梅毒血清學檢測的操作規(guī)范主要內(nèi)容梅毒概述梅毒血清學檢測方法梅毒檢測技術規(guī)范梅毒是一種幾乎可以侵犯全身所有器官，而產(chǎn)生多種癥狀和體征的慢性傳染性疾病。十六世紀初由歐洲傳入亞洲，后蔓延我國。梅毒又稱為楊梅瘡、廣東瘡、疳瘡、下疳、霉瘡等。梅毒概述梅毒傳播途徑—性傳播性接觸是主要傳染途徑未經(jīng)治療的患者在感染后1年內(nèi)具有傳染性隨著病期的延長，傳染性越來越小感染后2年，通過性接觸一般無傳染性梅毒傳播途徑—母嬰傳播妊娠7周時，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳播未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期>2年），但妊娠時仍可傳染胎兒，病期越長，傳染性越小梅毒傳播途徑—其他途徑輸血傳播接觸傳播接觸部位附有梅毒螺旋體日常用品、接吻、哺乳、醫(yī)療器械等途徑梅毒的診斷病史癥狀實驗室檢查梅毒的實驗室檢查對診斷有重要意義梅毒實驗室檢測技術病原學檢測血清學檢測梅毒實驗室檢測的特點

臨床表現(xiàn)取材部位檢查方法 一期梅毒潰瘍淋巴結(jié)病原學檢查 血液 血清學檢查 二期梅毒皮損淋巴結(jié) 病原學檢查 血液 血清學檢查 潛伏梅毒血液 血清學檢查 三期梅毒血液 血清學檢查神經(jīng)梅毒血液 血清學檢查腦脊液 細胞、蛋白量檢查VDRL等暗視野顯微鏡檢查標本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損的滲出液、淋巴結(jié)穿刺液鍍銀染色檢查基本原理：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體結(jié)果：棕褐色的梅毒螺旋體非梅毒螺旋體抗原血清學檢測（非特異性梅毒抗體）梅毒螺旋體抗原血清學檢測（特異性梅毒抗體）梅毒血清學檢測分類VDRL(性病研究實驗室試驗)USR（不加熱血清反應素試驗）RPR(加速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗)TRUST(甲苯胺紅不加熱血清試驗)非梅毒螺旋體抗原血清學檢測方法抗原基本成分為心磷脂、卵磷脂和膽固醇抗原抗體集合形成復合物，凝集成網(wǎng)狀肉眼可見的沉淀顆粒試驗方法敏感性和特異性基本相似操作簡單，價格便宜可定量檢測非梅毒螺旋體抗原血清學試驗VDRLUSRRPRTRUST抗原成分心磷脂、卵磷脂、膽固醇同前+EDTA+氯化膽堿同前+EDTA+氯化膽堿+活性炭同前+EDTA+氯化膽堿+甲苯胺紅抗原穩(wěn)定性不穩(wěn)定,1天穩(wěn)定4℃～8℃保存12個月穩(wěn)定4℃～8℃保存12個月穩(wěn)定4℃～8℃保存12個月血清試驗前處理需滅活不需滅活不需滅活不需滅活反應板及結(jié)果判斷玻片，肉眼或顯微鏡玻片，肉眼或顯微鏡紙卡片，肉眼紙卡片，肉眼注釋唯一用于檢查腦脊液的試驗，診斷神經(jīng)梅毒結(jié)果容易判斷結(jié)果容易判斷四種非特異性試驗方法比較試驗所需儀器測速要求：100±2轉(zhuǎn)/分鐘試驗操作—定性檢測

(1)加樣：吸取50μL血清/漿放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈中(2)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原（16.7ul）

(3)反應：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果結(jié)果判讀RPRTRUST試驗操作—定量檢測（1）稀釋液準備：在圈內(nèi)加入50μL生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。（2）加樣：吸取50μL血清與各圈中生理鹽水做系列稀釋，并涂布整個圈內(nèi)。（3）余同定性試驗中。

孔號12345678

稀釋倍數(shù)

原倍1:21:41:81:161:32陽性K

陰性K生理鹽水(ul)-50.050.050.050.050.0--樣品(ul)50.0

50.050.050.050.050.0棄50.0-

-陽性血清(ul)------50.0-陰性血清(ul)-------50.0抗原懸液(ul)16.716.716.716.716.716.716.716.7

定量檢測操作步驟急性生物學假陽性反應的疾病麻疹、風疹、水痘、牛痘疹傳染性單核細胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染、猩紅熱肺炎鏈球菌肺炎、病毒性肺炎其他，如亞急性心內(nèi)膜炎、斑疹傷寒等急性生物學假陽性的特點滴度低，一般低于1:8持續(xù)時間短，多在疾病消退后6日內(nèi)轉(zhuǎn)陰用梅毒螺旋體抗原血清試驗檢測陰性慢性生物學假陽性反應的疾病系統(tǒng)性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡干燥綜合征、類風濕性關節(jié)炎自身免疫學溶血性貧血、橋本氏甲狀腺炎風濕性心臟病、慢性腎炎、肝硬化系統(tǒng)性硬化癥、毒品癮者孕婦、老年人慢性生物學假陽性特點可持續(xù)6個月以上，甚至終身滴度低，一般低于1:8用梅毒螺旋體抗原血清試驗檢測呈陰性梅毒血清反應假陰性前帶現(xiàn)象：在非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，二期梅毒患者血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性或陰性反應的結(jié)果。若將血清稀釋后再進行試驗即可出現(xiàn)陽性結(jié)果合并HIV感染的梅毒患者，梅毒血清試驗可呈陰性技術操作血清固定（耐血清性）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)早期的血清固定常與治療量不足或不規(guī)則治療、復發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)性梅毒有一定的關系FTA-ABSTPPA/TPHATP-ELISA發(fā)光法膠體金法梅毒螺旋體抗原血清學檢測

TPPA基本原理TPPA稱為梅毒螺旋體明膠凝集實驗用超聲裂解梅毒螺旋體制備抗原，致敏明膠顆粒致敏粒子與待檢血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體結(jié)合產(chǎn)生肉眼可見的凝集。TPPA操作步驟試劑準備：恢復室溫加稀釋液：每份樣本做4孔，加標本稀釋液加至微量反應板孔內(nèi)，第1孔100μL，第2～4孔各25μL樣本稀釋：取血清25μL加至第1孔，混勻后取25μL至第2孔，混勻后取25μL至第3孔，混勻后取25μL至第4孔，混勻后棄去25μL加對照液：第3孔加未致敏顆粒25μL，第4孔加致敏顆粒25μL混合：將反應板置振蕩器振蕩30秒反應：孵育2h觀察結(jié)果

TPPA結(jié)果判讀觀察第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗TPPA結(jié)果判斷觀察凝集反應強度：分級如下

4+~3+：顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊

2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)

1+：

顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)

±：顆粒模糊覆蓋，邊緣有明顯的小環(huán)

一：顆粒緊密沉積孔底中央或形成一小點梅毒螺旋體抗原檢測意義優(yōu)點敏感性高，特異性強對非特異性試驗進行證實缺點通常終身持續(xù)陽性不能區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染不能作為療效觀察指標梅毒血清學試驗結(jié)果解釋TRUST/RPRTPPA臨床意義陰性陰性排除梅毒（一期梅毒的早早期）陽性陽性現(xiàn)癥梅毒（梅毒孕婦所生的嬰兒除外）陽性陰性生物學假陽性陰性陽性早期梅毒經(jīng)治療后（早期梅毒）先天梅毒的