填空題

1.為了提高最終產(chǎn)品的回收率一是（提高每步分離效率），二是（減少分離步驟\

2.評價一個分離過程效率的三個主要標準是：（濃縮率），（分離系數(shù)）和（產(chǎn)品回收程

度）

3.生物產(chǎn)品的分離過程包括發(fā)酵液的預處理和（液固分離）,（產(chǎn)品的提取）,（產(chǎn)品的精制）

和（產(chǎn)品的加工處理I

4.生化反應所起的作用是產(chǎn)生目的產(chǎn)物，指標是（產(chǎn)率）和（轉(zhuǎn)化率），而生物分離解決的

是如何從反應液中獲取這些物質(zhì)，涉及的是（收率）和（純度）。

5.生物分離的主要任務：從發(fā)酵液和細胞培養(yǎng)液中以（最高的效率）,（理想的純度）和（最

小的能耗）把目的產(chǎn)物分離出來。

6.生物分離過程的特點包括（生物分離過程的體系特殊）/生物分離過程的工藝流程特殊）,

（生物分離過程的成本特殊1

7.物質(zhì)分離的本質(zhì)是識別混合物中不同溶質(zhì)間（物理），（化學）和（生物）性質(zhì)的差別利用

能識別這些差別的（分離介質(zhì)）和擴大這些差別的（分離設備）

8.性質(zhì)不同的溶質(zhì)在分離操作中具有不同的（傳質(zhì)速率）和或（平衡狀態(tài)）

9.平衡分離是根據(jù)溶質(zhì)在兩相間（分配平衡）的差異實現(xiàn)分離；溶質(zhì)達到分配。平衡為擴散

傳質(zhì)過程，推動力僅取決于系統(tǒng)的（熱力學性質(zhì)\

10.差速分離是利用外力驅(qū)動溶質(zhì)遷移產(chǎn)生的（速度差）進行分離的方法。

1.在細胞分離中，細胞的密度越（大），細胞培養(yǎng)液的密度越（?。瑒t細胞沉降

2.區(qū)帶離心包括（差速）區(qū)帶離心和（等密度）區(qū)帶離心。

3.為使過濾進行的順利通常要加入（惰性助濾劑X

4.發(fā)酵液常用的固液分離方法有（離心）和（過濾）等。

5.常用離心設備可分為（離心沉降）和（離心過濾）兩大類；

6.常用的工業(yè)絮凝劑有（無機絮凝劑）和（有機絮凝劑）兩大類。

7.工業(yè)生產(chǎn)中常用的助濾劑有（硅藻土）和（珍珠巖粉X

8.重力沉降過程中，固體顆粒受到（重力），（浮力），（摩擦阻力）的作用，

固體勻速下降時，三個力的關系（重力=浮力+摩擦阻力）。

9.發(fā)酵液預處理的方法包括：（凝集），（絮凝），（加熱法）；（調(diào)節(jié)pH法），（加水稀釋法），

加入（助濾劑）和（吸附劑1

10.發(fā)酵液中膠粒保持穩(wěn)定的原因：（雙電層）和（蛋白質(zhì)周圍水化層）結構。

11.發(fā)酵液預處理過程中的相對純化主要包括去除（高價態(tài)無機離子）,（可溶性雜蛋白質(zhì)）,

（色素）和（多糖類物質(zhì)）。

12.發(fā)酵液中雜蛋白的去除方法主要有（等電點沉淀法）,（熱處理法）和（化學變性沉淀法\

13.差速區(qū)帶離心用于分離（大?。┎煌念w粒，與顆粒（密度）無關。等密度區(qū)帶離心包

括（預形成梯度密度離心）和（自形成梯度密度離心）兩種方式。離心達到平衡后，樣品顆

粒的區(qū)帶形狀和平衡位置（不再發(fā)生變化X

1.單從細胞直徑的角度，細胞（直徑越?。璧膲毫蚣羟辛υ酱?，細胞越

2.常用的化學細胞破碎方法有（.酸堿法），（鹽法），（表面活性劑處理）,（有機溶劑法）和

（螯合劑1

3.包涵體的溶解需要打斷蛋白質(zhì)分子和分子間的（共價鍵）,（離子鍵），疏水作用及靜電

作用等使多肽鏈伸展。因此包涵體的溶解需要強的變性劑如（8mol/L尿素）和（6mol/L

鹽酸）

4.蛋白質(zhì)復性方法有:（稀釋法除變性劑），（膜分離法除變性劑），（層析法）等。

5.革蘭氏陽性菌和陰性菌破碎的主要阻力來自于（肽聚糖網(wǎng)狀結構X

6.溶菌酶破碎大腸桿菌的細胞，為了更好增加溶菌酶的溶胞作用，通常要配合加入螯合劑

（-EDTA）,其主要作用（產(chǎn)生空隙，從而酶進入肽聚糖發(fā)生作用）

7.酶解法分為（細胞自身酶系自溶）和（外加酶制劑催化工自溶作用通過（干燥

法）和（加熱法）實現(xiàn)。

8.機械破碎法只要是通過機械運動產(chǎn)生的（剪切力）來破碎細胞。

9.測定細胞破碎率的方法包括:（直接測定），（測定釋放蛋白質(zhì)或者酶的活力）和測定電導

率I

10.細胞破碎法包括（機械破碎法）和（非機械破碎法X機械破碎包括,（珠磨法）（高壓

勻漿法）（超聲波破碎法1非機法包括：（化學滲透法）（酶溶法）（物理破碎法入

11.滲透壓沖擊法使利用高滲透壓溶液產(chǎn)生的（壓差）作用來使細胞溶脹。

12.影響高壓勻漿法破碎的因素包括：壓力，溫度和通過勻漿器的次數(shù)。

13.影響包涵體變性溶解的因素：（作用的時間），（ph）,（離子強度）,（變性劑的種類和濃

度入

14.在變性溶解的過程中，變性劑破壞了蛋白質(zhì)的高級結構，但（一級結構）和供價鍵）沒有破

壞。當（除去變性劑）,蛋白質(zhì)會重新折疊，恢復蛋白質(zhì)的天然構型，

1.防止蛋白質(zhì)沉淀的屏障有蛋白質(zhì)周圍的（水化層）和（雙電子層）。

2.常用的蛋白質(zhì)沉淀方法有:（.鹽析法）沉淀,（有機溶劑）沉淀，（等電點）

3.Cohn方程中，Ks越（大）邛值越（?。?，鹽析效果越好。

4.蛋白質(zhì)溶液的pH在其等電點時，蛋白質(zhì)的靜電荷數(shù)為（0）。

5.等電點沉淀的操作條件是（低離子強度）和（PH=PI）

6.有機溶劑沉淀時，蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量越（大），則有機溶劑用量越少；在溶

液等電點附近，則溶劑用量越（少）。

7.鹽析常數(shù)Ks隨蛋白質(zhì)的相對分子量的（增大）或分子結構的（不對稱）性

1.反滲透中，溶質(zhì)濃度越高，滲透壓越大，則施加的壓力越（大）。

2.不對稱膜主要由起（膜分離）作用的表面活性層和起（支撐強化）作用的

3.料液的流速增大，則透過量（增大），透過通量的極限值（增大）。

4.當料液濃度提高時，透過通量（減小），極限透過通量（減少）.

5.濃度極化不存在時，表觀截留率=真實截留率；當溶質(zhì)完全被截留時，

表觀截留率等于Q）；當溶質(zhì)自由透過膜時，表觀截留率等于（0）。

6.工業(yè)上常用的超濾裝置有（板式），（管式），（螺旋差式）和（中空纖維式\

7.膜污染包括:（沉淀污染）,（吸附污染）,（生物污染1

8.影響膜過濾的因素:（料液濃度），（流速），（壓力），（濃差極化）,（PH值和鹽濃度1

9.反滲透的的傳質(zhì)理論（溶解-擴散）（優(yōu)先吸附-毛細管流動）（氫鏈理論）模

10.膜分離是利用膜的選擇性（孑宏大小）,以膜的兩側存在的（能量差）作為推動力，由于

溶液中各組分透過膜的（遷移率）不同而實現(xiàn)分離的一種技術。

1L微濾和超濾的傳質(zhì)模型包括（篩子模型）和（細孔模型X

12.pH和鹽濃度對于膜分離速率的影響包括兩個方面：一是對（膜表面電位、膜結構特性）

的影響，二是對（溶質(zhì)電荷特性）的影響。

13.對于膜分離過程，不僅需要具有優(yōu)良分離性能的（膜），還應該將其安裝在結構緊湊，性

能穩(wěn)定的器件使用，這就是（膜固體X

1.在較低的pH下有利于青霉素在（有機）相中的分配，當pH大于（水）相中。

2.利用溶質(zhì)在互不相溶的兩相之間（溶解度）不同而使溶質(zhì)分離的方法稱為萃

3.分配常數(shù)的適用條件是:（稀溶液），（溶質(zhì)對溶劑互溶沒有影響）和（必須是同一分子類

型，不發(fā)生締合或溶解X

4.溶質(zhì)在液一液兩相中達到萃取平衡時，具有化學位（相等），萃取速率為（0）

6.弱酸性電解質(zhì)的分配系數(shù)隨pH（減?。┒龃螅鯄A性電解質(zhì)隨pH（減?。?/p>

7.萃取過程中有機溶劑的選擇原則為（相似相容）原理。包含兩方面的相似：（分子結構）

相似和（能量）相似。

8.發(fā)酵液中夾帶有機溶劑微滴形成（水包油0/W）型乳濁液；有機相中夾帶發(fā)酵液形成（油

包水W/0）型乳濁液。

9.無機鹽的存在，可以（增強）溶質(zhì)在水相中的溶解度，（增加）溶質(zhì)向有機相

10.破乳常用的方法有（過濾或離心去除），（化學法）,（物理法）和（頂替法和轉(zhuǎn)型法X

11.分子間相互作用力相似一般以"介電常數(shù)”評價溶解的定量方法。介電常數(shù)（近），極性

（近），互溶性好；介電常數(shù)差距（大），極性相差（大），不容易

1.雙水相中溶質(zhì)在兩相中的分配有（靜電）作用、（疏水）作用、（生物親和）

2.PEG/DX雙水相中，若降低PEG的相對分子質(zhì)量,則蛋白質(zhì)的分配系數(shù)（增大），若降低

DX的相對分子質(zhì)量，則分配系數(shù)（減小X

3.雙水相中無機鹽的添加對溶質(zhì)分配系數(shù)的（相間電位差）和（表面疏水性）的

4.兩水相萃取中，高聚物和高聚物形成兩水相的原因是（聚合物不相容性），而高聚物和無

機鹽形成兩相的原因是（無機鹽鹽析作用I

5.雙水相相圖中，系線（越長），兩相間的性質(zhì)差別（越大1

6.疏水因子HF是描述上相與下相之間（疏水性）的差異的參數(shù)。疏水因子HF與成相聚合

物的（種類），（相對分子質(zhì)量）和（濃度）有關，與添加的鹽的（種類）和（濃度）有關，

還與（pH值）有關。

1.反膠團直徑減小，則蛋白質(zhì)的溶解率（減小）；蛋白質(zhì)的相，則溶解率（減小X

2.常用的形成反膠團的陰離子表面活性劑是（A0下丁二酸-2-2基己酸酯磺酸鈉）

3.表面活性劑）是構成反膠團的必要條件。只有濃度達到（臨界膠束濃度）以

4.蛋白質(zhì)溶入反膠束溶液的推動力為：（靜電作用力）和（位阻效應\

1.液膜萃取過程中，溶質(zhì)的遷移方式包括（單純遷移）,（反萃相化學反應促進遷移），（膜

向載體運輸同向遷移）和（膜向載體運輸反向遷移X

2.超臨界萃取的方式包括：（等溫法），（等壓法）和（吸附法I

3.超臨界流體萃取的過程是由（萃?。┖停ǚ摧腿。┙M合而成的。

4.液膜分離系統(tǒng)的膜是由（膜溶劑）,（表面活性劑），（流動載體）和（膜增強劑）構成的。

1.吸附按作用力主要分為（物理）吸附，（化學）吸附和（離子交換）吸附。

2.（交換容量）和（滴定曲線）是評價吸附劑性能的主要參數(shù)。

3.離子交換樹脂由（骨架），（活性基團）和（活性離子）組成。

4.良好的吸附劑應該具備四個特點:（較強吸附能力）,（較高吸附選擇性）,（機械強度高）

和（再生容易\

5.大孔吸附劑是在聚合反應時加入了一些不參加反應的（制孔劑），聚合完成后將其除去,

因而留下了永久性的（孔隙）而形成大孔網(wǎng)狀吸附劑結構。

6.離子交換樹脂按樹脂骨架分可分為（凝膠性樹脂），（大網(wǎng)格樹脂）和（均孔樹脂入按活

性基團可分為（陰~）和（陽離子交換樹脂X

7.離子交換樹脂中，交聯(lián)度越大，交聯(lián)劑含量（越高），樹脂孑（越?。瑱C械強度（越

高），一般不能用于（大分子物質(zhì)或兩性分子）物質(zhì)的分離。交聯(lián)度大的樹脂可以起到（分

子篩）的作用。

8.離子交換樹脂的制備可以分為（縮聚）法和（加聚）法。分別以（甲醛）和（二乙烯苯）

作為交聯(lián)劑。

9.兩性樹脂是含有（酸堿兩種基團）的樹脂。

10.離子交換過程的操作可分為（靜態(tài)）和（動態(tài)）兩種。

11.離子交換樹脂總是優(yōu)先吸附（高價）離子，對（低價）離子吸附較弱。

1.根據(jù)分離機理的不同，色譜法可分為（吸附色譜），（分配色譜）,（離子交換色譜）,（凝

膠色譜）等。

2.層析操作必須具有（固定）相和（流動）相。

3.溶質(zhì)的分配系數(shù)大，則在固定相上存在的幾率（大），隨流動相的移動速度（小）.

4.層析柱的理論板數(shù)越（多），則溶質(zhì)的分離度越（大）.

5.兩種溶質(zhì)的分配系數(shù)相差越（?。?需要的越多的理論板數(shù)才能獲得較大的分離度。

6.離子交換層析操作多采用（靜態(tài)）洗脫，（動態(tài)）洗脫和（連續(xù)梯度）洗脫。

7.凝膠色譜是根據(jù)溶質(zhì)（相對分子質(zhì)量）進行分離的一種液相色譜技術。根據(jù)流動相和固

定相的極性不同，液相色譜可分為（正向色譜）和（反向色譜\正相色譜中，流動相的極

性（彳氐于）固定相的極性。

8.G類葡聚糖凝膠常用G-X代表，X既代表（交聯(lián)度）,也代表（吸水值X

X數(shù)字越小，交聯(lián)度越（大），網(wǎng)孔越（?。?，適用于分離（低分子質(zhì)量）生化產(chǎn)品。X數(shù)

字越大，交聯(lián)度越（?。W(wǎng)孔越（大），適用于分離（高分子質(zhì)量）生化產(chǎn)品

9.色譜法中固定量的方法包括（標法）,（外標法）和（歸一化法\

10.紙層析和薄層層析流動相的移動是依靠（毛細）作用。

選擇題

1.純化酶時,酶純度的主要指標是:（酶的比活力）

2.下列哪項不是蛋白質(zhì)的濃度測定的方法（核磁共振1

4.分離純化早期，由于提取液中成分，因而易采用（分離量大分辨率低的方法）

5.蛋白質(zhì)類物質(zhì)的分離純化往往是多步驟的，其前采用下列的方法（負載量大）

6.（減少操作步驟）可以提高總回收率。

7.下列哪個不屬于高度純化：（吸附法）

8.下列哪個不屬于初步純化：（離子交換層析）

9.從組織中提取酶時，最理想的結果是（比活力最高）

11.在蛋白質(zhì)初步提取的過程中，不能使用的方法（有機溶劑萃取X

12.下面哪一種是根據(jù)酶分子專一性結合的純化方法（親和層析X

13.從分離過程和產(chǎn)品的評價角度講，其評價指標不包括：（分離速度）

1.其他條件均相同時，優(yōu)先選用哪種固液分離手段（過濾）

2.顆粒與流體的密度差越小，顆粒的沉降速度（越小）

4.下列物質(zhì)屬于絮凝劑的有（聚丙烯類X

5.發(fā)酵液的預處理方法不包括（離心）

6.為加快過濾效果通常使用（活性助濾劑）

7.不能用于固液分離的手段為（雙水相萃?。?/p>

8.酶提取液中，除所需酶外，還含有大量的雜蛋白.多（以上皆可）方法除去雜質(zhì)。

9.能夠除去發(fā)酵液中鈣.鎂.鐵離子的方法是（離子交換）

10.從四環(huán)素發(fā)酵液中去除鐵離子，可用（加黃血鹽）

11.表示離心機分離能力大小的重要指標是（分離因數(shù)）.

12.過濾的透過推動力是（壓力差）.

13.在錯流過濾中，流動的剪切作用（加重濃度極化，但降低凝膠層的厚度）。

14.撞擊破碎適用于（細胞器）的回收。

15.差速區(qū)帶離心的密度梯度中最大密度（小于）待分離的目標產(chǎn)物的密度。16.在蛋白

膠體夕M則，有不同的電位，下列描述：（在滑移面上的電位為《電位I

17.關于蛋白膠體離子形成雙電層后，蛋白外側分成不同的區(qū)域，下：（松散層1

18.菌體和動植物細胞的重力沉降操作，采用（加熱）手段，可以提高沉降速度。

19.關于對絮凝作用的描述，下列說法中不正確的是：（水化作用1

20.真空轉(zhuǎn)鼓過濾機工作一個循環(huán)經(jīng)過（過濾區(qū).緩沖區(qū).卸渣區(qū).再生區(qū)X

22.重力沉降過程中，固體顆粒不受（靜電力）的作用。

23.哪種細胞破碎方法適用工業(yè)生產(chǎn)（高壓勻漿）

24.高壓勻漿法破碎細胞，不適用于（青霉）

27.關于發(fā)酵液預處理，敘述正確的是：（調(diào)節(jié)pH值可以促進凝聚和絮凝作用還有利于調(diào)

整發(fā)酵液的狀態(tài)，防止沉淀變性，易于分離純化）

1.適合小量細胞破碎的方法是（超聲破碎法）

2.基因工程藥物分離純化過程中，細胞收集常采用的方法（膜過濾）

3.絲狀（團狀）真菌適合采用（珠磨法）破碎。

4.哪種細胞破碎方法適用工業(yè)生產(chǎn)（高壓勻漿）

5.珠磨機破碎細胞，適用于（青霉）

6.下列細胞破碎的方法中，哪個方法屬于非機械破碎法（化學法）

7.如果用大腸桿菌作為宿主細胞，蛋白表達部位為細胞質(zhì)，（滲透壓法）

8.破碎細菌的主要阻力是：（細胞壁1

9.下列哪種作用不是超聲波破碎的作用過程：（降解作用1

10.溶菌酶（lysozyme）適用于革蘭氏陰性菌細胞的分解,應用于革蘭氏陰性菌:（鰲合肽

聚糖層外的脂多糖中的鈣離子，破壞肽聚糖的穩(wěn)定性）

11.目前認為包含體的形成是部分折疊的中間態(tài)之間（疏水性）相互作用的結果。

12.高壓勻漿法破碎細胞，不適用于（青霉）

13.珠磨機破碎細胞，適用于（青霉）

14.撞擊破碎適用于（細胞器）的回收。

15.處于包含體的表達產(chǎn)物（具有正確的一級結構X

1.鹽析法沉淀蛋白質(zhì)的原理是（中和電荷，破壞水膜）

2.使蛋白質(zhì)鹽析可加入試劑（硫酸筱）

3.鹽析法純化酶類是根據(jù)（調(diào)節(jié)酶溶解度的方法）進行純化。

4.鹽析操作中，硫酸住在什么樣的情況下不能使用（堿性條件）

5.有機溶劑沉淀法中可使用的有機溶劑為（丙酮）

6.有機溶劑為什么能夠沉淀蛋白質(zhì)（介電常數(shù)?。?/p>

7.蛋白質(zhì)溶液進行有機溶劑沉淀，蛋白質(zhì)的濃度在（0.5%~2%）圍適合。

8.若兩性物質(zhì)結合了較多陽離子，則等電點pH會（升高）

9.若兩性物質(zhì)結合了較多陰離子，則等電點pH會（降低）

10.生物活性物質(zhì)與金屬離子形成難溶性的復合物沉析,然后適用（EDTA）去

11.在一定的pH和溫度下改變離子強度（鹽濃度）進行鹽析,稱作（KS鹽析法）

12.鹽析法與有機溶劑沉淀法比較，其優(yōu)點是（變性作用小）

13.在Cohn方程中,logS=p-KsI中，鹽析常數(shù)Ks反映（鹽的種類）對蛋白質(zhì)

14.在Cohn方程中，logs邛-Ksl中，0常數(shù)反映（pH值和溫度）對蛋白質(zhì)溶解

15.蛋白質(zhì)溶液的pH接近其等電點時，蛋白質(zhì)的溶解度（最小I

16.變性活化能A的蛋白質(zhì)可利用熱沉淀法分離（相差較大）

17.在相同的離子強度下，不同種類的徑（小且?guī)щ姾奢^多的陰離子）效果好。

18.鹽析沉淀時，對（結構不對稱且高分子量的）蛋白質(zhì)所需的鹽濃度低。

19.影響B(tài)-分離法的因素不包括：（無機鹽的種類）

20.影響Ks分離法的因素不包括:（鹽的濃度）

21.不合適鹽析用鹽的鹽是（碳酸鈉）。

22.下列離子中，鹽析作用比較強的是（PO））。

23.下列不屬于有機溶劑沉淀法的特點的是（變性蛋白）。

24.等電點法沉淀蛋白,原因是（降低其溶解度）。

25.不參與影響PEG沉淀效果的因素是（試劑毒性）

26.不屬于成鹽聚合物沉淀方法的是:（非離子聚合物成鹽）

27.將四環(huán)素粗品溶于pH2的水中，用氨水調(diào)pH4.5-4.6,28-30℃保溫，即有四環(huán)素沉

淀結晶析出。此沉淀方法稱為（等電點法）

28.關于蛋白質(zhì)鹽析的說法，的：（溫度升高，鹽析作用強，故溫度越高越好）

29.無機鹽的存在（有利于）溶質(zhì)向有機相中分配。

1.非對稱膜的支撐層（只起支撐作用X

2.哪一種膜孔徑最?。ǚ礉B透）

4.微孔膜過濾不能用來（pH<5）

5.超濾膜通常不以其孔徑大小作為指標，而以截留分子量作為指標。所謂"分子量截留值"

是指阻留率達（90%以上）的最小被截留物質(zhì)的分子量。

6.在超濾過程中，主要的推動力是（壓力）

7.膜分離是利用具有一定（選擇性透過）特性的過濾介質(zhì)進行物質(zhì)的分離過

8.反滲透分離的對象主要是（離子）。

9.超濾膜主要用于（不含固形物的料液）分離。

10.微濾主要用于（懸浮物）分離。

11.透析主要用于（生物大分子溶液的脫鹽）。

12.菌體分離可選用（微濾）.

14.蛋白質(zhì)的回收濃縮通常選用（超濾）。

15.相對分子量相同時，（球型）分子截留率最大。

16.相對分子質(zhì)量相同時，（線狀）分子截留率較低。

17.兩種以上高分子溶質(zhì)共存時與單純一種溶質(zhì)存在的截留率相比要（高）。

18.膜面流速增大，則（濃度極化減輕,截留率減少）0

19.膜分離過程中，料液濃度升高，則（粘度上升，截留率增加）。

20.當pH（等于等電點），蛋白質(zhì)在膜表面形成凝膠極化層濃度最大，透過

21.真實截留率和表面截留率在（不存在濃度極化）情況相等。

223昔流過濾操作中料液流動的剪切力作（減輕濃度極化,但降低凝膠層厚度）

23.當壓力較小，膜面上尚未形成濃差極化層時，止匕時，透過通量與壓成（正比）

24.當壓力逐漸增大時，膜表面出現(xiàn)濃差極化，此時透過通量增長速率（放慢）。

25.欲使溶質(zhì)濃度高的一側溶液中的溶劑透過溶質(zhì)低（施加壓力大于滲透壓）。

26.常用于海水和苦咸水淡化的膜分離技術是（電滲析\

27.電滲析采用的膜材料為:（離子交換膜）。

29.孔徑越大的微濾膜，其通量（下降速度越快）.

30.超濾和微濾是利用膜的篩分性質(zhì)以（膜兩側的壓力差）為傳質(zhì)推動力。

31.超濾和微濾的通量（與壓差成正比，與料液粘度成反比）。

32.關于膜分離過（可以通過增加料液中的溶質(zhì)濃度達到減輕濃差極化的作用）

33.膜分離過程中的影響因素，說確的是：（超濾分離過程中，增大流速會使膜兩側平均壓

力差減小，因為流經(jīng)通道的壓力降增大）

34.膜分離過程中的影響因素，說法錯誤的是：（對荷電膜，具有與膜相同電荷的分子截留

率較低，反之則較高）

1.用來提取產(chǎn)物的溶劑稱（萃取劑X

2.關于萃取下列說確的是（兩性電解質(zhì)在等電點時進行提?。?/p>

3.液一液萃取時常發(fā)生乳化作用，如何避免（加熱）

4.物理萃取即溶質(zhì)根據(jù)（相似相溶）的原理進行分離的

5.溶質(zhì)在液一液兩相中達到萃取平衡時，萃取速率為（零1

6.溶質(zhì)在兩相達到分配平衡時，溶質(zhì)在兩相中的濃度（不再改變1

7.萃取分配定律成立的條件為（恒溫恒壓，溶質(zhì)在兩相中相對分子質(zhì)量相等，且低濃度

圍）。

8.分配常數(shù)與分配系數(shù)（分配常數(shù)是分配系數(shù)的一種特例X

9.分配常數(shù)與分配系數(shù)在（溶質(zhì)在兩相中的分子形態(tài)相同）情況下相同。

10.若萃取平衡符合線性關系，并且各級萃取流量之和為一常數(shù)，各級（大）。

11.紅霉素是堿性電解質(zhì)，采用有機溶劑萃取，水相從pH9.8降至pH5（降低）。

12.青霉素是較強的有機酸，采用有機溶劑萃取時，水相中pH從3（明顯降低）o

13.無機鹽的存在（以上答案都不對）溶質(zhì)向有機相中分配。

14.有機溶劑萃取較高溫度有利于目標產(chǎn)物的回收與純化，通常操（較低溫度）

15.下列對分配定律的描述哪一個是正確的：（一定溫度壓力下，溶質(zhì)分配達平衡時在兩相

的濃度之比為常數(shù)）

16.關于用氫鍵形成來判斷各類溶劑互溶規(guī)律，下列（氫鍵形成是能量釋放的過程，若溶劑

混合后形成的氫鍵增加或強度更大，則有利于互溶）項是正確的敘述。

1.在葡聚糖與聚乙二醇形成的雙水相體系中，目標蛋白質(zhì)存在于（上相）

2.當兩種高聚物水溶液相互混合時二者之間的相互作用不可能產(chǎn)生（形成沉淀）

3.非電解質(zhì)溶質(zhì)在雙水相中的分配系數(shù)隨相對分子質(zhì)量的增大而（減小）

4.疏水因子HF一般隨聚合物的相對分子質(zhì)量，濃度和鹽析濃的增大而（增大）。

5.在pH為等電點的雙水相中蛋白質(zhì)的分配系數(shù)的對數(shù)值（雙水相的疏水性）。

6.在pH=pI的雙水相中，若雙水相疏水因子HF=O,則蛋白質(zhì)在兩相中的（1）。

7.雙水相的疏水因子HF值越大，則溶質(zhì)的分配系數(shù)越（大）。

8.在PEG/DX雙水相中，若添加的無機鹽使相間電位差AS<°,（大于等電點）。

9.在pH為等電點的雙水相中，蛋白質(zhì)主要根據(jù)（疏水性差異）產(chǎn)生各自分配。

10.在聚乙二醇/葡聚糖雙水相體系中，提高聚乙二醇的相對分子質(zhì)（減小I

11.在PEG-Dex雙水相系統(tǒng)中，關于雙節(jié)線形狀描述正確的是:（兩種聚合物相對分子質(zhì)

量相差越大，雙節(jié)線的形狀越不對稱）

1.蛋白質(zhì)溶解在反膠團中的主要推動力是（靜電相互作用）。

2.反膠團萃取中，蛋白質(zhì)相對于反膠團的（直徑越大，萃取率越低I

3.反膠團萃取若選用陰離子型表面活性劑，當水相中pH（小于）蛋白質(zhì)等電

4.反膠團的形狀是（極性頭朝里，非極性尾朝外I

1.乳化液膜的制備中強烈攪拌C.使相的尺寸變小

2.利用液膜膜相中流動載體B.選擇性輸送作用的傳質(zhì)機理稱為液膜膜相載體輸送。

3.液膜中膜溶劑的粘度越大，則膜B.易于成膜

4.在液膜分離的操作過程中,B.表面活性劑主要起到穩(wěn)定液膜的作用

5.超臨界流體萃取中，如何降低溶質(zhì)的溶解度達到分離的目的C.升溫

7.超臨界流體在其臨界溫度和壓力附近的微小變化，都會引起C.密度發(fā)生很大的變化。

8.超臨界流體萃取的萃取速度C.大于液一液萃取

1.適合于親脂性物質(zhì)的分離的吸附劑是（活性炭X

2.離子交換劑不適用于提取（抗生素）物質(zhì)。

3.強酸性陽離子交換樹脂的活性交換基團（磺酸）

5.離子交換法是應用離子交換劑作為吸附劑（靜電）

6.工業(yè)上強酸型和強堿型離子交換樹脂（鈉型和氯型\

7.依離子價或水化半徑不同（Fe3+>Ca2+>Na1

8.關于001x9離子交換樹脂敘述正確的是：（a）。

9.吸附劑和吸附質(zhì)之間作用力是通過（德華力產(chǎn)生的吸附稱為物理吸附。

10.哪一種活性碳的吸附容量最?。ㄥ\綸活性碳）

11.酚型離子交換樹脂則應在（pH>9）的溶液中才能進行反應

12.離子交換樹脂適用（乙醇）進行溶脹

13.通過改變pH值從而使與離子交換劑結合的各個組分被洗脫下來（a）

14.下面四條曲線中哪個是弱酸性離子交換樹脂的滴定曲線（b）

15.對于吸附的強弱描述錯誤的是（成正比）

16."類似物容易吸附類似物"（非極性溶劑）

17.將離子交換樹脂裝在玻璃柱中（Li+、Na*、Ca2+、Fe3+）

18.在酸性條件下用下列哪種樹脂吸附氨基酸有較大的交換容量（氫型陽）

19.活性炭在下列哪種溶劑中吸附能力最強（水）

22.當吸B僻作達到穿透點時，應（停止吸附）操作。

23.離子交換的分配系數(shù)與離子濃度呈（線性增加）關系。

24.線性梯度洗脫過程中，流動相的離子強度線性增大。（分配系數(shù)）

1.HPLC（高效液相色譜\

2.針對配基的生物學特異性的蛋白質(zhì)分離方法是（親和層析X

3.利用酶作為親和層析固定相（高度特異親合性）

4.用于蛋白質(zhì)分離過程中的脫鹽和更換緩沖液的色譜是（凝膠）

5.關于凝膠色譜的葡聚糖凝膠的性質(zhì)（分子質(zhì)量生化產(chǎn)品）

6.葡聚糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠的商品名分別是：（P）

7.氨基酸自動分析儀是以下列哪種色譜分離方法為基礎而設計的：（離子交換色譜）

8.在液相色譜中，某組分的保留值大小（組分與流動相和固定相）

9.凝膠色譜分離的依據(jù)是（各物質(zhì)分子大小不同1

10.在凝膠過濾（分離圍是5000-400000）中（肌球蛋白）

11.在高效液相色譜流程中，試樣混合物在（色譜柱）中被分離。

13.分子量大于5000的物質(zhì)與5000分子量以下的物質(zhì)分開選用（G-50\

14.分配層析中的載體（能吸附溶劑構成固定相1

15.洗脫體積是（與該溶質(zhì)保留時間相對應的流動相體積X

16.吸附色譜分離的依據(jù)是（固定相對各物質(zhì)的吸附力不同X

17.分子篩層析純化酶是根據(jù)（酶分子大小.形狀不同的純化方法）進行純化。

18.下列關于正相色譜與反相色譜說確的是（c）

19.一般來說，可使用正相色譜分離（帶電離子）

20.以氧化鋁和硅膠為介質(zhì)進行層析，對極性稍大的成分其Rf（?。?/p>

21.那一種凝膠的孔徑最小（SephadexG-25）

22.哪一種凝膠的吸水量最大（SephadexG-200）

23.葡聚糖凝膠可使用哪種溶劑溶脹（緩沖液）

24.氣相色譜的載氣不能用（氧氣）

25.在選用凝膠層析柱時（粗且長的）

26.線性梯度洗脫過程中（分配系數(shù)）

27.逐次洗脫過程中（階段式）

判斷題

原料目標產(chǎn)物的濃度越高，所需的能耗越高，回收成本越大。（x）

溶質(zhì)兩相中的濃度與相平衡時的濃度差是過程進行的推動稱為平衡分離。（X）

回收率反映被分離組分在分離與純化過程中損失的量。（X）

原料目標產(chǎn)物的濃度越高，所需的能耗越高，回收成本越大。（X）

在恒壓過濾中，過濾速率會保持恒定。（X）

生長速率高的細胞比生長速率低的細胞更難破碎。（X）

凝聚與絮凝的作用原理是相同的，只是沉淀的狀態(tài)不同。（X）

離心操作時，對稱放置的離心管要達到體積相同才能進行離心操作。（*）

發(fā)酵液中水的表面力是溫度的函數(shù)，溫度升高降低表面力對發(fā)酵液的X）

細胞絮凝的方法包括自身絮凝和絮凝劑絮凝。（X）

高級醇能被細胞壁中的脂類吸收，使細胞膜溶脹，導致細胞破碎。（X）

高壓勻漿法可破碎高度分支的微生物。（X）

凍結的作用是破壞細胞膜的疏水鍵結構，降低其親水性和通透性。（X）

高壓勻漿法適合團狀和絲狀細胞的破碎。X

超聲波破碎細胞是利用超聲波對細胞壁的降解作用。（X）

革蘭氏陰性菌的肽聚糖層比革蘭氏陽性菌的要厚。X

超聲波破碎法比較適合酵母菌的破碎。X

要增加目的物的溶解度，往往要在目的物等電點附近進行提取。X

蛋白質(zhì)水溶液中離子強度在生理離子強度（0.l5~0.2mol-kg-1）之外，蛋白質(zhì)x

在高離子強度時，升溫會使蛋白質(zhì)的溶解度下降，有利于鹽析沉淀，因此常x

利在其等電點的溶液中蛋白質(zhì)的溶解度最低的原理進行分離，稱為等電點沉x

無論是親水性強，還是疏水性強的蛋白質(zhì)均可采用等電點沉淀。X

鹽析法經(jīng)濟、安全、操作簡便、不易引起蛋白質(zhì)變性，且分辨率不高。X

有機溶劑沉淀蛋白的作用比鹽析的強，并且免去了后期脫鹽的麻煩。X

Pb2+不但可以和竣酸作用也可以和含有疏基的化合物作用形成金屬鹽復合物。X

丙酮沉析作用小于乙醇。X

超濾的主要分離對象是懸浮液中的菌體細胞。X

膜分離過程中增加流速一定可以增加膜的透過率。X

微濾膜中的表面過濾機理會造成膜孔的吸附。X

不對稱膜具有單一層的膜結構。X

膜污染和濃差極化都是不可逆的過程。X

弱電解質(zhì)的萃取過程中，一方面弱電解質(zhì)在水相中達到解離平衡，另一方面X

由于溫度影響相水系統(tǒng)的相圖，因而影響蛋白質(zhì)的分配系數(shù)，因此溫度對雙X

荷電溶質(zhì)在雙水相中分配系數(shù)的對數(shù)與溶質(zhì)的靜電荷數(shù)成反比。X

根據(jù)成膜液體的不同,分為W/O/W和0/W/0兩種，其中生物分離中主要應用0/W/0。

X

超臨界流體具有和液體類似的密度，與氣體類似的溶解性。X

壓力不變，減低溫度，超臨界流體的密度減小，萃取能力減弱。X

弱酸性陽離子交換樹脂在強酸條件下具備較強的離子交換能力。X

物理吸附是有選擇性的。X

化學吸附是多分子層吸附。X

活性炭在有機溶劑中的吸附能力強，在水中變?nèi)?。X

色譜分離技術中被檢測物質(zhì)的峰越寬越好。（X）

凝膠層析中分配系數(shù)為0,說明溶質(zhì)分子量很小，可以完全進入凝膠部。（X）

反相色譜中樣品中碳鏈越長，疏水性越強，在分離中和固定相的作用力越弱，洗脫體積較小。

（X）

當試樣中所有組分不能全部出峰，或只要求測定試樣中某個或幾個組分時，可用外標法定量

祖組分。（X）

問答題

3.生物分離工程可分為幾大部分，分別包括哪些1.固-液分離（離心、過濾、細胞破碎）2.

初步純化（離子交換吸附、萃取、溶劑萃取、反膠團萃取、超臨界流體萃取、雙水相萃?。?/p>

3.高度純化（色譜、電泳、沉淀）4.精制（結晶、干燥）

5.簡述生物活性物質(zhì)分離純化的主要原理？生物大分子分離純化的主要原理是：1）根據(jù)分

子形狀和大小不同進行分離，如差速離心與超離心、膜分離、凝膠過濾等；2）根據(jù)分子電

離性質(zhì)（帶電性）差異進行分離，如離子交換法、電泳法、等電聚焦法；3）根據(jù)分子極性

大小及溶解度不同進行分離，如溶劑提取法、逆流分配法、分配層析法、鹽析法、等電點沉

淀及有機溶劑分級沉淀等；4）根據(jù)物質(zhì)吸附性質(zhì)的不同進行分離，如選擇性吸附與吸附層

析等；5）根據(jù)配體特異性進行分離，如親和層析法等

6.生物分離工程分離效率可以從分離的方法和設備以及分離的過程和產(chǎn)品兩個1分離的方

法和設備：a分離容量（單位體積分離設備處理料液或者目標產(chǎn)物濃度）b分離速率（批次

處理所需時間）c分辨率（目標產(chǎn)物分離效果或去除雜質(zhì)的能力）目的：研發(fā)分離容量高，

分離速率高，分辨率高的新技術，新介質(zhì)，新設備

2分離過程和產(chǎn)品a濃縮程度（衡量以濃縮為目的的分離過程）b分離系數(shù)（目標產(chǎn)品分離

純化程度）c回收率（產(chǎn)品回收程度）目的：設計和優(yōu)化分離過程，提高分離效率b減少分

離步驟，縮短分離時間c提高產(chǎn)品回收率和活性，降低生產(chǎn)成本

2.凝集與絮凝過程有何區(qū)別？如何將兩者結合使用？常用的絮凝劑有哪些？

la凝聚：指在投加電解質(zhì)作用下，膠體粒子間雙電層排斥電位降低，并使粒子相互聚集成

1mm大小塊狀凝聚體的過程。b絮凝：指在某些高分子絮凝劑存在下，基于橋架作用，使

膠體粒子交聯(lián)成網(wǎng)，形成10mm大小絮凝團的過程。2先用凝集劑將小粒子變大顆粒，再

用絮凝劑產(chǎn)生粗大絮凝團3無機絮凝劑，高分子無極聚合物，有機絮凝劑

6.密度梯度區(qū)帶離心法中差速區(qū)帶離心法和等密度區(qū)帶離心法的異同？

區(qū)帶離心種類差速區(qū)帶離心等密度區(qū)帶離心

共同點事先在離心管用低分子量溶質(zhì)調(diào)配好密度梯度

梯度介質(zhì)常用蔗糖常用氯化鋅

密度梯度較大密度梯度低于較大密度較大密度梯度大于較大密度

的沉降樣品的沉降樣品

區(qū)帶形成條件根據(jù)各個組分沉淀系數(shù)的差根據(jù)組分密度差形成區(qū)帶

別，形成各自區(qū)帶

離心條件在較快的沉降物質(zhì)達到管底組分沉降到其平衡的密度區(qū)，

前停止，短時間、低速度長時間、高速度

1.細胞破碎的方法包括哪幾類？工業(yè)上常用的方法有哪些？①機械破碎法（珠磨法、高壓

勻漿法、超聲波破碎法）物理破碎法（凍融法、低溫玻璃化法）化學滲透法（加酸、堿、鹽、

表面活性劑、有機溶劑、變性劑、螯合劑等）酶溶法（各種酶對細胞壁的降解）②工業(yè)常用：

高壓勻漿法、珠磨法

2.簡述基因工程產(chǎn)品包涵體的分離過程？并簡單說明每個步驟的目的，方法？①a收集菌

體細胞一b細胞破碎一c包涵體的洗滌一d目標蛋白的變性溶解一e目標蛋白的復性②a目

的：密集菌體，以得到更多產(chǎn)物，方便后續(xù)操作。方法：凝聚法，分離法，膜過濾法b目

的：使包涵體釋放方法：機械破碎法（高壓勻漿、珠磨、超聲波、撞擊破碎）c目的：去除

除包涵體外的雜質(zhì)，防止復性時雜質(zhì)與目標蛋白一起復性為純化帶來困難。方法：采用洗滌

劑（溫和的表面活性劑Tritonx-100）,蔗糖、低濃度的弱變性劑（如尿素）或脫氧膽酸等,

能溶解去除膜蛋白和脂類雜質(zhì)。d目的：不溶性的目標蛋白必須溶解到液相中，才能進一

步純化。水溶液很難溶解，采用蛋白質(zhì)變性使其形成可溶性。方法：加入變性劑（尿素X

增容劑（SDSI加入中強堿（PH>9）或者有機溶劑（每支少使用）

e目的：包涵體在變性劑溶液（如鹽酸服、豚）中溶解，造成溶解的蛋白質(zhì)呈變性狀態(tài)，即

所有氫鍵、疏水鍵全被破壞，疏水側鏈完全暴露，但一級結構和共價鍵不被破壞。當除去變

性劑時，一部分蛋白質(zhì)可以自動折疊，恢復成具有活性的天然構型的過程。方法：稀釋法除

變性劑（加入大量水或緩沖液）膜分離法除變性劑（透析、電濾、電滲透）層析法（凝膠層

析、高效疏水層析）

5.簡述細胞破碎法選擇的依據(jù)？①細胞處理量：規(guī)模角度出發(fā)②細胞壁的結構和強度：破

碎細胞的種類：細菌、酵母和真菌細胞的形狀和大小③目標產(chǎn)物對破碎產(chǎn)物的敏感性：生

物質(zhì)的穩(wěn)定性為出發(fā)點④破碎程度：后續(xù)操作

1.常用的蛋白質(zhì)沉淀方法有哪些？為什么很少單獨使用等電點沉淀法（1）鹽析法、機溶劑

沉淀法、等電點沉淀法、非離子多聚物沉淀法、生成鹽復合物法、選擇性的變性沉淀、親和

沉淀及SIS聚合物與親和沉淀等（2）PH=PI時，兩性電解質(zhì)仍有溶解度，沉淀不完全，加

上許多生物分子的等電點比較接近，難區(qū)別。

3.何謂鹽溶和鹽析？產(chǎn)生的原因？鹽析法沉淀蛋白質(zhì)的機理？（1）鹽析：一般指溶液中加

入無機鹽類而使某種物質(zhì)溶解度降低而析出的過程。鹽溶：低鹽濃度下，增加分子間靜電斥

力，使溶解度增大而溶解的過程。（2）鹽析：高鹽濃度下，中和電荷，破壞水化膜，蛋白

質(zhì)溶解度隨之下降。鹽溶：在低鹽濃度下，隨著中性鹽離子強度的增加，蛋白質(zhì)系數(shù)逐漸降

低，且蛋白質(zhì)吸附帶電離子使分子間互排，而蛋白質(zhì)分子與水分子間相互作用力加強，溶解

度大。（3）加入大量中性鹽，奪走水分子，破壞了水膜，暴露出疏水區(qū)域，中和電荷，使

顆粒間相互排斥力失去，布朗運動加劇，蛋白質(zhì)分子結合成凝聚物而沉淀析出。

4.

7.什么是鹽溶和鹽析，產(chǎn)生的原因？請從鹽析的角度說明，熟鴨蛋蛋黃中脂肪

（1）鹽析：一般指溶液中加入無機鹽類而使某種物質(zhì)溶解度降低而析出的過程。

鹽溶：提高中性鹽濃度使在低離子強度溶液中某些蛋白質(zhì)或偶極離子溶解度增加的現(xiàn)象。

（2）鹽析：高鹽濃度下，中和電荷，破壞水化膜，蛋白質(zhì)溶解度隨之下降。鹽溶：在低鹽

濃度下，增加蛋白質(zhì)分子間靜電斥力，蛋白質(zhì)溶解度增大。（3）蛋黃中除了脂肪以外，還

含有豐富的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)就是一種高明的乳化劑，它能夠把蛋黃中的脂肪分散成很小的油

滴。在鹽漬過程中，作為乳化劑的蛋白質(zhì)被鹽析出來，乳化液被破壞，原來分散成極小的油

滴，彼此就相互凝聚起來，變成大油液，使得整個蛋黃變得油滋滋的，甚至流出油來。

8.影響鹽析沉淀的主要因素有哪些？欲提高鹽析效率應采取的措施？（1）蛋白質(zhì)種類、離

子類型、溫度和PH、鹽的加入方式、蛋白質(zhì)的原始濃度。（2）選擇相對分子量大，結構不

對稱，ks值大的蛋白質(zhì)；控制PH盡量靠近PI,控制蛋白質(zhì)濃度，避免局部鹽濃度過高,

升高溫度。

9.什么是Ks鹽析法和口鹽析法？各有何意義？(1)ks鹽析法：在一定PH和溫度下,改變

體系離子強度進行鹽析的方法。B鹽析法：在一定離子強度下，改變PH和溫度進行鹽析。

(2)ks鹽析法：由于蛋白質(zhì)對離子強度變化非常敏感，易產(chǎn)生共沉淀現(xiàn)象，常用于蛋白質(zhì)

的粗提。B鹽析法：由于溶質(zhì)溶解度變化緩慢，且變化幅度小，因此分辨率更高，常用于對

粗提蛋白質(zhì)進一步分離純化。

1.在大規(guī)模鹽析法生產(chǎn)時最常用中性鹽是什么？(1)硫酸鉞(2)鹽析作用要強；有較大溶

解度；有惰性；來源豐富、經(jīng)濟；不易引起蛋白質(zhì)變性；鹽溶液密度不高；便于蛋白質(zhì)沉淀

和離心分離。

4.按推動力類型的不同膜過程可分為幾類？這些膜過程的推動力，大小，透過物截留物，

應用有什么區(qū)別？列表解釋(1)以濃度差為推動力的過程：透析技術

以電場力為推動力的過程：電透析、離子交換電透析

以靜壓力差為推動力的過程：微濾、超濾、反滲透

(2)

膜過程推動力大小透過物截留物應用

微濾壓力差(0.25-10mm)水、溶劑懸浮物顆粒纖維多孔膜

顆粒大小形狀溶解物

超濾壓力差(0.025-0.05mm)水、溶劑膠體和超過非對稱性膜

分子特性大小形狀小分子截留分子量

的分子

反滲透壓力差(0.0002-0.001mm水、溶劑溶質(zhì)、鹽非對稱性膜

)