò)誤。診斷的錯(cuò)誤率可以從DNA標(biāo)志與疾病的共同遺傳度來(lái)估計(jì)，重組率高于5%的連鎖探針不宜采用，事實(shí)表明，除個(gè)別情況外，由于染色體重組所致的錯(cuò)誤診斷小于1%，因此，RFLP連鎖分析通常是可靠的。,2、微小重復(fù)序列（如CA序列）多態(tài)性分析。 （）基本方法： PCR/PAGE家系分析法（教材P146）。 重復(fù)單位和重復(fù)次數(shù)不同具有高度的遺傳多態(tài)性，對(duì)他們和等位基因進(jìn)行家系分析，說(shuō)明他們遵照孟德?tīng)栠z傳規(guī)律、是一套新的 遺傳標(biāo)記系統(tǒng) （）

19、應(yīng)用舉例： 產(chǎn)前基因診斷杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良（突變類型未明）。,（七）基因表達(dá)異常的診斷。 1、mRNA相對(duì)定量 （1）點(diǎn)雜交（或狹縫雜交）光密度掃描法； （2）RTPCR； 2、mRNA絕對(duì)定量 RTPCR/競(jìng)爭(zhēng)性PCR 3、mRNA長(zhǎng)度分析 Northern雜交法，RTPCR產(chǎn)物電泳分析 （八）病原體的診斷 PCR法,第三節(jié) 基因診斷的應(yīng)用 一、 遺傳病的基因診斷 （一）血紅蛋白病 血紅蛋白病是由于血紅蛋白合成異常所致的遺傳性血液病。習(xí)慣上分為異常血紅蛋白病和地中海貧血類。 1.異常血紅蛋白病是 珠蛋白肽鏈結(jié)構(gòu)的改變變導(dǎo)致主要功能部位氨基酸的置換，影響Hb的溶解度、穩(wěn)定性及生物學(xué)功能。分子基礎(chǔ)：

20、單堿基替代，缺失、插入 . 地中海貧血（地中海貧血和地中海貧血） 是珠蛋白合成速率降低，導(dǎo)致鏈和非鏈合成的不平衡多余的珠蛋白鏈沉積在Rbc膜上改變了膜的通透性和硬度導(dǎo)致溶血性貧血。,（二）杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥（DMD）和貝克營(yíng)養(yǎng)不良癥（BMD）,1. DMD和BMD是常見(jiàn)的性連鎖隱性遺傳病， 2. 主要特征是進(jìn)行性肌萎縮和腸肌假性肥大，XP21.2121.3區(qū)抗肌萎縮蛋白基因突變形式不同。 DMD多在5歲發(fā)病，在20歲左右由于心力和呼吸衰竭而死亡，其發(fā)病率為活產(chǎn)男嬰的1/3500。 BMD癥狀較DMD為輕，壽命較長(zhǎng)，并有生育能力，發(fā)病率為1/30000。 3. 分子基礎(chǔ)： 抗肌萎縮蛋白基因內(nèi)（1）

21、DNA片段缺失（60%的病例導(dǎo)致閱讀框移碼移碼實(shí)變致DMD，整碼缺失BMD）。 （2）部分重復(fù)（病例的5%） （3）缺失或重復(fù)的2個(gè)熱點(diǎn)區(qū)該基因5端處4555外顯子范圍內(nèi)。,（三）苯酮尿癥（PKU） 1、苯尿癥是一種常見(jiàn)的隱性患傳性氨基酸代謝病。 2、主要特征：（1）苯丙氨酸 酪氨酸多巴兒茶酚胺 苯丙酮酸 酪胺 黑色素 （2）患兒出生后須及早得到低phe飲食治療，否則發(fā)生不可 逆大腦損害和嚴(yán)重智力發(fā)育障礙。 3、分子基礎(chǔ)：（1）迄今約3/4的導(dǎo)致中國(guó)人經(jīng)典型重PKU的突基因已被查清 ，它們分屬11種基因PAH基因點(diǎn)突變。體外研究表明，這些突變導(dǎo)致PAH活力或喪失。 （2）PAH第11外顯子的第

22、399密碼GTA（val）GTT（val）中性突變：不改變?nèi)魏蜗拗泼缸R(shí)別位點(diǎn)，故又稱“序列多態(tài)性”。這一“序列多態(tài)性”在PKU患者和正常人中存在著連鎖不平衡性， 故可作為一種“遺傳標(biāo)記”應(yīng)用于產(chǎn)前診斷。,苯丙氨酸,羥化酶,（肝、PAH）,4、DNA診斷：PCR/ASO探針?lè)?。若待診斷的PKU家系的基因突變類型尚屬“未知”或無(wú)RFLP信息。PCR/SSCP直接則序法不定期出導(dǎo)PKU的點(diǎn)突變。 5、序列多態(tài)性連鎖分析 前提是該家系存在述第399密碼子序列多態(tài)性 用于產(chǎn)前診斷： （不知基因?qū)嵶冾愋停矡o(wú)RFLP信息。） 病案某孕婦曾生育一例PKU患者，現(xiàn)妊娠第二胎8周，要求對(duì)胎兒進(jìn)行產(chǎn)前診斷。 診斷

23、：（1）PAH基因的RFLP分析：該家庭除ECORI外，其它酶切點(diǎn)都不具有雜合性，而丈夫、患兒、孕婦、胎兒雙均為ECORI11/17kb片段的雜合子，因此胎兒可能正常，可能為PKU患者。據(jù)RFLP分析無(wú)法對(duì)胎兒作出產(chǎn)前診斷（為什么？缺乏基因連鎖分析先決條件。 （2）序列多態(tài)性：PCR/ASO探針DNA片段點(diǎn)雜交法。PCR擴(kuò)增父親、孕婦/患兒、胎兒PAH基因片段。合成ASO（相應(yīng)于第399密碼子中性實(shí)變序列的一對(duì)等位基因的特異ASO探針。雜交： 說(shuō)明： 患兒擴(kuò)增DNA片段與正常/中性突變ASO探針雜交; 父親;胎兒擴(kuò)增a、患兒的1個(gè)PKU，基因與密碼子399AT中性突變相偶（連鎖），這個(gè)PKU基

24、因來(lái)自母方。 a.孕婦。 b、胎兒沒(méi)有這一中性實(shí)變，可以排除胎兒為PKLL患者，結(jié)合ECLRI位點(diǎn)RFLP資料，可產(chǎn)和的診斷胎兒完全正常。c、胎兒出生后基因分析和隨方證實(shí)診斷正確。 DNA片段中能與正常的ASO探針雜交。,四、血友病 是一種遺傳性凝血功能障礙的出血性疾病，由于正常凝血過(guò)程中血漿凝血的活力有缺陷所致?；颊叱Ｒ虺鲅恢够蚶^發(fā)病而夭折，治療主要靠替代療法，輸入缺乏的血漿因子。重型血友病甲和乙的男性發(fā)病率為1/50001/50000。為甲型血友病和乙型血友病。 主要特征：,是一組X連鎖遺傳凝血缺陷疾病。 缺乏Xq遠(yuǎn)端的F（凝血因子）所致。 基因突變具極為異質(zhì)性，與地貧不同。（因子占X染

25、色體全長(zhǎng)0,1%，共186kb包括26個(gè)外顯子）不存在存族和群體特異性，幾乎每一種不同的甲型血友病家系都具有自已獨(dú)特的突變類型。（所以該病基因診斷不宜用PCR/ASO探針直接檢測(cè)點(diǎn)突變，而主要依賴RFLP連鎖分析）,也是X連鎖遺傳的凝血缺陷疾病。 約1%左右乙型血友病人FIX基因缺失（因而在用替代療法過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生FIX的抑制物）。 在非缺失（FIX基因）型中，已發(fā)現(xiàn)398種不同的基因突變。 （FIX基因定位在Xq26q27，全長(zhǎng)34kb包括8個(gè)外顯子）。,已克隆化FIXcDNA和DNA片段，鑒定了FIX基因的5個(gè)限制者多態(tài)性位點(diǎn)，故可用RFLP連鎖分析進(jìn)行產(chǎn)前診斷和攜帶者檢測(cè)。 病倒：乙型血友

26、家系分析FIX基因發(fā)現(xiàn)某患者缺失該基因5kbDNA序列（第23外顯子+第2內(nèi)含子全部+部分第1，第3內(nèi)含子） a、對(duì)該家系一例乙型血友病變高危妊娠產(chǎn)前基因診斷，診斷胎兒為男性乙型血友病患者。 b、對(duì)該孕婦第二胎產(chǎn)前診斷為女性乙型血友病基因攜帶者。 （上海醫(yī)遺傳所淅江乙型血友病家系）,4、診斷情況（報(bào)道）：,應(yīng)用克隆化FcDNA與VIII基因連鎖DNA片段和DX18、St14等分析了基因或旁側(cè)的限制酶酶切位點(diǎn)多態(tài)性，并采用PCR/BCLI或XbaI RFLP連鎖分析法進(jìn)行了甲型血友病的產(chǎn)前診斷和攜帶者檢測(cè)。 用PCR/SSCP法檢查了FVIII內(nèi)含子18處BCL I的多態(tài)性。 （終止妊娠對(duì)胎兒作

27、凝血子測(cè)定和DNA分析、證實(shí)產(chǎn)前診斷正確。）,二、傳染病的基因診斷,三、腫瘤的基因診斷 （一）基因重排的生理和病理 基因重排指某些基因片段改變?cè)瓉?lái)存在的順序，通過(guò)調(diào)整有關(guān)基因片段的連接順序，再重排為一個(gè)完整的轉(zhuǎn)錄單位 1.生理 （1）基因表達(dá)DNA水平的調(diào)控方式之一。 （2）免疫球蛋白分子多樣性的分子機(jī)理之一。 2.病理 重排和重組位點(diǎn)之間DNA片段移除，會(huì)使在恒定區(qū)兩側(cè)的某些限制酶切位點(diǎn)的位置發(fā)生改變?？捎茫?（1）限制性片段長(zhǎng)度改變； （2）分子雜交（恒定區(qū)域連接區(qū)基因?yàn)樘结槪?確定基因重排的存在與否，以對(duì)腫瘤進(jìn)行基因診斷。,免疫球蛋白重鏈基因探針（J）和輕鏈基因探針（k，入）對(duì)B細(xì)胞

28、淋巴瘤DNA的雜交圖譜。 說(shuō)明： 1、正常對(duì)照 2、B細(xì)胞淋巴瘤， 入基因無(wú)重排 ，重排后雜交端的位置 實(shí)驗(yàn)： 提取瘤細(xì)胞DNA酶切（至少2組以上）雜交（至少兩種以上）結(jié)論（看到2組以上的雜交圖譜改變時(shí)，即可下診斷結(jié)論）。,1 2,J,1 2,1 2,k,入,（二）基因內(nèi)部重排與B細(xì)胞淋巴瘤,（三）基因間重排（染色體易位） 淋巴樣腫瘤細(xì)胞的染色體易位 癌基因 腫 瘤 染色體易位 發(fā)生頻率 C-myc bc1-2 囊性淋巴瘤 t（14;18)( q32;qI1) 85% 兩個(gè)重要事實(shí)： 1、囊性淋巴瘤染色體易位頻率最高； 2、所有易位都涉及到C-onc的易位。 這對(duì)于診斷，分型和預(yù)后具有重要的意

29、義。,1.圖：22號(hào)染色體和9號(hào)染色體易位導(dǎo)致慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）易位結(jié)果22號(hào)染色體長(zhǎng)臂丟失，形成微小的ph（費(fèi)城首次發(fā)現(xiàn)的）染色體。（CML中9095%的病例具有ph染色體）。,（四）基因重排與CML的診斷,9,22,9q+,22q-,2.說(shuō)明： 1.ph染色體是染色體易位t（9;22） 2.C-onc C-ab 和c-sis分別位于第9號(hào)和第22號(hào)染色體長(zhǎng)臂上，易位涉及到兩個(gè)癌基因的互換（基因間重排，但通常不涉及它們的基因內(nèi)部重排，故一般認(rèn)為重排后它們的基因結(jié)構(gòu)并無(wú)改變）。 3.CML DNA分子中最具有結(jié)構(gòu)特點(diǎn)并可以用于診斷的序列區(qū)域是bcr，研究發(fā)現(xiàn)，第9號(hào)染色體斷裂點(diǎn)位置變化

30、很大，多半出現(xiàn)在c-abl5端100kb區(qū)間內(nèi)；第22號(hào)染色體斷裂點(diǎn)較集中，基本上存在于一個(gè)5.8kb區(qū)域內(nèi)。這個(gè)區(qū)域叫斷裂點(diǎn)簇區(qū)即bcr。 4.CML發(fā)生染色體易位時(shí)，先在各自的斷裂點(diǎn)處斷開(kāi)，然后進(jìn)行基因間重排，使c-abl/bcr形成融合基因，此基因可轉(zhuǎn)錄和翻譯自己特異的mRNA和蛋白質(zhì)。 5.為了準(zhǔn)確測(cè)定bcr重排，須： 選擇適當(dāng)?shù)奶结槪?選擇兩個(gè)以上的限制酶酶解產(chǎn)物作雜交分析。 CML具有bcr重排（多數(shù)）和bcr未重排型（少數(shù)） Bcr重排等同ph陽(yáng)性； Bcr重排與CML緩解期復(fù)發(fā)有正性關(guān)系，與預(yù)后有關(guān)系，與ALL，AML有關(guān)系。 PCR技術(shù)檢測(cè)bcr/abl轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物也可用作CML

31、的診斷，預(yù)后和判斷治療效果等用途。,（五）腫瘤異質(zhì)性的分子基礎(chǔ)：基因表達(dá)圖譜分析用于腫瘤分類分期 （六）基因擴(kuò)增與乳腺癌的預(yù)后 （七）原位雜交技術(shù)在腫瘤病理診斷中的應(yīng)用（自學(xué)）。四、基因診斷方法在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 （一）DNA指紋（基因指紋） 概念在人體基因組DNA中存在高度可變的小衛(wèi)星區(qū)域，在同一酶解物的Sou-thern印跡圖上同一個(gè)體的不同組織來(lái)源的DNA的譜帶完全一致，而不同個(gè)體之間（除非同卵雙生）譜帶都不相同，如同人的指紋具有高度個(gè)體特異性一樣，這種southern印跡圖被稱為DNA指紋。,1.Jeffreys據(jù)珠蛋白基因座近處出現(xiàn)的RFLP頻率及測(cè)定的核苷酸總數(shù)，推算出人基因的異質(zhì)性

32、是非常大的，約100bp中就有一個(gè)差異，但并不完全均一，有的順序（核心序列）比較穩(wěn)定，有的區(qū)域變動(dòng)很大（超變區(qū)）它們都是一些很短的重復(fù)順序。 2.對(duì)這些重復(fù)順序酶切時(shí)，可產(chǎn)生16，17、32、33、3F、4、62和3F6bp長(zhǎng)度不等的限制性片段。 3.人工合成很短的重復(fù)序列作為探針，與酶切的人體DNA作southernblot，可得出長(zhǎng)度不等的雜交帶，雜交帶的數(shù)目和分子大小，幾乎不可能有兩個(gè)人是完全相同的，因此，把這種雜交圖形稱為DNA指紋，它是基因特異診斷有力的根據(jù)。 4.DNA指紋按孟德?tīng)柗绞竭z傳。 （二）DNA指紋分析在法醫(yī)學(xué)的應(yīng)用于個(gè)體識(shí)別和親子鑒定。,自測(cè)題 一、單項(xiàng)選擇題 1、19

33、76年簡(jiǎn)悅威采用液相DNA分子雜交技術(shù)在世界上首次完成了（） A、地中海貧血的基困診斷B、地中海貧血的基困診斷 C、血紅蛋白病M的基因診斷D、瘧原蟲(chóng)的基因診斷 2、基因診斷是在基因水平上對(duì)疾病或人體的狀態(tài)進(jìn)行診斷，它包括（） A、血清學(xué)診斷B、生化學(xué)診斷C、產(chǎn)前診斷D、病理學(xué)診斷 3、在核酸分子雜交的基因分析方法中，最經(jīng)典的是（） A、Northern blot B Western blot C dot blot D. Southern blot 4、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）又稱為基因體外擴(kuò)增，它與基因體內(nèi)擴(kuò)增不同的是（） A、反應(yīng)體系模板不同B、聚合酶輔基不同 C、聚合反應(yīng)方向不同D、反應(yīng)體

34、系所需溫度差異,5、檢測(cè)長(zhǎng)度相同而構(gòu)象不同的單鏈DNA需要進(jìn)行（） A、瓊脂糖凝膠電泳B、聚丙烯酰胺凝膠電泳 C、瓊脂粉電泳D、圓盤(pán)電泳 6、限制酶酶譜分析中，常用的限制酶是指（） A、型限制酶B、型限制酶C、型限制酶D、型和型限制酶 7、限制酶酶切圖譜經(jīng)常被人們稱作（） A、DNA的遺傳圖譜B、DNA的連鎖圖譜C、DAN的消化圖譜D、DNA的物理圖譜 8、核酸序列測(cè)定方法始建立于（） A、20世紀(jì)50年代初期B、20世紀(jì)60年代初期 C、20世紀(jì)70年代后期D、20世紀(jì)80年代后期,9、Sanger雙脫氧末端終止測(cè)序法的鏈終止劑是（） A2、3二脫氧核糖核苷酸B、2、4二脫氧核糖核苷酸 C、

35、3、4二脫氧核糖核苷酸D、3、5二脫氧核糖核苷酸 10、20世紀(jì)90所代初，適應(yīng)“后基因組時(shí)代”的到來(lái)，基因芯片技術(shù)率先（） A、在美國(guó)啟動(dòng)B、在日本啟動(dòng)C、在歐洲啟動(dòng)D、在以色列啟動(dòng) 11、基因芯片的實(shí)質(zhì)是一種（） A、高密度的單克隆抗體列陣B、高密度的多肽列陣C、高密度的核酸列陣D、高密度寡核苷酸列陣 12、對(duì)于突變位點(diǎn)已被闡明的一些遺傳病，可以采用基因診斷的方法是（） A、PCR/ASO探針?lè)?B、PCR/SSCP/sequencing法 C、 RT/PCR法 D、 RFLP分析法,13.-珠蛋白質(zhì)基因蔟定位于（ ） A、6P13.3- Pter， B、17 P13.3-Pter， C、

36、18 P13.3- Pter， D、19 P13.3- Pter， 14、-地中海貧血患者的分子缺陷主要有（ ） A、2種基因型 B、3種基因型 C、4種基因型 D、5種基因型 15、地中海貧血是一種（ ） A、巨幼紅細(xì)胞貧血； B、營(yíng)養(yǎng)性缺鐵性貧血； C、遺傳性溶血性貧血； D、障礙性貧血 16、B-地中海貧血患者的基因缺陷主要有（ ） A、少數(shù)核苷酸的缺失或插入； B、大片段丟失或插入； C、基因重排或染色體易位； D、點(diǎn)突變或閱讀框易位,17、杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥（DMD）患者基因缺失的主要熱點(diǎn)區(qū)位于DMD基因的（ ） A、起始區(qū)；B、尾區(qū)；C、中央部位；D、中央部位的內(nèi)含子區(qū)域 18、甲型

37、血友病的基因缺陷是（ ） A、 凝血因子片段缺失，點(diǎn)突變或插入； B、 凝血因子片段缺失，點(diǎn)突變或插入； C、 PAH的嚴(yán)重缺乏； D、CK的水平升高 19、用基因診斷的方法對(duì)感染性疾病進(jìn)行診斷的主要優(yōu)點(diǎn)是： A、 診斷過(guò)程對(duì)人體沒(méi)有損傷；B、可以進(jìn)行病因診斷； C、方法簡(jiǎn)便，費(fèi)用較低； D、可以早期診斷 20、目前普遍采用SOUTHERN印跡雜交進(jìn)行DNA指紋分析，用于法醫(yī)案檢工作中的個(gè)體識(shí)別和親子鑒定，其分子基礎(chǔ)是（ ） A、 DNA的多態(tài)性； B、RNA的多態(tài)性； C、蛋白質(zhì)的多態(tài)性； D、氨基酸的多態(tài)性,二、多項(xiàng)選擇題 1、人類疾病的發(fā)生常常涉及到（ ） A、 內(nèi)源基因的突變； B、外

38、源基因的入侵； C、 基因重組； D、姐妹染色體交換 2、機(jī)體對(duì)外源性病原體入侵的防御體現(xiàn)在（ ） A、整體水平； B、細(xì)胞水平； C、分子水平； D、基因水平 3、基因診斷的目的是為了（ ） A、確診相應(yīng)的疾??； B、得出相應(yīng)的結(jié)論 C、作為防治疾病的依據(jù) D、開(kāi)展基因治療 4、從基因診斷的發(fā)展史來(lái)看，具有代表性的分子生物學(xué)技術(shù)有（ ） A、核酸分子雜交； B、PCR； C、DNA芯片技術(shù)； D、限制性酶切圖譜分析技術(shù),5、基因診斷的技術(shù)和方法按原理大致可分為（ ） A、DNA探針技術(shù)； B、PCR技術(shù) C、DNA探針和PCR結(jié)合的技術(shù) D、DNA測(cè)序技術(shù) 6、基因診斷的途徑有： A、直接探

39、測(cè)基因結(jié)構(gòu)是否存在突變； B、檢測(cè)基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA是否表達(dá)異常； C、檢測(cè)基因表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化； D、根據(jù)臨床診斷的初步結(jié)論進(jìn)行基因診斷 7、對(duì)感染性疾病進(jìn)行基因診斷的分子生物學(xué)依據(jù)是： A、DNA或者RNA是生物遺傳信息的載體； B、所有生物使用相同的構(gòu)件分子； C、每種生物大分子在細(xì)胞中有特定功能 D、每個(gè)物種的特性是通過(guò)它具有的一套與眾不同的核酸和蛋白質(zhì)而保持的 8、基因突變存在以下共同特點(diǎn)，即（ ） A、稀有性 B、隨機(jī)性 C、可逆性 D、有害性,9、目前常用的基因探針有（ ） A、cDNA探針 B、基因組探針 C、人工合成DNA探針 D、RNA探針 10、常用的基因探針標(biāo)

40、記的方法有（ ） A、地戈辛標(biāo)記 B、生物素標(biāo)記 C、放射性 P標(biāo)記 D、放射性35S標(biāo)記 三、名詞解釋 1、 基因診斷 2、DNA指紋 3、 RFLP 四、答題 1、簡(jiǎn)述你對(duì)基因診斷的概念的理解 2、簡(jiǎn)述基因診斷的基本途徑 3、簡(jiǎn)述基因診斷的基本技術(shù)和方法 4、簡(jiǎn)述基因指紋在法醫(yī)案檢工作中個(gè)體識(shí)別與親自鑒定的分子生物學(xué)基礎(chǔ) 五、 論述題 1、試論基因診斷方法與傳統(tǒng)疾病診斷方法的區(qū)別與聯(lián)系？ 2、 論基因診斷與醫(yī)學(xué)診斷學(xué)的辨證關(guān)系 3、試論遺傳性疾病基因診斷的思維程序 4、試論感染性疾病基因診斷的思維程序,參考答案與題解 一、單項(xiàng)選擇題 1、A、液相雜交是指在溶液中進(jìn)行的雜交反應(yīng)，雜交反應(yīng)后需

41、將雜交分子（雙鏈）與未雜交分子（單鏈）分開(kāi)，再判斷雜交程度，通常靈敏度較低。1976年簡(jiǎn)悅威定成-地貧的基因診斷為基因診斷的餓發(fā)展作出了開(kāi)創(chuàng)性貢獻(xiàn)。 2、C產(chǎn)前診斷關(guān)系到優(yōu)生優(yōu)育和胎兒質(zhì)量。有遺傳病生育夫婦中有一方為常染色體顯性或者父方為X連鎖隱性遺傳病的攜帶者及凡可進(jìn)行產(chǎn)前基因診斷的疾病，妊娠確立后應(yīng)在適當(dāng)時(shí)間接受產(chǎn)前診斷。血清學(xué)診斷、生化學(xué)診斷和病理學(xué)診斷均為表型診斷（進(jìn)一步參考論述題1）,3.D southern blot是經(jīng)典的核酸分子雜交基因分析方法，其余核酸分子雜交基因分析方法均由此發(fā)展或派生而來(lái)。 4.D 核酸體內(nèi)擴(kuò)增 核酸體外擴(kuò)增,5、BPAGE分辨率高，適合于SSCP分析，瓊

42、脂糖凝膠用于一般核酸電泳，瓊脂粉一般用于細(xì)菌固體培養(yǎng)基配制。圓盤(pán)電泳是PAG一種古老形式，已逐漸被淘汰。 6、B 型限制酶能夠識(shí)別DNA分子特異序列，并在該部位切割，故能獲得特異的DNA片段。I型和III型限制酶不具備上述特性。 7、D標(biāo)明限制酶在DNA分子上的限制位點(diǎn)數(shù)限制片段大小以及排列順序的圖譜通常稱為DNA的物理圖譜或者是限制性圖譜，遺傳圖、連鎖圖請(qǐng)參考人類基因組計(jì)劃相關(guān)知識(shí) 8、C 由Sanger等開(kāi)始建立。,9、A 脫氧核糖核苷酸分子戊糖環(huán)第三位脫氧，則無(wú)法與下一個(gè)脫氧核苷酸形成35磷酸二酯鍵，多核苷酸鏈無(wú)法延伸，故為鏈終止劑。是否存在天然或人工的2、4二脫氧核糖核苷酸和3、4二脫

43、氧核糖核苷酸及其作用尚不得而知。核苷酸戊糖環(huán)第五位連接磷酸無(wú)氧可脫。 10、A 11、C 受人類基因組計(jì)劃的促進(jìn)和計(jì)算機(jī)芯片技術(shù)的啟發(fā)，基因芯片技術(shù)首先在美國(guó)啟動(dòng)，在對(duì)開(kāi)發(fā)利用基因組計(jì)劃的研究成果有著深遠(yuǎn)的意義。（進(jìn)一步參考第十五章基因芯片技術(shù)）。 12、A 診斷已知的點(diǎn)突變的遺傳性疾病，可以首選PCR/ASO探針?lè)?，擴(kuò)增DNA片段與相應(yīng)ASO（等位基因特異性寡核苷酸）探針雜交，即可明確診斷是否有突變及突變是化合子還是雜交子。診斷未知的點(diǎn)突變可用PCR/SSCP/SEQUENCING方法，通過(guò)確證性測(cè)序可以得知點(diǎn)突變的位置。RT/PCR法用于基因表達(dá)異常的診斷，RFLP 法則適用于多態(tài)性分析。

44、,13、A 14、 B 15、C 地中海貧血是一種由于珠蛋白合成障礙遺傳性溶血性貧血。其病理機(jī)制及巨幼紅細(xì)胞貧血，營(yíng)養(yǎng)性缺鐵性貧血和障礙性貧血進(jìn)一步參考內(nèi)科學(xué)。 16、D 17、C 18、A 19、D 內(nèi)源性基因突變，與基因型改變沒(méi)有引起表型改變或不足以引起表型改變或感染性疾病早期，外源入侵基因，不足以引起機(jī)體表型變化（如感染量極少），用基因診斷方法則可以進(jìn)行早期診斷?；蛟\斷屬于病因診斷，但不是其主要優(yōu)點(diǎn)。診斷是用醫(yī)學(xué)科學(xué)的方法對(duì)疾病的表現(xiàn)所作出的辨證邏輯的緒論。臨床診斷過(guò)程對(duì)人體都有一定的影響?；蛟\斷正逐步走向臨床。 20、A 1985年Jeffreys等人在人體基因組DNA中發(fā)現(xiàn)了高度

45、可變的小衛(wèi)星區(qū)域，在同一酶解物的Souther blot 圖上，不同個(gè)體之間除非同卵雙生譜帶都不同，原因是小衛(wèi)星的高可變區(qū)形成的DNA的多態(tài)性。屬于蛋白質(zhì)、氨基酸和RNA尚沒(méi)有多態(tài)性這一說(shuō)法。,一、 多項(xiàng)選擇題 1、 AB 人類疾病的發(fā)生往往涉及內(nèi)源性基因突變，如遺傳病和外源性基因入侵，如感染性疾?。?xì)菌、寄生蟲(chóng)感染等）?；蛑亟M和姊妹染色體交換是基因“生理 ”的過(guò)程，可能產(chǎn)生疾病，但是從遺傳學(xué)上來(lái)說(shuō)是希有事件。 2、 ABCD 機(jī)體抵御外源性病原體體現(xiàn)在整體水平，表現(xiàn)為機(jī)體調(diào)動(dòng)自身免御系統(tǒng)的整體防御。在細(xì)胞水平如M吞噬異物，分子水平則有抗原抗體反應(yīng)。基因水平則表現(xiàn)為限制修飾系統(tǒng)對(duì)入侵DNA的

46、水解作用。 3、 A B C D 4、 ABC 5、 ABC 6、ABD 檢測(cè)基因表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化屬于表型診斷。基因診斷必須建立在臨床診斷的初步結(jié)論的基礎(chǔ)上，不是隨意診斷。 A D 根據(jù)生命狀態(tài)基本邏輯原理每個(gè)物種都有一套與眾不同的核酸，此為感染性疾病診斷的分子學(xué)依據(jù)。,7、AD 據(jù)生命狀態(tài)基本邏輯原理，每個(gè)物種都有一套與眾不同的核酸，此為感染性疾病診斷的分子生物學(xué)依據(jù)。 8、ABCD 從遺傳學(xué)上來(lái)說(shuō)，基因突變有如下特點(diǎn)： （1）希有性 基因突變?cè)谌魏我环N生物都是一種希有事件，對(duì)人類來(lái)說(shuō)，其突變頻率約為10-510-6 /細(xì)胞代，細(xì)菌為10-710-8/細(xì)胞代； （2）隨機(jī)性 基因突變

47、不論對(duì)細(xì)胞、個(gè)體或是對(duì)基因或是對(duì)基因表型影響的方向來(lái)說(shuō)，都是隨機(jī)事件； （3）可逆性 基因可以發(fā)生正突變，也可發(fā)生回復(fù)突變，只不過(guò)二者頻率不一樣，這意味著只是基因分子結(jié)構(gòu)的改變，并非基因的丟失； （4）有害性大部分基因突變的表型效應(yīng)都是有害的，人類的各種遺傳病都是在進(jìn)化過(guò)程中經(jīng)突變而產(chǎn)生的。 9、 ABCD10、ABC,三名詞解釋 1、 基因診斷(gene diagnosis) 是在基因水平上對(duì)疾病或人體狀態(tài)進(jìn)行診斷的一種新的診斷疾病的方法，它包括產(chǎn)前診斷。 2、 DNA指紋（DNA finger-printing） 1985年英國(guó)學(xué)者發(fā)現(xiàn)人類基因組中存在高度可變的 小衛(wèi)星區(qū)域，在同一酶降解物的Southern印跡圖上同