1、PAGE 4武岡市展輝醫(yī)院 微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序 第 PAGE 92 頁 共 NUMPAGES 92 頁武岡市展輝醫(yī)院 微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序 展輝醫(yī)院(yyun)檢驗(yàn)科 微生物檢驗(yàn)(jinyn)操作程序（SOP）（第一版）制作(zhzu)人： 劉新平啟用日期：2011年5月28日 目 錄微生物室工作(gngzu)崗位職責(zé)4微生物檢驗(yàn)(jinyn)室內(nèi)質(zhì)控操作程序（SOP）4微生物室標(biāo)本(biobn)接收程序（SOP）8微生物室標(biāo)本接種程序（SOP）9病原微生物污染處理程序（SOP）10血液及骨髓培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）11痰（咽拭）培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）12尿液培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SO

2、P）13膽汁培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）14腦脊液培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）15膿液及傷口分泌物培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）16糞便培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）17穿剌液培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）19生殖系統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)程序（SOP）20細(xì)菌常規(guī)鑒定程序（SOP）21細(xì)菌涂片染色程序（SOP）28革蘭陽性球菌的鑒定30 葡萄球菌屬的鑒定30 微球菌屬的鑒定32 鏈球菌屬的鑒定32 腸球菌屬的鑒定33 氣球菌屬的鑒定34革蘭陰性球菌的鑒定35奈瑟菌屬細(xì)菌的鑒定35韋榮球菌屬細(xì)菌(xjn)鑒定35革蘭陽性桿菌(gnjn)的鑒定36 李斯特菌屬與丹毒(dnd)絲菌屬的鑒定36棒狀桿菌屬的鑒定36諾卡菌屬的鑒定

3、37 紅球菌屬的鑒定38芽胞桿菌屬的鑒定38腸桿菌科的細(xì)菌鑒定38弧菌屬的鑒定39氣單胞菌屬的鑒定40不動(dòng)桿菌屬的鑒定40莫拉菌屬的鑒定41金黃桿菌屬的鑒定41假單胞菌屬的鑒定41嗜血桿菌屬的鑒定42放線桿菌屬的鑒定42產(chǎn)堿桿菌屬的鑒定43布魯菌屬的鑒定43軍團(tuán)菌屬的鑒定43彎曲桿菌科細(xì)菌的鑒定43消化球菌屬和消化鏈球菌屬的鑒定44擬桿菌屬及梭桿菌屬的鑒定44厭氧無芽胞革蘭陽性桿菌的鑒定44梭狀芽胞桿菌屬的鑒定45臨床真菌的檢驗(yàn)及鑒定46 毛癬菌屬的鑒定46小孢子菌屬的鑒定46 念珠菌屬的鑒定47隱球菌屬的鑒定47曲霉菌屬的鑒定48毛霉屬和根霉菌屬的鑒定48鐮孢霉屬的鑒定48馬爾尼菲青霉菌的鑒

4、定48莢膜組織胞漿菌的鑒定49申克孢子絲菌的鑒定49微生物藥敏試驗(yàn)程序49藥敏質(zhì)控程序51醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)53空氣含菌量的監(jiān)測(cè)53工作人員手細(xì)菌監(jiān)測(cè)54物體表面細(xì)菌的監(jiān)測(cè)54消毒劑的監(jiān)測(cè)55無菌物品的監(jiān)測(cè)55血液培養(yǎng)儀BacT/ALERT 3D Select操作程序 56ATBTM接種(jizhng)操作程序56微生物鑒定(jindng)/藥敏鑒定ATBTM操作(cozu)57微生物室工作崗位職責(zé)1、負(fù)責(zé)全院臨床各科細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本的驗(yàn)收，各種微生物檢測(cè)；細(xì)菌培養(yǎng)手工和上機(jī)分析鑒定及藥敏試驗(yàn)；支原體和衣原體檢測(cè)；院感監(jiān)測(cè)及其室內(nèi)室間質(zhì)控工作等。各項(xiàng)操作嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP）進(jìn)行。2、每

5、天檢查細(xì)菌自動(dòng)分析儀工作是否正常；觀察培養(yǎng)箱溫度、室內(nèi)濕度、冰箱溫度是否符合要求，并做好記錄。查看培養(yǎng)基、各種生化管、試劑、藥敏紙片、染色液等是否滿足檢測(cè)要求，并及時(shí)更新或配制。3、檢查細(xì)菌培養(yǎng)申請(qǐng)單及原始登記本，確定標(biāo)本接種是否正確。觀察培養(yǎng)基、血液增菌培養(yǎng)瓶生長(zhǎng)狀況，如發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長(zhǎng)立即進(jìn)行移種，并涂片革蘭染色，將細(xì)菌的染色特性及形態(tài)做好記錄，及時(shí)通知臨床醫(yī)生。4、檢測(cè)分析細(xì)菌，挑取可疑菌落涂片革蘭染色鏡檢，將菌落純分于血平板，做生化鑒定和藥敏試驗(yàn)或上機(jī)分析鑒定，并及時(shí)發(fā)放檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告。5、做好菌種的保存，對(duì)一些難得的菌株、標(biāo)準(zhǔn)菌株等要定期移種，一般一月一次，低溫保存；做好移種記錄，并做好

6、生物安全防護(hù)。6、定期做好所用藥敏紙片的質(zhì)控，每周一次并有記錄；3-6個(gè)月畫一次質(zhì)控圖并有分析；對(duì)檢驗(yàn)樣本的數(shù)量、樣本的陽性率、各種細(xì)菌的耐藥性、各類細(xì)菌檢出構(gòu)成的百分比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并打印成文統(tǒng)一保存。7、經(jīng)常保持室內(nèi)的清潔衛(wèi)生，生活垃圾與醫(yī)療垃圾要分裝處理；每天下班對(duì)室內(nèi)空氣進(jìn)行消毒處理；生物安全防護(hù)嚴(yán)格執(zhí)行醫(yī)院醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露防護(hù)制度。微生物檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控操作程序（sop）一、目的：規(guī)范微生物檢驗(yàn)及室內(nèi)質(zhì)量控制，保證細(xì)菌檢測(cè)及藥敏結(jié)果的可靠性。二、程序的更改：該標(biāo)準(zhǔn)操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人員提出，并報(bào)請(qǐng)專業(yè)組長(zhǎng)及科主任批準(zhǔn)簽字后生效。三、控制方法(一)對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員(rnyun

7、)的要求每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員數(shù)要充足，且要具備良好(lingho)的職業(yè)道德。凡參加細(xì)菌檢驗(yàn)的技術(shù)人員，要有一定的理論知識(shí)和實(shí)踐能力水平。要有廣泛的基礎(chǔ)訓(xùn)練教育，而且要在一位有經(jīng)驗(yàn)的微生物學(xué)家的監(jiān)督下，進(jìn)行實(shí)際工作的嚴(yán)格訓(xùn)練，對(duì)新工作人員，除教會(huì)基本原理和操作外，還應(yīng)對(duì)其進(jìn)行職業(yè)道德教育。(二)實(shí)驗(yàn)室操作手冊(cè)制定微生物檢驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作程序的手冊(cè)(shuc)，內(nèi)容要全面，文字應(yīng)簡(jiǎn)練，間隔一定時(shí)間要進(jìn)行修改、刪舊補(bǔ)新。操作手冊(cè)一般包括以下內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)室的規(guī)章制度：包括各級(jí)人員職責(zé)、權(quán)限及各項(xiàng)有效的制度，如標(biāo)本的接收、報(bào)告的發(fā)送、交接班、輪換、消毒隔離及安全制度等。樣品采集、運(yùn)送與處理；細(xì)菌檢驗(yàn)流程及

8、檢測(cè)工具；檢驗(yàn)方法與質(zhì)控方法 ( 細(xì)菌分離、培養(yǎng)、鑒定與藥物敏感試驗(yàn) )；試劑和培養(yǎng)基質(zhì)量控制；儀器操作手冊(cè)；報(bào)告方式；臨床意義及參考數(shù)據(jù)；實(shí)驗(yàn)室安全。(三)儀器設(shè)備的質(zhì)控 1、高壓滅菌器及干熱滅菌器：使用滅菌器應(yīng)遵守儀器操作規(guī)程。物品滅菌時(shí)，應(yīng)同時(shí)放入監(jiān)控指標(biāo)。生物指標(biāo)應(yīng)用嗜熱脂肪芽胞桿菌懸液，裝入試管或安培瓶，也可用紙帶?；瘜W(xué)指標(biāo)用對(duì)熱敏感的染料標(biāo)記的變色帶子。滅菌時(shí)，將試管或安培瓶、紙條或變色帶等夾放在試驗(yàn)包裹中，以監(jiān)視滅菌效果。對(duì)大型滅菌器，監(jiān)視指標(biāo)應(yīng)放在不同位置。2、培養(yǎng)箱、水浴箱及冰箱：溫度要求：培養(yǎng)箱351；水浴箱370.5；冰箱42，冰格51；低溫冰箱202；超低溫冰箱8010

9、。溫度記錄：每天在工作開始和結(jié)束時(shí)記錄溫度，這類儀器要放入最高、最低溫度計(jì)監(jiān)視。3、二氧化碳培養(yǎng)箱：二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)的CO2含量控制在510之間。4、厭氧缸及厭氧培養(yǎng)箱：工作時(shí)應(yīng)保證絕對(duì)無氧，在使用時(shí)應(yīng)用化學(xué)和生物學(xué)兩種指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)視。化學(xué)指標(biāo)用美藍(lán)或刃天青，無氧時(shí)均為無色；生物學(xué)指標(biāo)用諾維氏芽胞梭菌，如厭氧裝置有隙縫時(shí)，該細(xì)菌即不生長(zhǎng)。鈀粒應(yīng)新鮮并具有活性，用過鈀粒通過加熱1601.52小時(shí)，重新活化后使用。5、生物安全箱處理：對(duì)含有分枝桿菌和致病性真菌的標(biāo)本，或培養(yǎng)物是需要的。穿過通風(fēng)櫥表面的氣流，不應(yīng)小于30.38M/分，用于消除櫥內(nèi)污染的紫外線燈及濾過裝置，必須每隔3個(gè)月校正其性能一次，

10、不合格者應(yīng)調(diào)換。6、接種環(huán)要求長(zhǎng)58cm，環(huán)直徑約3mm；尿定量接種環(huán)，應(yīng)定期檢驗(yàn)其容量是否準(zhǔn)確，否則應(yīng)予校準(zhǔn)；接種針長(zhǎng)58cm。臨床微生物實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)見下表。表1 常用儀器設(shè)備的質(zhì)量控制儀器設(shè)備名稱控制標(biāo)準(zhǔn)允許范圍監(jiān)控方法和頻率光學(xué)顯微鏡每年 4 次或需要時(shí)，作清潔與調(diào)試培養(yǎng)箱35 1 每天觀察記錄溫度二氧化碳培養(yǎng)菌每天觀察記錄溫度和溫度35 1 二氧化碳濃度氣體5%-10%3mm），中（23mm），?。?mm）三種。2、菌落表面：粗糙、光滑、粘液樣、皺紋、放射狀、同心圓等。3、透明度：菌落分透明、半透明、不透明之區(qū)別。4、菌落外形：圓形、不規(guī)則、根莖狀、阿米巴狀、卷發(fā)狀

11、、絨毛狀、念珠狀等。5、高度：扁平、凸起、隆起、臍形、紐扣狀、針尖形等。6、邊緣：整齊、鋸齒狀、葉狀、細(xì)毛狀、散狀、破裂狀、樹枝狀等。7、光澤：有光澤、無光澤、熒光等。8、乳化：在生理鹽水中呈均勻渾狀懸液；顆粒狀或小塊狀為不乳化。9、硬度；用接種環(huán)挑起菌落時(shí)，呈濕軟狀、粘稠狀、絲狀或易碎等。10產(chǎn)生色素：金黃色、白色、檸檬色、紅色、綠色、紫色、黑色等。11、氣味：生姜味、吲哚味、酸牛奶味、酸臭、惡臭味、水果味等。12、溶血性：在血瓊脂平板上可分為(fn wi)完全溶血（溶血(rn xu)）、不完全溶血（溶血(rn xu)）或不溶血。有些細(xì)菌具有獨(dú)特氣味、色素和外觀，是鑒定細(xì)菌的要點(diǎn)。三、生化反

12、應(yīng)1、碳水化合物的代謝試驗(yàn) 糖(醇、苷)類發(fā)酵試驗(yàn)原理：不同細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖類的酶,分解糖的能力各不相同,產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物與隨細(xì)菌種類而異。觀察細(xì)菌能否分解各類單糖（葡萄糖等）、雙糖（乳糖等）、多糖（淀粉等）和醇類（甘露醇）糖苷（水楊苷等），是否產(chǎn)酸（變色）或產(chǎn)氣而確定。方法：將純化的細(xì)菌接種各種單糖生化管中，置培養(yǎng)箱中孵育一定時(shí)間后取出，觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：若細(xì)菌能分解此種糖類產(chǎn)酸，則指示劑呈酸性變化；不分解此種糖類，則培養(yǎng)基無變化。產(chǎn)氣可使液體培養(yǎng)基中倒置的小管內(nèi)出現(xiàn)氣泡，或在半固體培養(yǎng)基內(nèi)出現(xiàn)氣泡或裂隙。2、葡萄糖代謝類型鑒別試驗(yàn)原理：又稱氧化/發(fā)酵（O/F）試驗(yàn)，觀察細(xì)菌對(duì)葡萄分解過程

13、中是利用分子氧（氧化型），還是無氧降解（發(fā)酵型），或不分解葡萄糖（產(chǎn)堿型）。方法：從平板上或斜面培養(yǎng)基上挑取少量菌落，同時(shí)穿刺接種于兩支O/F試驗(yàn)管，其中一支滴加無菌液體石蠟，覆蓋培養(yǎng)基液面0.30.5cm高度，經(jīng)35培養(yǎng)24h后，觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：僅開放管產(chǎn)酸為氧化反應(yīng)，兩管都產(chǎn)酸為發(fā)酵反應(yīng)，兩管均不變?yōu)楫a(chǎn)堿型。3、半乳糖苷酶試驗(yàn)（-ONPG試驗(yàn)）原理：某些細(xì)菌具有半乳糖苷酶，可分解鄰-硝基半乳糖苷（-ONPG），生成黃色的鄰-硝基酚。用于測(cè)定不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵乳糖的細(xì)菌是否產(chǎn)生此酶，亦可用于遲發(fā)酵乳糖細(xì)菌的快速鑒定。方法：取純菌落用無菌鹽水制成濃的菌懸液，加入ONPG溶液0.25ml，置3

14、5水浴，于20min和3h觀察結(jié)果。結(jié)果(ji gu)判斷：通常(tngchng)在2030min內(nèi)顯色，出現(xiàn)(chxin)黃色為陽性反應(yīng)。4、三糖、雙糖鐵試驗(yàn)原理：三糖鐵瓊脂（TSI）用于觀察細(xì)菌對(duì)糖的發(fā)酵能力，以及是否產(chǎn)生硫化氫（H2S），可初步鑒定細(xì)菌的種屬。如大腸埃希菌能發(fā)酵葡萄糖和乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使TSI的斜面和底層均呈黃色，并有氣泡產(chǎn)生；傷寒沙門菌、痢疾志賀菌只能發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，使斜面呈紅色（發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生的少量酸因接觸空氣而氧化），而底層呈黃色；有些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中含硫氨基酸（如半胱氨酸和胱氨酸），生成H2S，H2S遇鉛或鐵離子形成黑色的硫化鉛或硫化鐵沉淀物。方法：挑取純

15、菌落接種于三糖鐵瓊脂上，35孵育13d。結(jié)果判斷：出現(xiàn)黑色沉淀物為H2S陽性。5、甲基紅試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步代謝分解為乳酸、甲酸、乙酸，使培養(yǎng)基的pH下降到 4.5以下，加入甲基紅指示劑即顯紅色（甲基紅變紅的范圍為pH4.46.0）；某些細(xì)菌雖能分解葡萄糖，但產(chǎn)酸量少，培養(yǎng)基的pH在6.2以上，加入甲基紅指示劑仍呈黃色。方法：將待檢菌接種至葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，35孵育12d，加入甲基紅指示劑2滴，立即觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：紅色者為陽性，黃色者為陰性。6、V-P試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，并進(jìn)一步將丙酮酸脫羧成為乙酰甲基甲醇，后者在堿性環(huán)境中被空

16、氣的氧氧化成為二乙酰，進(jìn)而與培養(yǎng)基中的精氨酸等所含的胍基結(jié)合，形成紅色的化合物，即V-P試驗(yàn)陽性。方法：將待檢菌接種至葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，35孵育12d，加入等量的V-P試劑（0.1%硫酸銅溶液），混勻后35孵育30min，觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：呈紅色者為陽性。6、蛋白質(zhì)、氨基酸分解試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)原理：有些細(xì)菌具有氨酸酶，能分解培養(yǎng)基中的色氨酸，生成吲哚，吲哚與試劑對(duì)二甲氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈紅色。方法(fngf)：將待檢菌接種(jizhng)至蛋白胨水培養(yǎng)基中，35孵育(f y)12d，沿管壁徐徐加入柯凡克（Kovac）試劑0.5ml，即刻觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：兩液面交界處呈紅色者為

17、陽性，無紅色者為陰性。7、尿素酶試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，分解尿素形成氨，使培養(yǎng)基變堿，酚紅指示劑隨之變紅色。方法：將待檢菌接種于含尿素的培養(yǎng)基中，35孵育13d，觀察是否產(chǎn)生紅色。結(jié)果判斷：呈紅色者為尿素酶試驗(yàn)陽性。8、氨基酸脫羧酶試驗(yàn)原理：有些細(xì)菌能產(chǎn)生某種氨基酸脫羧酶，使該種氨基酸脫去羧基，生成胺（如賴氨酸尸胺，鳥氨酸腐胺，精氨酸精胺），從而使培養(yǎng)基變堿性，指示劑變色。方法：挑取純菌落接種于含某種氨基酸（賴氨酸、鳥氨酸或精氨酸）的培養(yǎng)基及不含氨基酸的對(duì)照培養(yǎng)基中，加無菌石蠟油覆蓋，35孵育2-3d，每日觀察結(jié)果。結(jié)果：若僅發(fā)酵葡萄顯黃色為陰性，由黃色變?yōu)樽仙珵殛栃裕瑢?duì)照管（無氨基酸

18、）為黃色。9、苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)原理：有些細(xì)菌能產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基生成苯丙酮酸，與三氯化鐵作用形成綠色化合物。方法：將待檢菌接種于苯丙氨酸管中，35孵育1824h，沿管壁滴加三氯化鐵試劑，立即觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：接觸面呈綠色者為陽性。10有機(jī)酸鹽利用試驗(yàn)（枸櫞酸鹽、丙二酸鹽、葡萄糖酸鹽、醋酸鹽等）（1）枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)：原理：在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基中，細(xì)菌能利用的碳源只有枸櫞酸鹽。當(dāng)某種細(xì)菌能利用枸櫞酸鹽時(shí)，可將其分解為碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性，pH指示劑溴麝香草酚藍(lán)由淡藍(lán)綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。方法(fngf)：將待檢菌接種(jizhng)于枸櫞酸鹽培養(yǎng)管中，35孵育(f y)13d，觀

19、察管中的顏色變化。結(jié)果判斷：培養(yǎng)基由淡綠色變?yōu)樯钏{(lán)色者為陽性。（2）丙二酸鹽利用試驗(yàn)原理：在丙二酸鹽培養(yǎng)基中，細(xì)菌能利用的碳源只有丙二酸鹽。當(dāng)某種細(xì)菌能利用丙二酸鹽時(shí)，可將其分解為碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性，使指示劑由綠色變?yōu)樗{(lán)色。方法：將待檢菌接種于丙二酸鹽培養(yǎng)基上，35孵育12d，觀察培養(yǎng)基的顏色變化。結(jié)果判斷；培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{(lán)色者為陽性。（3）葡萄糖酸鹽試驗(yàn)：原理；檢查細(xì)菌是否具有氧化葡萄糖酸鹽作為唯一碳源，并具有還原2-酮基葡萄糖酸鹽與班氏試劑混合加熱生成黃紅色酮類的能力。接種待檢菌于培養(yǎng)基內(nèi)，3524-48h，加班氏試劑3滴，加熱煮沸后觀察結(jié)果。結(jié)果：出現(xiàn)黃色到橙紅色沉淀為陽性，無顏色

20、變化為陰性11、酶類試驗(yàn)（觸酶試驗(yàn)）原理：具有觸酶（過氧化氫酶）的細(xì)菌，能催化過氧化氫，放出新生態(tài)氧，繼而形成分子氧，出現(xiàn)氣泡。方法：取3%過氧化氫溶液0.5ml，滴加于不含血液的細(xì)菌瓊脂培養(yǎng)物上觀察氣泡；或取12滴3%過氧化氫于玻片上，加入細(xì)菌制成懸液觀察氣泡。結(jié)果判斷：培養(yǎng)物或玻片中出現(xiàn)氣泡者為陽性。注意事項(xiàng)：細(xì)菌要求新鮮；因紅細(xì)胞內(nèi)含有觸酶，可能出現(xiàn)假陽性，故不宜用血瓊脂平板上的菌落作觸酶試驗(yàn)；玻片要求干凈，需用已知陽性菌和陰性菌作對(duì)照。12、氧化酶試驗(yàn)原理；氧化酶（細(xì)胞色素氧化酶）是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的酶。具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C氧化，再由氧化型細(xì)胞色素C使對(duì)苯二胺氧化，生成

21、紫紅色的醌類化合物。方法(fngf)：取潔凈的濾紙(lzh)一小塊，涂抹菌苔少許，加1滴10g/L鹽酸(yn sun)四甲基對(duì)苯二胺溶液于細(xì)菌上，觀察顏色變化。結(jié)果判斷：立即呈粉紅色并迅速轉(zhuǎn)為紫紅色為陽性，不變色為陰性。注意事項(xiàng)：未加抗壞血酸的試劑需每星期新鮮配制（試劑在空氣中易發(fā)生氧化），避免接觸含鐵物質(zhì)；不宜采用含葡萄糖的培養(yǎng)基上的菌落（葡萄糖發(fā)酵可抑制氧化酶活性）。13靛酚氧化酶試驗(yàn)原理：具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C氧化，再由氧化型細(xì)胞色素C使鹽酸對(duì)二甲氨基苯胺氧化，并與A奈酚結(jié)合，生成靛酚藍(lán)而呈藍(lán)色。方法：取靛酚氧化酶試紙條，用無菌鹽水浸濕后，直接醮取細(xì)菌培養(yǎng)物，立即觀察結(jié)果。結(jié)

22、果判斷 試紙條在10秒內(nèi)變成藍(lán)色者為陽性，不變色為陰性。14、凝固酶試驗(yàn)金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶。一種是結(jié)合凝固酶，結(jié)合在細(xì)胞壁上，使血漿中纖維蛋白原變成纖維蛋白，而附著于細(xì)菌表面，發(fā)生凝集；可用玻片法測(cè)出。另外一種是菌體生成后釋放于培養(yǎng)基中的游離凝固酶，能使凝血酶原變成凝血酶類物質(zhì)，從而使血漿凝固；可用試管法測(cè)出。玻片法：取兔或人血漿和鹽水各1滴，分別置清潔載玻片上，挑取待檢菌分別與鹽水及血漿混合，如血漿中有明顯的顆粒出現(xiàn)，而鹽水中無凝集現(xiàn)象者為陽性。試管法：取試管2支，分別加入0.5ml的血漿（經(jīng)生理鹽水1：4稀釋），挑取待檢菌落數(shù)個(gè)加入測(cè)定管充分研磨混勻，用已知陽性菌株加入對(duì)照管，

23、37水浴34小時(shí)，血漿凝固者為陽性。15、DNA酶實(shí)驗(yàn)原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生細(xì)胞外DNA酶。DNA酶可水解DNA長(zhǎng)鏈，形成數(shù)個(gè)單核苷酸組成的寡核苷酸鏈。長(zhǎng)鏈DNA可被酸沉淀，而水解后形成的寡核苷酸則可溶于酸。當(dāng)在菌落平板上加入酸后，若在菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)，表示該菌具有DNA酶。方法(fngf)：將待檢測(cè)(jin c)菌點(diǎn)狀接種于DNA瓊脂(qingzh)平板上，35培養(yǎng)1824小時(shí)，在細(xì)菌生長(zhǎng)物上加一層1mol/L鹽酸（使菌落浸沒）。結(jié)果判斷：菌落周圍出現(xiàn)透明環(huán)為陽性，無透明環(huán)為陰性。注意事項(xiàng)：腸桿菌科中的沙雷菌和變形桿菌可產(chǎn)生DNA酶，革蘭陽性球菌中，只有金黃色葡色葡萄球菌產(chǎn)生DNA酶，因此可

24、鑒別。16、硝酸鹽還原試驗(yàn)原理：硝酸鹽培養(yǎng)基中的硝酸鹽可被某些細(xì)菌還原為亞硝酸鹽，后者與乙酸作用生成亞硝酸。亞硝酸與對(duì)氨基苯磺酸作用，形成偶氮苯磺酸，再與-萘氨結(jié)合成紅色的N-苯氨偶氮苯磺酸。方法：將待檢菌株接種于硝酸鹽培養(yǎng)基，35培養(yǎng)12天，加入試劑甲液（對(duì)氨基苯磺酸和乙酸）和乙液（-萘氨和乙酸）各2滴，立即觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：呈紅色者為陽性。（若不呈紅色，再加入少許鋅粉，如仍不變紅色者為陽性，表示培養(yǎng)基中的硝酸鹽已被細(xì)菌還原為亞硝酸鹽，進(jìn)而分解成氨和氮。加鋅粉后變?yōu)榧t色者為陰性，表示硝酸鹽未被細(xì)菌還原，紅色反應(yīng)是由于鋅粉的還原所致）。17、CAMP試驗(yàn)（Christie,Atkins Mu

25、nch-Peterson test）原理：B群鏈球菌具有“CAMP”因子，能促進(jìn)葡萄球菌溶血素的活性，使兩種細(xì)菌在劃線處呈現(xiàn)箭頭形透明溶血區(qū)。方法：先用產(chǎn)溶血素的金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上劃一橫線，再取待檢的鏈球菌與前一劃線作垂直劃線接種，兩者相距0.51cm。置35培養(yǎng)1824小時(shí)，觀察結(jié)果。用B群鏈球菌作陽性對(duì)照，A群或D群作陰性對(duì)照。結(jié)果判斷：在兩種細(xì)菌劃線的交接處，出現(xiàn)箭頭形透明溶血區(qū)為陽性。18、Optochin敏感試驗(yàn)原理：Optochin（ethylhydrocupreine，乙基氫化去甲奎寧的商品名）可干擾肺炎鏈球菌葉酸的生物合成，抑制該菌的生長(zhǎng)，故肺炎鏈球菌對(duì)其敏感，而其他

26、鏈球菌對(duì)其耐藥。方法：將待檢的型溶血的鏈球菌均勻地涂布在血瓊脂平板上，貼放Optochin紙片（含藥5g），置35培養(yǎng)1824小時(shí)，觀察抑菌圈的大小。結(jié)果判斷：抑菌圈15mm為敏感，肺炎鏈球菌敏感。19、血清學(xué)試驗(yàn)(shyn)：血清學(xué)試驗(yàn)是抗原抗體在體外出現(xiàn)(chxin)可見反應(yīng)的總稱，故又稱為抗原抗體反應(yīng)。它可以用已知抗體（細(xì)菌的抗血清）檢測(cè)未知抗原（待檢細(xì)菌）；也可用已知抗原（已知病原菌）檢測(cè)患者血清中相應(yīng)細(xì)菌抗體及其效價(jià)，是臨床診斷、實(shí)驗(yàn)室研究和細(xì)菌學(xué)鑒定的重要手段之一。（1）凝集(nngj)試驗(yàn)（玻片法）：常用于鑒定菌種及菌型，如葡萄球菌、肺炎鏈球菌、沙門菌屬、志賀菌屬、致病性大腸埃希

27、菌、霍亂弧菌、腦膜炎奈瑟菌等的鑒定。原理：用已知的診斷血清或血漿在玻片上與待檢菌及生理鹽水混合，若出現(xiàn)肉眼可見的特異性凝集塊，表示該菌即為相應(yīng)的細(xì)菌。方法：取一潔凈載玻片，用接種環(huán)取待檢菌培養(yǎng)物，分別與診斷血清及生理鹽水混勻，上下?lián)u動(dòng)玻片數(shù)次，13min后觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：待檢菌明顯凝集、對(duì)照菌均勻混濁為陽性；待檢菌及對(duì)照菌均勻混濁為陰性。測(cè)定菌、對(duì)照菌均凝集為自凝。注意事項(xiàng)：某些細(xì)菌菌體表面常有一層表面抗原，如傷寒沙門菌的Vi抗原及志賀菌的K抗原等。它能阻抑菌體抗原與抗血清的凝集，從而導(dǎo)致假陰性結(jié)果。此時(shí)應(yīng)將菌懸液于100中煮沸1h，以破壞其表面抗原，然后再作試驗(yàn)。（2）試管法：此法可排除

28、玻片法凝集試驗(yàn)的非特異性凝集，是一種半定量凝集試驗(yàn)。方法：取小試管10支，第1管加入生理鹽水0.45ml，再加入0.05ml診斷血清混勻，其余各管均加生理鹽水0.25ml，然后從第1管中吸出0.25ml加入第2管中，混勻后再吸出0.25ml加入第3管，依次類推直至第9管，從第9管中吸出0.25ml棄去，第10管不加抗血清為對(duì)照管。每管加待檢菌菌液（10109/ml）0.25ml，充分振蕩混勻后，置37水浴中4h，再置4中過夜。結(jié)果判斷：以血清最高稀釋度達(dá)到（+）凝集者（管內(nèi)液體澄清，部分凝集塊沉于管底）為腦膜炎奈瑟菌的菌液必須經(jīng)5630min滅活，以破壞自溶酶。若試驗(yàn)出現(xiàn)低凝集結(jié)果時(shí)，應(yīng)將該菌

29、傳代數(shù)次后，再作試驗(yàn)。20、莢膜腫脹試驗(yàn)：常用于肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎克雷伯菌和炭疽芽胞桿菌等細(xì)菌的檢測(cè)和莢膜分型。原理：特異抗血清和相應(yīng)莢膜細(xì)菌相互作用，使細(xì)菌的莢膜明顯增大，細(xì)菌的周圍有較寬的環(huán)狀帶。方法(fngf)：取潔凈(jijng)玻片兩側(cè)各加待檢菌12接種(jizhng)環(huán)，一側(cè)加抗細(xì)菌莢膜血清，另一側(cè)加正常血清各12接種環(huán)，混勻；兩側(cè)各加1%亞甲藍(lán)（美藍(lán)）水溶液1接種環(huán)，混勻，分別加蓋玻片，放置于濕盒中510min,鏡檢。結(jié)果判斷：陽性鏡下觀察在藍(lán)色細(xì)菌周圍可見厚薄不等、邊界清晰的無色環(huán)狀物，而在對(duì)照側(cè)則無此現(xiàn)象；陰性試驗(yàn)和對(duì)照側(cè)均不產(chǎn)生無色環(huán)狀物。四、鑒定規(guī)則1、除大便

30、標(biāo)本外，其他標(biāo)本原則上在培養(yǎng)前都要先做革蘭氏染色，通過涂片檢查得出初步診斷。根據(jù)細(xì)菌形態(tài)，排列及染色性，發(fā)出初步報(bào)告。也可指導(dǎo)臨床標(biāo)本細(xì)菌的正確鑒定2、涂片染色鏡檢：各種菌落必須涂片鏡檢。每張玻片可分幾個(gè)格，先滴加生理鹽水于小格中，把需涂片的菌落磨于鹽水滴中，自然干燥，火焰固定后革蘭氏染色鏡檢。涂片時(shí)，菌落的選取按由小到大，由無色到有色的規(guī)則進(jìn)行，玻片按順序編號(hào)。3、鑒定：G+球菌上機(jī)鑒定和藥敏時(shí)，先仔細(xì)觀察染色細(xì)菌形態(tài)，是鏈狀排列或葡萄狀排列或其他排列；培養(yǎng)基上是溶血或不溶血。然后直接接種到PC12測(cè)試板上。G-桿菌先做氧化酶試驗(yàn)，然后直接接種到NC21板上。如果是大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、

31、產(chǎn)酸克雷伯菌還需做超廣譜-內(nèi)酰胺酶實(shí)驗(yàn)。4、血清學(xué)鑒定：上機(jī)鑒定出沙門氏菌或志賀氏菌時(shí)，要做相應(yīng)的血清學(xué)鑒定分型。細(xì)菌涂片染色程序（SOP）通過對(duì)標(biāo)本的制片及染色，能觀察細(xì)菌和真菌的形態(tài)、大小、排列、染色特性以及莢膜、芽胞、異染顆粒等結(jié)構(gòu)，有助于細(xì)菌和真菌初步鑒定 。 1、涂片染色檢查。涂片：先加1小滴生理鹽水于玻片上，挑取菌落均勻涂布于鹽水中制成簿片。有的細(xì)菌培養(yǎng)物在玻片上不易粘附，常需加入少量無菌血清一起涂片。涂片的厚薄要適當(dāng)，以菌液呈均勻半透明為宜。臨床標(biāo)本如膿、痰、分泌物等可直接涂片。固定(gdng)：涂片(t pin)干燥后，在火焰上迅速通過3次，加熱(ji r)固定（溫度不可過高）

32、。固定的目的一是殺死細(xì)菌，使染料易于著色；二是使細(xì)菌附著于玻片上，不易被水沖掉。染色：染色液多為水溶液，一般用低濃度染色液（10g/L）為好，滴加染液覆蓋涂膜。染色分單染和復(fù)染兩種方法。為了促使染料與菌體結(jié)合，有的染液中需加入酚、明礬或碘液，起到媒染作用；也可以加熱促進(jìn)著色。脫色：醇類、丙酮、氯仿等是常用的脫色劑。酸類可作為堿性染料的脫色劑，而堿類可作為酸性染料的脫色劑；無機(jī)酸的脫色能力大于有機(jī)酸。乙醇是常用的脫色劑，70%乙醇和無機(jī)酸脫色能力強(qiáng)，常用作抗酸染色的脫色劑；95%乙醇常用于革蘭染色。復(fù)染：又稱對(duì)比染色，起反襯作用。復(fù)染液應(yīng)與初染液的顏色不同，以形成鮮明對(duì)比；復(fù)染可使脫色的細(xì)菌重新

33、著色。2、改良革蘭氏染色法試劑配制 1%結(jié)晶紫水溶液：結(jié)晶紫1g加乙醇4ml，待結(jié)晶紫完全溶解后加蒸餾水100 ml。5%碳酸氫鈉水溶液: 5g碳酸氫鈉+蒸餾水100 ml,應(yīng)少量多配,以免時(shí)間過長(zhǎng)失效。2%碘溶液: 碘2g加1mol/L NaOH10ml(0.4g) , 充分溶解后加蒸餾水100 ml脫色液: 丙酮乙醇等量混合。復(fù)染液: 堿性復(fù)紅乙醇飽和液10ml加%石炭酸90ml,用時(shí)蒸餾水10倍稀釋。操作方法 標(biāo)本涂片干燥后,固定,滴加1液及等量2液染色30秒,水洗,加3液染色1分鐘, 水洗,加4液脫色至無紫色脫落,水洗,加5液復(fù)染30秒,水洗干燥鏡檢。(本實(shí)驗(yàn)室所用革蘭氏染色液由貝索生

34、物技術(shù)有限公司提供)結(jié)果：革蘭陽性菌呈紫色，革蘭陰性菌呈紅色。注意事項(xiàng)：染色的結(jié)果常受操作者技術(shù)影響，尤其是容易過度脫色，往往陽性染成陰性；在同一載玻片上，需用已知金黃色葡萄球菌及大腸埃希菌作革蘭陽性和革蘭陰性對(duì)照；染色關(guān)健在于涂片和脫色，涂片不宜過厚，固定不宜過熱，脫色不宜過度；菌齡為1824小時(shí)為佳。3、抗酸染色法 試劑(shj)配制液：結(jié)晶(jijng)石炭酸2.5ml，95%乙醇(y chn)5 ml，堿性復(fù)紅0.5 ml，蒸餾水100ml。液：濃鹽酸3ml，95%乙醇97ml。液：次甲基蘭0.5g，冰醋酸0.5ml，蒸餾水100ml。 方法操作標(biāo)本涂片自然干燥后,固定,滴加1液染色5

35、分鐘或更久,水洗,加2液脫色至完全脫掉紅色為止, 水洗,加3液染色30秒, 水洗干燥鏡檢。 結(jié)果：菌體與鞭毛均染成紅色。 注意事項(xiàng)：每一張玻片只能涂一份標(biāo)本，禁止將兩份或兩份以上標(biāo)本涂在同一張玻片上，以免染色過程中因沖洗使菌體脫落，造成陰性、陽性結(jié)果混淆；脫色時(shí)間根據(jù)涂片厚薄而定，厚片可適當(dāng)延長(zhǎng)，以無紅色為止。4、墨汁莢膜染色試劑印度墨汁或5%黑色素水溶液。染色方法 將標(biāo)本編號(hào)，離心（通常為腦脊液）后棄上清液，取下層沉淀一滴于載玻片上，加入一滴墨汁與標(biāo)本混合，加上蓋玻片，輕輕壓一下，使標(biāo)本混合液變薄，去除氣泡，制成濕片備檢。標(biāo)本的觀察：直接放到顯微鏡上觀察，先在低倍鏡尋找有莢膜的菌細(xì)胞，找到后

36、轉(zhuǎn)換到高倍鏡確認(rèn)。結(jié)果判斷：如果在視野中看到有圓形或橢圓的透明菌體，可見圓形芽管，細(xì)胞外有寬厚的透明莢膜，約比菌體大13倍，是陽性，報(bào)告墨汁染色找到隱球菌，可以作為診斷依據(jù)。臨床意義：隱球菌是外源性感染病原體，經(jīng)呼吸道侵入人體，由肺經(jīng)血播散可侵犯所有的臟器組織，主要侵犯肺、腦及腦膜，也可侵犯皮膚、骨和關(guān)節(jié)。新生隱球菌好發(fā)于微生物感染免疫功能低下者，是AIDS最常見的并發(fā)癥；它的致病物質(zhì)是莢膜。用病人腦脊液作墨汁負(fù)染色檢查是診斷隱球菌感染的最快速、簡(jiǎn)便的方法。革蘭陽性球菌的鑒定革蘭氏陽性球菌主要包括微球菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬、氣球菌屬及腸球菌屬等。葡萄酒球菌屬及鏈球菌屬細(xì)菌大多數(shù)能引起機(jī)體化

37、膿性炎癥，因此又稱為化膿性球菌。與人類密切相關(guān)的主要有這五個(gè)菌屬，可以從形態(tài)(xngti)排列，觸酶反應(yīng)等加以區(qū)別，見表5。表8 常見五個(gè)革蘭氏陽性(yngxng)球菌屬間的鑒別試 驗(yàn)微球菌屬葡萄球菌屬鏈球菌屬氣球菌屬腸球菌屬排列方式成對(duì)四聯(lián)成叢單個(gè)葡萄狀鏈狀或成對(duì)成雙或四聯(lián)單個(gè)成雙鏈狀觸酶反應(yīng)陽性陽性陰性弱陽性陰性氧化/發(fā)酵氧化發(fā)酵發(fā)酵發(fā)酵發(fā)酵厭氧生長(zhǎng)不生長(zhǎng)生長(zhǎng)生長(zhǎng)生長(zhǎng)很弱生長(zhǎng)呋喃唑酮RSSSS桿菌肽SRdSR葡萄球菌(p to qi jn)屬的鑒定1、檢驗(yàn)程序圖10 革蘭氏陽性球菌 觸酶 微球菌科 鏈球菌屬及腸球菌屬O/ 葡萄糖O/F F 氧化酶 氧化酶微球菌屬 葡萄球菌屬 血漿凝固酶 甘

38、露醇發(fā)酵 新生霉素藥敏 金黃色葡萄球菌 S R 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌2、分類：葡萄球菌屬有35個(gè)種、17個(gè)亞種，其命名略。常見有臨床意義的8種葡萄球菌，關(guān)鍵性鑒定見下表 表9 常見的8種葡萄球菌鑒定菌 種凝固酶凝聚因子DNA酶堿性磷酸酶吡咯烷酮酶 鳥氨酸脫羧脲酶半乳糖苷酶VP新生霉素多粘菌素B海澡糖甘露醇甘露糖松二糖麥芽糖蔗糖金葡菌dSR表皮葡萄球菌dSRd溶血葡萄球菌SSdd里昂葡萄球菌dSdd施氏葡萄球菌SSd腐生葡萄球菌RSd中間型葡菌dSSdd豬葡萄球菌ddSR微球菌(qijn)屬細(xì)菌的鑒別表10 臨床上常見(chn jin)的微球菌鑒別菌 種色素O/F10%Nacl瓊脂葡萄糖產(chǎn)

39、酸硝酸鹽還原氧化酶脲酶精氨酸新生霉素易變微球菌黃色OdS藤黃微球菌黃色OdS/R玫瑰策球菌粉紅色O/dS鏈球菌屬的的鑒定(jindng)鏈球菌屬分為化膿性和非化膿性兩類，其命名如下（1）化膿性鏈球菌：化膿鏈球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌停乳亞種、停乳鏈球菌馬樣亞種、馬鏈球菌馬亞種、馬鏈球菌獸溫亞種、狗鏈球菌7個(gè)種。（2）非化膿性鏈球菌：緩癥鏈球菌群：緩癥鏈球菌、血液(xuy)鏈球菌、副血液鏈球菌、戈登鏈球菌、嵴鏈球菌、口腔鏈球菌、肺炎鏈球菌、泛口腔鏈球菌、嬰兒鏈球菌；咽峽炎鏈球菌群：咽峽炎鏈球菌、星群鏈球菌星群亞種、中間(zhngjin)鏈球菌；變異鏈球菌群：變異鏈球菌、表兄鏈球菌、倉(cāng)鼠(cn

40、sh)鏈球菌、鼠鏈球菌、道恩鏈球菌、獼猴鏈球菌；唾液鏈球菌群：唾液鏈球菌、前庭鏈球菌、嗜熱鏈球菌；牛鏈球菌群：牛鏈球菌、不解乳鏈球菌、馬腸鏈球菌25個(gè)種。 常規(guī)鑒定：鏈球菌屬是革蘭陽性球菌（圓或卵圓形），成雙或鏈狀排列，觸酶陰性與葡萄球菌鑒別；屬間鑒別見表7表11 觸酶陰性或弱陽性革蘭氏陽性球菌的鑒別菌 屬形 態(tài)萬古葡萄糖產(chǎn)氣PYRLAP6.5% NaCl4510鏈球菌屬鏈成對(duì)SV腸球菌屬鏈成對(duì)S乳球菌屬鏈成對(duì)SV氣球菌屬雙四聯(lián)S孿生球菌屬鏈四聯(lián)SV片球菌屬雙四聯(lián)RV無色藻菌屬鏈成雙RV表12 人類-溶血性鏈球菌的特性鑒別菌 種血清群抗原菌 落PYRVPCAMPBGUR化膿鏈球菌A大NA咽峽炎

41、鏈球菌群A小NA無乳鏈球菌BNANA停乳鏈球菌馬樣亞種C大咽峽炎鏈球菌群C小咽峽炎鏈球菌群F小NA停乳鏈球菌馬樣亞種G大咽峽炎鏈球菌群G小咽峽炎鏈球菌群未分群小NA注；V反應(yīng)(fnyng)不定；NA無資料；S敏感，R耐藥；BGUR-D-葡萄糖甘酸酶。表13 牛鏈球菌與非-溶血性鏈球菌的鑒別(jinbi)鏈球菌奧普托欣膽汁溶菌膽汁七葉苷肺炎鏈球菌S牛鏈球菌R其他草綠色鏈球菌R表14 草綠色鏈球菌群的的鑒定(jindng)菌 群甘露醇山梨醇VP精氨酸七葉苷脲酶變異鏈球菌群唾液鏈球菌群緩癥鏈球菌群咽峽炎鏈球菌群腸球菌屬的鑒定（1）、生物特性：革蘭氏陽性球菌，單個(gè)或排列成對(duì)、短鏈。觸酶陰性，40%膽汁

42、七葉苷（+）、6.5%NaCl（+）、PYR（+）鑒定到腸球菌屬；用甘露醇、山梨糖、精氨酸試驗(yàn)分為5個(gè)群見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（771-772面）。（2）、檢驗(yàn)程序圖11 甘露醇 精氨酸、山梨糖 精氨酸/ / / 阿拉伯糖/棉子糖 動(dòng)力 鴿腸球菌 蔗糖/棉子糖 棉子糖/ / / / / 蒼白腸球菌丙二酸鹽（） 病臭腸球菌H2S（+）鳥腸球菌H2S（+） 棉子糖腸球菌淺黃腸球菌丙二酸鹽（+） 驢腸球菌 色素(s s) 阿拉伯糖 丙二酸鹽 丙二酸鹽 色素 糞腸球菌解糖變種 + + + + + 鉛黃腸球菌鶉雞腸球菌特異腸球菌小腸腸球菌耐久腸球菌硫磺色腸球菌盲腸腸球菌 色素(s s) 丙二酸鹽蒙氏腸球

43、菌屎腸球菌（變種） + + 屎腸球菌糞腸球菌 氣球菌(qijn)屬的的鑒定氣球菌在血平板上菌落如針尖大小，溶血不明顯（-溶血），能在6.5%NaCl肉湯中生長(zhǎng)；O/F：F、氧化酶陰性、觸酶陰性。表15 氣球菌屬各菌種的的鑒別生化反應(yīng)淺綠色氣球菌脲氣球菌柯氏氣球菌血色氣球菌人尿氣球菌乳糖產(chǎn)酸麥芽糖產(chǎn)酸甘露醇V核糖VV蔗糖海藻糖山梨醇-半乳糖苷酶-葡萄糖苷酶吡咯谷氨酸芳氨酶精氨酸雙水解酶革蘭陰性球菌的鑒定臨床上常見的革蘭陰性球菌，包括需氧和厭氧兩大類。需氧菌主要是奈瑟菌屬，厭氧菌主要有韋榮球菌屬，其鑒定如下。奈瑟菌屬的鑒定分類(fn li)和命名：本屬有10個(gè)種，包括淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、嗜乳

44、糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黃奈瑟菌、變黃奈瑟菌、粘液奈瑟菌、灰色奈瑟菌、長(zhǎng)奈瑟菌、多糖奈瑟菌。鑒定：根據(jù)菌落(jnlu)、菌體典型特征及氧化酶、觸酶陽性，將細(xì)菌鑒定到奈瑟菌屬。屬內(nèi)菌種間鑒別見下表表16 奈瑟菌屬內(nèi)種間鑒別(jinbi)菌 名MTM培養(yǎng)基C、B培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)瓊脂葡萄糖麥芽糖乳糖蔗糖果糖硝酸鹽還多聚糖DNA酶巧克力平板上菌落特點(diǎn)淋病奈瑟菌米色灰棕半透明腦膜炎奈瑟菌V同上1-3mm嗜乳糖奈瑟菌V同上1-2mm灰色奈瑟菌V同上1-2mm多糖奈瑟菌VV同上1-2mm微黃奈瑟菌VVVV綠黃1-3mm干燥奈瑟菌白色不透明干燥粘液奈瑟菌微綠黃不透明變黃奈瑟菌黃色1-2mm長(zhǎng)奈瑟菌灰棕半透明堅(jiān)硬卡他莫

45、拉菌V淡粉紅色-棕色注：MTM奈瑟菌培養(yǎng)基；B血平板；C巧克力平板（22條件下）。卡他布蘭漢菌，現(xiàn)已命名為卡他莫拉菌。在巧克力平板菌落淡粉紅色-棕色，不透明，堅(jiān)硬；菌體略大，能水解丁酸甘油酯/DNA酶陽性相鑒別。韋榮球菌(qijn)屬：與人體相關(guān)(xinggun)的有下列4個(gè)種，即小韋榮菌、齒嚙韋榮菌、不典型韋榮菌、殊異韋榮菌。生物學(xué)特性(txng)：革蘭陰性球菌，可呈雙聚集及短鏈狀。專性厭氧，無動(dòng)力，氧化酶陰性，不分解碳水化合物，分解乳酸鹽，需CO2才能生長(zhǎng)。鑒別見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（859面）。革蘭陽性桿菌的鑒定革蘭陽性桿菌在臨床上有意義的主要有李斯特菌屬；丹毒絲菌屬；棒狀桿菌屬；諾卡菌

46、屬；紅球菌屬；分枝桿菌屬；芽胞桿菌屬等。李斯特菌屬與丹毒絲菌屬鑒別：前者觸酶、七葉苷、VP、M-R、動(dòng)力均陽性；后者反之，且H2S陽性，不能在4生長(zhǎng)。鑒別見下表表17 李斯特菌屬各菌種間的鑒別特性特 性格氏李斯特?zé)o害李斯菌伊氏李斯特產(chǎn)單核李斯特斯氏李斯特威氏李斯特-溶血CAMP（金葡）CAMP馬紅球菌V甘露醇產(chǎn)酸甲基甘露糖苷L-鼠李糖VVV可溶性淀粉NDNDD-木糖水解馬尿酸鹽NDND硝酸鹽還原VNDND小白鼠致死性注：V不定；ND未確定。棒狀桿菌屬的鑒定：革蘭陽性，著色不均勻，菌體細(xì)長(zhǎng)微彎曲，排列不規(guī)則，呈XV形狀，無芽胞；觸酶陽性，無動(dòng)力。屬內(nèi)細(xì)菌鑒定見下表 表18 棒狀桿菌屬各細(xì)菌(xj

47、n)鑒定菌 種O/F嗜脂性硝酸鹽還原脲酶七葉苷吡嗪酰胺酶堿性磷酸酶葡萄糖麥芽糖蔗糖甘露醇木糖無枝菌酸棒狀菌FVVVVCDCgroupF-1FVCDCgroupGFVVV白喉?xiàng)U菌重生物型F白喉?xiàng)U菌中間型F輕型和貝爾法梯F解谷氨酸棒狀桿菌FVVVVVV杰克棒狀桿菌OV麥?zhǔn)习魻顥U菌FV極小棒狀桿菌FVV微黑棒狀桿菌FVV（）假白喉棒狀桿菌OV假結(jié)核棒狀桿菌FVVV芮氏棒狀桿菌FVV（）紋帶棒狀桿菌FV潰瘍棒狀桿菌F解脲棒狀桿菌OV干燥棒狀桿菌FV注：F發(fā)酵；O氧化；V不定(bdng)；（）延長(zhǎng)或弱反應(yīng)。諾卡菌的鑒定(jindng)：諾卡菌屬與醫(yī)學(xué)相關(guān)的有13個(gè)菌種，其鑒別(jinbi)如下表。表19

48、 諾卡菌屬各菌種的鑒定菌 種葡萄糖阿拉伯糖側(cè)金盞花醇肌醇 鼠李糖半乳糖水解七葉苷腺嘌呤酪氨酸45生長(zhǎng)膿腫諾卡菌VV非洲諾卡菌星形諾卡菌VVV巴西諾卡菌短鏈諾卡菌VV肉色諾卡菌皮疽諾卡菌新星諾卡菌豚鼠耳炎諾卡VV少食諾卡菌VNT假巴西諾卡菌南非諾卡菌/VNT老種諾卡菌NGNGNGNT紅球菌屬：為革蘭陽性卵圓形短桿菌。無鞭毛、無芽胞；在血平板上菌落呈橙紅色，表面光滑、濕潤(rùn)邊緣整齊菌落；液體培養(yǎng)常表面有菌膜。表20 紅球菌屬各菌種的鑒別菌 種色 素腺嘌呤酪氨酸半乳糖肌醇甘露醇鼠李糖山梨醇蔗糖枸橡酸鹽馬紅球菌粉紅V紅城紅球菌橙至紅VV棒椿象紅球菌紅 色VV紫色紅球菌玫瑰紅VVVVV注：NT未試驗(yàn)(sh

49、yn)； NG無資料芽胞桿菌屬的細(xì)菌(xjn)鑒定芽胞桿菌(gnjn)屬是一群需氧兼性厭氧、產(chǎn)芽胞的革蘭陽性桿菌，有70個(gè)種；在臨床上可分離到的有以下15種。即枯草芽胞桿菌、短小芽胞桿菌、地衣芽胞桿菌、液化淀粉芽胞桿菌、蠟樣芽胞桿菌、炭疽芽胞桿菌、蕈狀芽胞桿菌、蘇云金芽桿菌、環(huán)狀芽胞桿菌、堅(jiān)強(qiáng)芽胞桿菌、遲緩芽胞桿菌、巨大芽胞桿菌、凝固芽胞桿菌、嗜熱脂肪芽胞桿菌、熱脫硝芽胞桿菌；能引起人類致病的菌種，主要是炭疽芽胞桿菌和蠟樣芽胞桿菌。芽胞桿菌屬及相關(guān)菌種的鑒定見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（800面）。腸桿菌科的細(xì)菌鑒定腸桿菌科細(xì)菌包括布特維西菌屬；布丘桿菌屬；西地西菌屬；枸櫞酸桿菌屬；愛德華菌屬；腸桿

50、菌屬；埃希菌屬；志賀菌屬；愛文菌屬；哈夫尼菌屬；克雷伯菌屬；克呂沃菌屬；萊克勒菌屬；勒米諾菌屬；默勒菌屬；摩根菌屬；肥桿菌屬；布拉格菌屬；泛菌屬；光桿菌屬；鄰單胞菌屬；變形桿菌屬；普羅威登斯菌屬；拉恩菌屬；沙門菌屬；沙雷菌屬；塔特姆菌屬；特布爾西菌屬；致病桿菌屬；耶爾森菌屬；約克納菌屬及腸道菌58群、59群、60群、63群、64群、68群、69群、137群共39 個(gè)屬（群）。腸桿菌科細(xì)菌革蘭陰性，無芽胞，觸酶陽性，氧化酶陰性，葡萄糖O/F：F，硝酸鹽還原陽性。與其他科菌鑒別見下表表21 腸桿菌科與其他科細(xì)菌的鑒別生化反應(yīng)腸桿菌科弧菌科非發(fā)酵菌細(xì)菌形態(tài)革蘭陰性桿菌革蘭陰性弧菌革蘭陰性桿菌葡萄糖O

51、/FFFO/氧化酶/硝酸鹽還原/鞭 毛周毛或無毛單毛單毛、叢毛、周毛、無毛表22 腸桿菌科常見(chn jin)菌屬初步分類分 類類類類苯丙氨酸脫氨酶 葡萄糖酸鹽 菌 屬變形普羅威登斯菌摩根克雷伯菌腸桿菌屬沙雷菌屬哈夫尼亞埃希菌屬志 賀沙門枸櫞酸 愛德華 耶爾森菌苯丙氨酸葡萄糖酸鹽腸桿菌科各屬細(xì)菌鑒定(jindng)見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（808-818面）。弧菌(h jn)屬的鑒定弧菌屬與人類感染相關(guān)的有12個(gè)種，即霍亂弧菌（01群霍亂弧菌、0139群霍亂弧菌、非01群霍亂弧菌）副溶血弧菌、弗氏弧菌、擬態(tài)弧菌、豪氏弧菌、辛辛那提弧菌、梅氏弧菌、美人魚弧菌、創(chuàng)傷弧菌、溶藻弧菌、河流弧菌、哈氏弧

52、菌。其中有致病作用的是霍亂弧菌（01群、0139群、非01群）副溶血弧菌、河流弧菌、擬態(tài)弧菌、創(chuàng)傷弧菌和溶藻弧菌?；【b定首先應(yīng)與相近的菌屬區(qū)別，參見下表。表23 弧菌屬與相關(guān)菌屬的鑒別特 性氣單胞菌屬鄰單胞菌屬弧菌屬甘露醇/鳥氨酸/精氨酸/嗜鹽性/肌 醇0/129敏感RSS弧菌常規(guī)(chnggu)鑒定：臨床(ln chun)標(biāo)本直接涂片，觀察動(dòng)力，再做制動(dòng)試驗(yàn)及革蘭染色；見革蘭陰性、細(xì)小、微彎、逗號(hào)狀的桿菌；疑似者予以電話通知臨床。標(biāo)本(biobn)接種：血平板、堿性瓊脂平板、堿性胨水，35培養(yǎng)6-8小時(shí)，取堿性胨水培養(yǎng)物涂片，觀察動(dòng)力、做制動(dòng)試驗(yàn)及革蘭染色鏡檢?；魜y紅試驗(yàn)，氧化酶，霍亂多價(jià)

53、血清凝集可早期初步報(bào)告。血平板上菌落微?。粔A性瓊脂平板上可形成中等大小、園形、扁平、光滑、邊緣整齊、無色透明菌落。弧菌的生化特性及血清學(xué)分型見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（823-824面）。氣單胞菌屬的鑒定氣單胞菌屬氧化酶陽性、觸酶陽性、還原硝酸鹽為亞硝酸鹽、發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)氣；與人類致病的氣單胞菌的鑒別見下表。表24 人類致病的氣單胞菌種的生化特性生化試驗(yàn)嗜水氣單胞豚鼠氣單胞溫和生物變種維氏生物變種簡(jiǎn)氏舒氏脆弱氣單胞七葉苷水解阿拉伯糖產(chǎn)酸V蔗糖產(chǎn)酸VD-甘露醇產(chǎn)酸V-PV葡萄糖產(chǎn)氣V精氨酸雙水解酶賴氨酸脫羧酶V鳥氨酸脫羧酶頭胞噻吩RRSSRSR氨芐西林RRRRRRS不動(dòng)桿菌屬的鑒定不動(dòng)桿菌現(xiàn)歸莫

54、拉菌科。目前將不動(dòng)桿菌分為分解糖和不分解糖兩大類：葡萄糖氧化陽性、不溶血為鮑曼不動(dòng)桿菌；葡萄糖陰性、不溶血是洛菲不動(dòng)桿菌；溶血菌株是溶血不動(dòng)桿菌。臨床上分離到的絕大多數(shù)是鮑曼不動(dòng)桿菌，其他菌株引起的感染比較少見。生物特征：革蘭陰性球桿菌(gnjn)，多為球狀或球桿形，成雙排列為主；革蘭染色常不易脫色，被染成革蘭陽性球菌；經(jīng)次代培養(yǎng)或含有青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)，證實(shí)是桿菌，可形成長(zhǎng)絲體。本菌屬氧化酶陰性，觸酶陽性，硝酸鹽還原陰性，無動(dòng)力，不發(fā)酵糖類。7個(gè)種的生化特性見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（827面）。莫拉菌屬的鑒定(jindng)屬于莫拉菌科，與臨床有關(guān)(yugun)的有6個(gè)菌種：腔隙莫拉菌、犬

55、莫拉菌非液化莫拉菌、亞特蘭大莫拉菌、林氏莫拉菌、奧斯陸莫拉菌。本菌為不分解糖的革蘭陰性球桿菌，動(dòng)力陰性，可與大部分非發(fā)酵菌鑒別；不產(chǎn)生黃色素可與黃桿菌屬鑒別；莫拉菌屬與其他菌屬的鑒別見下表。表25 莫拉菌屬與其他菌屬的鑒別試 驗(yàn)?zāi)鷮倌紊鷮倏ㄋ粍?dòng)桿菌屬球狀球桿狀氧化酶葡萄糖/VDNA酶亞硝酸鹽/V金黃桿菌屬的鑒定金黃桿菌屬是最近命名的一個(gè)菌屬，由原先屬于黃桿菌屬中的6個(gè)種組成，包括：腦膜敗血性金黃桿菌、粘金黃桿菌、產(chǎn)吲哚金黃桿菌、金礦金黃桿菌、大菱鲆金黃桿菌。原先的短小黃桿菌現(xiàn)歸屬于穩(wěn)桿菌屬；芳香黃桿菌歸屬M(fèi)yroides;水生黃桿菌、嗜鰭黃桿菌等20個(gè)種仍歸黃桿菌屬。本菌革蘭陰性

56、桿菌，菌體細(xì)長(zhǎng)，兩端略膨大。氧化酶陽性、觸酶陽性、鳥氨酶陽性；無動(dòng)力與產(chǎn)黃色素的假單胞菌相區(qū)別。用七葉苷試驗(yàn)與短穩(wěn)桿菌區(qū)別。屬內(nèi)各菌種的鑒別見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（830面）。假單胞菌屬的鑒定1、分類和命名假單胞菌屬包括：（熒光假單胞菌DNA同源群）銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、韋龍氏假單胞菌、蒙氏假單胞菌；（非熒光假單胞菌DNA同源群）施氏假單胞菌、門多薩假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌、假產(chǎn)堿假單胞菌、淺黃假單胞菌（現(xiàn)已命名(mng mng)為淺黃金黃單胞菌）、棲稻假單胞菌（棲稻黃單胞菌）。2、常規(guī)規(guī)鑒定：本菌直或微彎革蘭陰性桿菌，無芽胞，觸酶陽性，需氧生長(zhǎng)；氧化酶陽性（除淺黃、棲稻假單

57、胞菌外）；在麥康凱及SS平板上生長(zhǎng)，不發(fā)酵乳糖，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；大多數(shù)菌株產(chǎn)生綠膿素和熒光素，使培養(yǎng)基呈現(xiàn)蘭綠色；某些菌株可產(chǎn)生特殊生姜味，在血平板上產(chǎn)生溶血(rn xu)。屬內(nèi)各菌種鑒別見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（831-832面）。嗜血(sh xu)桿菌屬的鑒定1、分類和命名：嗜血桿菌屬隸屬于巴斯德菌科。有9個(gè)菌種：流感嗜血桿菌、副流感嗜血桿菌、溶血嗜血桿菌、副溶血嗜血桿菌、嗜沫嗜血桿菌、副嗜沫嗜血桿菌、杜克雷嗜血桿菌、埃及嗜血桿菌、惰性嗜血桿菌。2、常規(guī)鑒定：嗜血桿菌為革蘭陰性短小桿菌，呈球形、細(xì)絲狀或多形態(tài)。無動(dòng)力，無芽胞，兼性厭氧，生長(zhǎng)需要X、V因子。鑒別見下表表26 嗜血桿菌屬菌

58、種的鑒別菌 種因子X、V-溶血葡萄糖發(fā)酵蔗糖發(fā)酵乳糖發(fā)酵甘露醇發(fā)酵木糖發(fā)酵觸酶CO2促進(jìn)生長(zhǎng)ONPGH2S流感嗜血桿菌 埃及嗜血桿菌 溶血嗜血桿菌 杜克雷嗜血桿菌 副流感嗜血桿菌 VV副溶血嗜血桿菌 惰性嗜血桿菌 WWV副嗜沫嗜血桿菌 V嗜沫嗜血桿菌W 注：V不同結(jié)果；W弱發(fā)酵(f jio)；ONPGO-硝基酚-D-半乳糖吡喃苷。利用(lyng)吲哚、脲酶、鳥氨酸3個(gè)試驗(yàn)，將流感嗜血桿菌分為8個(gè)生物型，其鑒別見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（837-838面）。放線桿菌屬的鑒定(jindng)1、分類和命名：放線桿菌屬有6個(gè)種，即李氏放線桿菌、馬駒放線桿菌、豬放線桿菌、尿素放線桿菌、人類放線桿菌、伴放線

59、放線桿菌。2、常規(guī)鑒定：營(yíng)養(yǎng)要求較高，在血平板或巧克力平板上才能生長(zhǎng)（需5%-10%CO2）生長(zhǎng)緩慢。血平板上形成光滑、圓形、凸起、淡蘭色菌落，或粗糙型菌落，牢固粘附于瓊脂上不易刮脫。伴放線放線桿菌菌落隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，呈星狀放射樣皺紋；在液體培養(yǎng)基中，菌落形成顆粒粘附管壁。該菌屬氧化酶陽性、觸酶陽性、脲酶陽性、發(fā)酵葡萄糖、動(dòng)力陰性的革蘭陰性球桿菌。屬內(nèi)菌種及相關(guān)菌的鑒別見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（840-842面）。產(chǎn)堿桿菌屬的鑒定產(chǎn)堿桿菌屬只有糞產(chǎn)堿桿菌1個(gè)種。本菌革蘭陰性桿菌，有動(dòng)力，氧化酶陽性、觸酶陽性、不水解纖維素、七葉苷、明膠和DNA。分解部分有機(jī)酸鹽和胺類產(chǎn)堿。菌落無色素，邊緣呈彌散狀

60、，-溶血，有水果味。與相關(guān)菌屬鑒別見全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（842-843面）。布魯菌屬的鑒定布魯菌屬最近分子學(xué)研究證明只有馬爾布魯菌1個(gè)種，其他均為生物變種。（流產(chǎn)布魯菌、豬布魯菌、綿羊布魯菌、狗布魯菌、木鼠布魯菌）。本菌營(yíng)養(yǎng)要求較高，需5%-10% CO2及培養(yǎng)基中含有硫胺、煙酸、生物素等物質(zhì)。在血平板上培養(yǎng)2-3天，出現(xiàn)微小針尖狀、不溶血、無色、半透明、圓形光滑、邊緣整齊菌落。（有時(shí)可出現(xiàn)粘液樣或干燥的硬皮樣菌落）革蘭陰性短小球桿菌，兩端純圓無動(dòng)力、無芽胞，氧化酶及觸酶陽性，分解葡萄糖，不分解阿拉伯糖和半乳糖果，硫化氫、精氨酸雙水解酶陰性。而流產(chǎn)布魯菌產(chǎn)生硫化氫，分解阿拉伯糖。屬內(nèi)別見全國(guó)