實驗診斷學實驗指導

蘭州大學第一醫(yī)院實驗診斷教研室

實習的目的與要求：

一、實習目的通過實習學習有關檢驗的操作方法，熟悉和了解其基本技術，以便

進一步理解課堂講授的內容，達到理論聯(lián)系實際的目的。

二、實驗室守則

1.準時參加實習，進實驗室時必須穿好白大衣，遵守課堂紀律注意保持實驗室的整齊與安

靜。

2.實驗前，將學習手冊加以預習。實習開始，仔細聽取講解，認真觀察示范操

作及示教標本，光明了實驗原理和操作步驟后再操作。

3.實驗過程中要認真操作，仔細觀察并聯(lián)系有關理論進行思考，注意檢驗

數據的準確性和嚴謹性。

4.愛護儀器，節(jié)約試劑，用前檢查，用后清點，損壞時要登記賠償。

5、注意安全，凡病人標本均應視為有傳染性，應防止污染自己及他人每次實

習課后認真洗刷實驗用具，并輪流搞好實驗室的清潔衛(wèi)生。

6、認真作好實驗記錄，正確地書寫實驗報告并于每次實習后交給輔導教師。實驗

成績共20分（每次實驗3分，提問2分），直接加到期末考試成績中（卷面成績

滿分80分）。

目錄

第一單元血液一般檢查.................................

第二單元尿及糞便常規(guī)檢查...............................

第三單元漿膜腔穿刺液與脊髓液檢查......................

第四單元檢驗報告單的閱讀及分析.........................

第一單元血液一般檢查

一、紅細胞計數（redbloodcellcount）

［要求］掌握末梢采血技術，熟悉細胞計數板的結構及用法，進行紅細胞計數，并記住參

考值、臨床意義。

［原理］一定量的血液，經一定量的等滲性溶液稀釋后，充入血細胞計數室中,

于顯微鏡下計數一定體積內的紅細胞，并求得每升血液內的紅細胞數。.

［儀器試劑］

1.血細胞計數板，為一特制的長方形硬質玻璃板、中間1/3部分具有“H”形槽

溝，橫槽溝上下的平臺部分各深0.1mm,成為二個計數臺（池），每臺有一個計

數區(qū)域，分為9個大方格，每一個大方格的面枳為lmm2,四角的每個大方格又

劃分為16個中方格，供白細胞計數用。中央的一個大方格用雙線劃分為25個

中方格，每中方格又劃分為16個小方格，共為400個小方格，供紅細胞計數

用。計數臺之上覆以特制的蓋片（厚度0.4mm、表面平直、質地較硬）后構成計

數室。每個大方格的體格是0.1mm3（1mmXhnmXO.lmm）,參閱圖1,2及3。

2.容量準確的微量吸管（具有10ul及20ul刻度）

3.紅細胞稀釋液（Haycm稀釋液）

氯化鈉1.0g

硫酸鈉（Na2s（）4-10H20）5.0g

氯化高汞5.0g

蒸饋水加至200ml過濾后備用

此稀釋液為等滲性溶液，比重較大，使紅細胞易于懸浮，并有防腐作用。

4.光學顯微微

5.消毒、穿刺用具為75%酒精棉球、干棉球、消毒刺血針。

⑵法］

1.準確加紅細胞稀釋2ml于一中號試管中，塞緊管口，并拭凈血細胞計數板

及蓋玻片。

2.用75%酒精棉球消毒被檢人左手無名指尖側腹部。

8、高球蛋白血癥病人，其血液加稀釋液后，迅速出現(xiàn)顆粒狀渾濁，高汞將球。

此時可換用生理鹽水作稀釋液，及時計數。

9、含高效價冷凝集素的病人，當血加入稀釋液之后，應事先將紅細胞稀釋液

管加溫后再放入血液或將紅細胞懸液管置溫箱內待冷凝現(xiàn)象消失后再迅速混勻計

數。

［參考值］

成年男性(4.0~5.5)X1012/L

成年女性(3.5~5.0)X1012/L

初生兒(6.0?7.0)X1012/L

二、血紅蛋白測定(hemoglobindetermination)

［要求］熟練掌握采血技術，能進行血紅蛋白測定。并記住參考值和臨床意

義。

［原理］血紅蛋白被高鐵氟化鉀氧化為高鐵血紅蛋白(Hi),再與鼠結合成

穩(wěn)定的棕紅色氟化高鐵血紅蛋白(HiCH)。在特定波長利光徑(比色杯內徑)條件下具

有一定的吸光度，儀器據此即可求得血紅蛋白濃度(g/L)。

［儀器、試劑］

儀器微量吸管

粗口徑清潔試管

消毒采血用具

血紅蛋白儀

試劑VanKampen一Zijlstra(文齊氏)液(HiCH轉化液)

氟化鉀(KCN)0.05g

高鐵氟化鉀［K3^e(CN)6］0.20g

無水磷酸二氫鉀(KH,PO。)0.14g

TritonX-10()(或其它非離子表面活性劑)1.0ml

蒸馀水加到1000ml

上述試劑為淡黃色溶液貯存棕色瓶中室溫妥善保存，其中非離子表面活性劑

可加速溶血。縮短轉化時間，防止因血漿蛋白改變引起的渾濁。

［方法］

1.取血紅蛋白轉化液2.5ml于粗口徑試管中加血10ul混勻，室溫(20℃-25℃)

靜置5min。

2.以校正過的(用蒸鐳水調零和血紅蛋白標準液校準)

由于血紅蛋白不是單一品種，各種血紅蛋白分子量不完全一致，所以不用IS

制mmol/L表示，而報告質量濃度g/L。

［注意事項1

(1)血紅蛋白儀必須經過校準。

(2)若轉化濃度渾、變綠即不可再用。

(3)轉化液不能偏酸，也不宜用聚乙烯瓶裝，否則KCN易分解失效。

(4)丙種球蛋白或白細胞數值明顯增高的血液，可出現(xiàn)渾濁，可按15g/L甚

至5Og/L加入氯化鈉以防止°

(5)關于轉化液中KCN毒性問題由于濃度很低僅50mg/L,故只要分

散處理隨時流水沖稀棄去危害性不大，但不可積存處理。

(6)若用疊氮鈉、液代十六烷三甲氨法測定血紅蛋白時，均需依本法進

行校準。

［參考值］

成年男性120—160g/1

成年女性110—150g/L

初生兒170—200g/L

三、白細胞分類計數(Whitecelldifferentimcount,DC)

［要求］

1.掌握血涂片制作及染色技術。

2.學會辯認外周血中各種白細胞的形態(tài)特點及其分類計數的方法。

3.記住參考值和臨床意義。

［原理］

Wright一Giemsa(瑞一姬氏)伊紅的鈉鹽有色部分為陰離子，可與帶

正電荷的物質結合；氯化美蘭有色部分為陽離子，可與帶負電荷的物質結合。瑞氏

染料對胞質及中性顆粒的著色性極佳，而姬堪薩染粉對細胞核著色較好。采月瑞-

姬氏復合染液取得更好的染色效果。為使血片每次染色效果好且趨于一致，需配制

PH6.4-6.8的緩沖液，使細胞蛋白質在此恒定的環(huán)境中著色。

［儀器、試劑］

1.光學顯微鏡

2.瑞、姬氏復合染液瑞氏染粉0.5g,姬姆薩染粉2g,堿性美蘭5g,混勻后加10ml

甘油在乳缽內研磨，再用甲醇500ml稀釋后，室溫放置一周備用。

3.磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)磷酸二氫鉀0.3g,磷酸氫二鈉0.2g蒸僧水加于

1000ml,備用。

4.香柏油、二甲苯及擦鏡頭用棉紙。

5、光潔中性無油垢的載玻片及一端平齊稍窄于載玻片的推片，玻璃蠟筆。

［方法］

1.常規(guī)消毒皮膚，穿刺后拭去第一滴血，，

2.用載玻片的一端刮馭血液一小滴。

3、將推片的平齊端置載玻片上血滴的稍前方，將推片略向后移使與血液

相接觸，血液遂于推片與載玻片的夾角間散開。

4、以約30度的夾角向前均勻地推動即可制成血涂片，其薄厚度要適中，襯以

白紙時應呈淡的紅黃色，且有頭體尾之分。(圖5)

圖5血片的制備

5.血涂片干后，于Iftl膜兩端用玻璃始筆各劃一線，以防染液流失，滴力口瑞-

姬氏復合染液數滴于血涂片上（以蓋住血膜為度），靜置約Imin,目的在于用染液

的甲醇成分固定血細胞。

6.加相當于染液1.5—2倍量的緩沖液充分混勻。

7,染色約5-l（）min,屆時將載有染液的涂片置低倍鏡下觀察，若見白細胞的核著

色清晰、核漿分明即可用水沖去染液，干燥后鏡檢。

8。鏡檢時先用低倍鏡選好薄厚適宜、染色良好、細胞分布均勻處，滴加香柏

油一滴，用油浸鏡觀察。通常計100個白細胞（必要時可增到200或更多），按

圖9所示方向移動血涂片，同時將所遇到的各類白細胞分別記錄，直到計數100個

白細胞為止，計算每類白細胞的數目，即其百分數值。

分類計數時以畫“正”字作如下記錄：

中性桿狀核下

中性分葉核正正正正正正正正正正正正正

嗜酸粒細胞一

嗜堿粒細胞

淋巴細胞正正正正正

單核細胞正一

［注意事項］

1.作血涂片時勿用傷口第一滴血，以免混有來自受損微血管的內皮細胞。

2.血涂片薄厚適度，過厚時細胞簇集影響形態(tài)觀察，過薄則白細胞太少不易分

類。影響血涂片薄厚的因素為：①血滴過大、夾角過大、推片速度過快則厚；②

血滴過小、夾角過小、、推片過慢則薄。

3.加瑞-姬氏染液或加緩沖液之后，切勿干枯，否則血涂片中每有殘渣，將干

擾鏡檢。

4.染色時間的長短，視染液性能而定，應以低倍鏡觀察其染色良好為度。

5.要以流水沖去染液，而不可先棄去染液再沖水，以免留有殘渣。

6、分類時一定要用油浸鏡觀察，以便同時觀察白細胞有無質變及紅細胞的形

態(tài)學。

7、因胞體較大的白細胞如嗜酸性粒細胞，單核細胞、中性粒細胞于涂片的上

下邊緣處多見，而胞體較小的臼細胞如淋巴細胞則以涂片中心地帶為多，分類計

數時切不可只在某一局部，而應按規(guī)定方向推動血涂片來進行觀察。

8、分類報告時如紅、白細胞有大、小、形態(tài)、染色等質的改變應同時描述。

9、白血病病人血涂片因細胞常不易著色，應酌情延長其染色時間。

1()、凡白細胞總數低的病人作分類計數時，切不可以加厚血涂片的方式來解決,

因涂片過厚時，細胞簇集，著色常不理想而影響分類辯認。應多推若干張薄厚適宜

的血涂片來進行分類。

［參考值］

中性桿狀核粒細胞1-5%0.01-0.05

中性分葉核粒細胞50-70%0.50-0.70

嗜酸性粒細胞().5-5%().()()5-().()5

嗜堿性粒細胞0-1%0-0.01

淋巴細胞20-40%0.20-0.40

單核細胞3-8%0.03-0.08

四、紅細胞沉降率(erythrocytesedimentationrate.ESR)

［要求］

1、了解血沉的操作技術及讀取方法。

2.每組選一位同學在無菌操作下采取靜脈血作Westergren法血沉。

3.記住參考值及臨床意義。

［原理］血液經枸椽酸鈉抗凝后，吸于特制的血沉管中，垂直豎立一小時，觀

察其紅細胞下沉的速度，以所暴露出的血漿段的高度(mm)表示。

［儀器、試劑］

1.靜脈穿刺用器材，包括壓脈帶、墊枕、無菌注射器(2ml)、2.5%碘泗,75%泗

精及消毒棉簽等。

2、特制的Westergren血沉管(全長3()()mm,內徑2.5mm,具有0—200mm刻度)。

3.Westergren血沉架(圖6)

4.106mmol/L枸椽酸鈉溶液

⑵法］

1.向有2ml刻度的中號試管中準確地加入I06mmol/L枸椽酸鈉0.4ml。

2.作靜脈穿刺后，取血約2mL拔去針頭注入上述試管內，使血量恰達2ml的

劃線處，輕輕混勻。

3、用Westergren血沉管準確地吸此抗凝血至“()”刻度處，擦凈管尖，友直堅

立于血沉架上.記時。Ih后讀取血漿段的高度，以mm表示。

圖6魏氏血沉摘和血沉管

［注意事項］

1.注射器內腔、血沉吸管內腔均須干燥，以防溶血。

2.血量與抗凝劑比例應嚴格遵守4:1,并充分混勻，如有小凝塊則因消耗了纖

維蛋白原而使血沉減慢。

3.血沉吸管必須垂直豎立，如有傾斜可致血沉增快。

4.血沉試驗應及時進行，抗凝血于室溫中最長不得超過2h,否則水份蒸發(fā)，可

使結果減慢。

5、嚴重貧血病人紅細胞大小不均時，于lh后血漿與沉積的紅細胞之間未能形

成整齊的界面，此時要讀取靠近較緊密沉積的紅細胞層的刻度作為血沉數值。

6.中等度以上貧血的病人做血沉測定時，可做貧血校正試驗，

即將病人血用枸椽酸鈉溶液按9：1比例抗凝，以3()0()「/1］山］速度離心301后11

之后，將上層血漿完全吸出，然后按正常人紅細胞比積情況，人為地將血漿與壓積

紅細胞按各0.50L/L的比例(男性病人)或按壓積紅細胞為0.40L/L,血漿

為0.60L/L的比例(女性病人)混合后再作ifL沉測定，報告時注明系貧血校正

后血沉數值。

7、血沉測定時室溫以18—25℃為宜，溫度越高血沉越快，反之減慢，但

有高效價冷凝集素時則相反。必要時需校正溫度。

［參考值］

男性0T5mm/h末

女性0-20mm/h末

第二單元尿及糞便常規(guī)檢查

一、尿液檢查

(一)標本的采集

1.標本的種類

(1)隨機尿門診病人常用，但易受各種因素的影響，致使低濃度或臨

界濃度的病理性物質和有形成分易被漏檢。

(2)晨尿早晨起床后的第一次尿標本。最適于腎病患者尿液的一般檢查。

(3)餐后尿通常在餐后2h收集尿標本，此標本對病理性蛋白尿和糖尿的檢出更

為敏感

(4)定時尿應從排空尿液開始計算時間，將全時間內各次尿液和到時間后

排空膀胱中的尿液全部送檢。定時尿最常應用的是4h,12h,24h尿。主要用于尿中

有形成份和一些化學成份的定量。

2、采集方法將尿標本隨時留取于清潔容器內即可。女性應避免月經及陰道

分泌物混入，必要時沖洗外陰后，留中段尿檢查。留12h或24h尿時應適當放防腐

劑(如甲苯2ml/lOOml尿液、40%甲醛液().2—().5ml/lOOml尿液、10%鹽酸

l()ml/24h尿液)。若作細菌培養(yǎng)，則必須用無菌瓶按無菌操作留取中段尿，必要時

用無菌手術導尿送檢。

(二)、尿液物理學與化學檢查

1.尿量正常成人每晝夜尿量常在1000—2000ml之間，平均為1500mlo

尿量增多見于糖尿病、尿崩癥、慢性腎炎（尿液縮功能障礙）等。尿量減少見于急

性腎炎、高熱、水腫、休克及各種原因所致的急性腎功能不全。無尿見于嚴重急

性腎功能不全。

2.顏色正常為淡黃色。病理性可見乳糜尿、血尿、血紅蛋白尿及膽紅素尿等。

3、透明度正常新鮮尿液多透明，放置后可出現(xiàn)微量絮狀沉淀。若新鮮尿明

顯混濁可見以下情況：①尿酸鹽沉淀，以粉紅色結晶析出多見于酸性尿液冷卻后。

加熱或加堿后混濁消失；②磷酸鹽和碳酸鹽沉淀，淡灰白色結晶析出，多見于堿性

或中性尿液。加酸后混濁消失若為碳酸鹽可產生氣泡磷酸鹽則無氣泡產生；③膿

尿和菌尿呈云絮狀沉淀，加熱加酸其混濁均不消矢。

4.比密測定

（1）將尿混勻后沿管第:慢慢倒入尿量筒內，避免發(fā)生氣泡，如有氣泡可用毛細

吸管或吸水紙吸去。

（2）將比密計（上有1.000—1.060刻度）輕輕放于尿液內，使其懸浮于中央,

勿觸及筒壁或筒底。

（3）等比密計停穩(wěn)后，讀取與尿液凹面相切的刻度，即為被測尿液的比密。

（4）結果判斷：正常人比密為1.015—1.025之間。急性腎炎尿量少比密高；而

慢性腎炎尿量多，比密低；糖尿病病人，尿量雖多，但尿內含有糖，故比密高。尿

崩癥、慢性腎功能不全，尿比密常在1.010左右形成低比密尿。

（5）注意事項：①尿量太少，不足以浮起比密計劃時，可用蒸儲水將尿液稀釋一

倍后，再行測定。其結果應將讀數末尾兩位數字乘2,即得原尿液比密。②尿比密

計應保持清潔，特別是比密計的球部不能附著蛋白質，不用時放置在干凈水中泡

洗后保存。③測比密時若尿液的溫度（室溫）與比密計上所注明溫度不一致時,

每高3℃測得結果則應增加（）.（X）l；每低3℃時貝ij應減去（）.（）（）1。④蛋白尿和糖

尿按每增加l（）g/L,從尿比密中分別減去（）.005（對蛋白質而言）或（）.00乙（對

糖而言）。

5、酸堿反應（pH試紙法）：用廣范圍pH試紙（pHl—14）中立即取出觀察顏

色變化。與標準色板比色，讀取PH值。

6.尿蛋白測定一一尿蛋臼定性試驗

(1)加熱乙酸法

［原理］加熱煮沸使蛋白質變性凝固，加酸使pH下降約達到蛋白質的等點

(pH5左右)，可促進蛋白質的沉淀，并可使加熱析出的磷酸鹽、碳酸鹽溶解。

［方法］取15X150mm試管1只，加入清晰尿液至管的2/3高度。用試管夾

持試管下端，將試管上部斜置在火焰上加熱，煮沸即止。輕輕直立試管，在黑色背

景下觀察煮沸部分有無混濁。滴入5%乙酸溶液3一4滴，再煮沸后立即觀察，如無

混濁出現(xiàn)即為陰性，如有混濁即為陽性，按下表判斷結果。

加熱醋酸法結果判斷表

結果符號約含蛋白質(g/L)

仍清晰——0

黑色背景下輕微混濁+-<0.1

白色混濁，無顆粒及架片沉淀+().1-0.5

明顯白色顆粒狀混蝕，但無絮片沉淀-H-0.5-2.0

大量絮片狀混濁，無凝固塊+++2.0-5.0

出現(xiàn)凝固塊并有大量絮片狀沉淀++++>5.0

［注意事項］①尿液標本要新鮮，陳舊尿液因大量細菌生長可引起假陽性。標

本內含有其它分泌物(如女性生殖及泌尿道分泌物)也能出現(xiàn)假陽性。②尿登白含

量很少量，加酸后始出現(xiàn)混濁。因此操作時必須遵照加熱、加酸、再加熱的程序。

加入乙酸量也要適當。過多或過少均可使陽性反應程度減弱。③限鹽病人因尿液

電解質含量減少，可致假陰性。因此，試驗時先滴加飽和氧化鈉1—2滴于尿液中,

再進行操作。

(1)磺基水楊酸法

［原理］磺基水楊酸亦稱磺柳酸，為生物堿試劑，在略低于等電點的酸性環(huán)境

下，其陰離子(酸根)與蛋白質的氨基端陽離子結合，成為不溶的蛋白鹽而沉淀。

〔方法］取試管2只，各加入弱酸性清新尿1ml,

于一管中加20g/L磺基水楊酸溶液2滴，輕輕混勻，另一管不加試劑做空白

對照，1分鐘內立即觀察結果，結果判斷如下表：

磺基水楊酸法結果判斷

符號結果

（一）:尿液外觀仍清晰透明

極微量：僅在黑色背景前可見極輕微混濁

微量：不需要黑色背影即可見到輕度混濁

(+):明顯的白色混濁但無顆粒出現(xiàn)

(++):明顯混濁并出現(xiàn)顆粒

(+++):嚴重混濁并有大凝塊下沉

(++++):更明顯混濁并有絮狀沉淀。

(++++):更明顯混濁并有絮狀沉淀。

［注意事項］①混濁尿應離心后取上清液做試驗；②本法非常敏感，判斷結果時

間應嚴格控制在15秒內；③尿液堿性較強時，滴加試劑后局部出現(xiàn)白色混濁，但

輕搖即消失，應于尿液內加入冰乙酸數滴，酸化尿液到pH5再作試驗;④尿中含高

濃度尿酸或尿酸鹽時正呈假陽性反應，特點為滴加試劑15秒后，尿液逐漸呈蛛絲

狀混濁，其后慢慢擴散，薄薄覆蓋于尿液表面，加熱或加堿可迅速消失。

（3）試帶法

［原理］試帶上的酸磴指示劑浸酚藍的pH范圍是3.0?4.6,在pH3.0的拘椽酸

緩沖系統(tǒng)中浸酚藍指示劑的陰離子，與尿液中的蛋白質（白蛋白）作用，產生黃綠

色顏色變化再與標準色板比色，測得蛋白質含量。呈色深淺與蛋白質含量成正比。

［方法］將試帶浸于尿液中，立即取出，在溶器邊緣除去多余尿液，15秒后與

標準色板比色。結果判斷如下表。

溟酚藍試帶法結果判斷表

反應顏色符號約蛋白質量g/L

淡黃色—<0.1

淡黃綠色+-().1-0.3

黃綠色+0.3-1.0

綠色++1.0-3.0

綠灰色+++3.0-8.0

藍灰色++++>8.0

［注意事項］①尿標本要新鮮；②試帶應存放于陰涼干燥處，避免沾污酸堿及

與手接觸，有效期一般為一年；③此試帶檢測的主要是白蛋白，對球蛋白幾乎不反

應故不適用于非選擇性蛋白尿標本（腎炎患者）此時應改用200g/L磺基水楊酸

法測定。④尿液pH{3或）8時，超過了試帶的緩沖能力，可出現(xiàn)假陰性或假陽性結

果，故可用氫氧化鈉或稀乙酸校正尿液pH至5—7再作測定；⑤尿液中鹽類較多,

特別是磷酸鹽較多時，可出現(xiàn)假陽性，加稀乙酸調節(jié)pH后可以糾正。康液中如含

有大量紅、白細胞，應離心后取上清尿液測定蛋白。⑥黃疸尿、血尿、濃縮的深色

尿都影響結果判斷，應加以糾正。

7、尿糖測定

（1）葡萄糖氧化酶試帶法

［原理］見血糖測定

［方法］將試帶浸入尿中，1秒鐘后取出與標準比色板比較并報告。

［參考值］空腹尿糖（一）

2.尿葡萄糖定量測定（葡萄糖氧化酶法）

［原理］見血糖測定

［方法］先做尿糖定性試驗，大概可估計出尿糖量，然后用蒸儲水稀釋尿液在

含糖量約“+”范圍。其余操作同血糖，結果乘以稀釋倍數。

［參考值］0.5—1.0mmol/L

當血糖＞8.88retool/L,超過腎閾時可出現(xiàn)尿糖。

［注意事項］

葡萄糖氧化酶法只對尿中葡萄糖產生特異性反應，而與尿中其他糖類和還原

性物質不起反應，故特異性較高。如尿中含有比受體對氧親和力更強的物質時，則

可產生假陰性。如維生素C.左旋多巴代謝物等。試驗前患者應停用維生素C24h

以上。

（三）尿液自動化分析儀檢查

［原理］尿液自動化分析儀是用球面積分儀和雙波長法測定試劑帶上各種試

劑墊和尿液接觸后出現(xiàn)的不同顏色變化，并分別在數碼管上顯示，并打印出報告。

試帶上另有一個試劑墊補償區(qū)，作為尿液本底顏色，以對有色尿液及儀器變化等

因素產生的誤差進行補償。目前試帶最多可測十一項，均系一般化學反應。原理

如下：

1.臼細胞（LEU）中性粒細胞中存在特異性酯醇，可分解呵噪酚酯，釋放出阻

口朵酚，呼I噪酚與重氮鹽發(fā)生反應而呈紫色，依其顯色之深淺而換算為白細胞數。此

法只能測中性粒細胞而不與單核，淋巴細胞起反應。

2、亞硝酸鹽(NIT)引起泌尿道感染的某些細菌可使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,

將膜塊中對氨基苯神酸重氮化生成重氮鹽，再與N-1一蔡乙二胺二鹽酸化物偶聯(lián)

使膜塊產生粉紅色。

3.pH試劑墊上含有甲基紅(pH閾值4.6—6.2)和濱麝香草酚蘭，(pH閾值6.7

-7.5),二者適量配合可反映尿液pH5—9的變異范圍。在酸性尿中為橙紅色到黃

色，堿性尿中為綠色到藍色。

4、蛋白質(PRO)采用指示劑蛋白質誤差的原量，對尿中的白蛋白特別敏感,

球蛋白的敏感性僅是白蛋白的1/100-1/5(),原理見尿蛋白試帶法。

5.葡萄糖(GLU)葡萄糖氧化酶催化葡萄糖形成葡萄糖酸和過氧化氫過氧化

物酶再催化過氧化氫和碘化鉀色原反應呈現(xiàn)黃綠色至棕色。

6.酮體(KET)膜塊中的亞硝基鐵氟化鈉可與尿中的乙酰乙酸，丙酮產生紫色

反應，對乙酰乙酸的敏感性為50—100mg/L,對丙銅僅為400—700mg/L,不與”

B一羥丁酸起反應。故對酮癥的早期診斷或治療監(jiān)測不夠敏感。

7、尿膽原(UBG)尿膽原在酸性條件下與對二甲氨基苯甲醛作用，生.成

櫻紅色化合物。

8、膽紅素(BIL)結合膽紅素在強酸介質中與2,4一二氯苯胺重氮鹽起偶

聯(lián)反應，呈紫紅色。-,

9、血紅蛋白或紅細胞(潛血)尿中紅細胞內的或其破壞釋放的血紅蛋白均含有

血紅素成分(BLD),它具有類似過氧化物的樣活性，使過氧化氫茴香素分解巴新生

態(tài)氧，氧化色素原鄰聯(lián)甲苯胺而呈色。

10、尿比重(SG)：試紙條中的多聚(甲基酸)馬來酎的PKa值與離子濃度相

關，尿標本中離子濃度越高。其酸性基團(氫離子)解離越多，使膜塊pH改變，并通

過澳麝香草酚蘭的顏色變化顯示出來，低離子濃度為藍綠色，離子深度升高轉為

黃綠色，進而換算成尿比重，該方法比重跨度大，只適于粗篩，為尿自動檢查中最

不敏感的指標，尤其不適于濃縮稀釋試驗使用。

11、維生素C：膜塊中含一定量的嚷嗪和惡嗪化合物，它們在氧化狀態(tài)時顯

顏色，被維生素C還原時退色。

［儀器、試劑］

1.尿液自動化分析

2.標準試帶和測定試帶

3.陰性與陽性質控液

⑵法］

1.開機預熱。

2.取標準試帶，同時取測定試帶二條分別于|月性、陽性質控液中浸泡(浸泡時

間按儀器廠家要求)，取出并在質控液瓶壁刮去多余尿液，立即依次將標準試帶,

陰性、，陽性質控測定試帶放入比色槽，按“運行”鍵，儀器即自動打印出各種結

果。如結果在允許范圍內，即可進行正式檢測。標準試帶是各種成分定值的顏色,

不能浸質控液，用后立即收回保存供永久使用。

3、將測定試帶浸于待測新鮮而且混勻的尿液中一定時間(按儀器說明)取出刮

去多余尿液，放入比色槽，按運行鍵，即可獲得打印報告。

［參考值］

蛋白質(PRO)neg(<25/ul)

亞硝酸鹽(NIT)neg(陰性)

PH4.6—7.4

蛋白質(PRO)neg(<().3g/L,30mg/dl)

葡萄糖(GLU)norm(<2.8mmol/L,50mg/dl)

酮體(KET)neg(<0.86mmol/L,5mg/dl)

尿膽原(UBG)norm(<17umol/L,Img/dl)

膽紅素(BIL)neg(<8.55umol/L,0.5rug/dl)

紅細胞(Ery)或潛血(BLD)neg(<10/ul)

比重(SG)隨HL尿1.0()5-1.030,晨尿1.015-1.025

維生素C(VTC)<0.6mmol/L(1Omg/dl)

*neg(陰性)norm:正常

［注意事項］

I.尿液自動化分析儀所需尿量少，出結果快，具有半定量的性質，特別適用于

大批尿標本的常檢查。但對試帶測定結果異常，或有明確腎臟疾患的病人還需采用

精典的常規(guī)加鏡檢的方法。

2.自動化測定的不足之處是：尿十一項中有三項（pH、比密、蛋白）是通這pH

變化反映的，故各種影響pH的因素都可使比密與蛋白測定影響。因此只有在測定

時的pH的正常范圍內，后二者的結果才可信。白細胞數值可因蛋白質濃度增高

（>5g/L）或用大劑量先鋒IV、慶大霉素而假性減低，有人認為隱血試劑過于敏感而

引起紅細胞假性增高，實際上有可能是由于紅細胞的破壞而造成自動化分析與鏡

檢不符。此外自動化分析對尿中膿細胞、管型等有形成份不能查出。大劑量維生

素C對隱血、尿紅細胞、尿糖、亞硝酸鹽等檢查都可致假陰性，此時尿中維生素C

的濃度分別是大于50mg/dl（尿糖檢查）,大于40mg/dl（潛血檢查），大于25rug

/dl（膽紅素和亞硝酸鹽檢查）。

3、測定試帶有一定保存期，因此要注意做好質控。

（四）顯微鏡檢查

1.尿沉渣制片可用離心或不離心法。離心標本較不離心標本濃縮約50倍，可

提高檢驗質量。

I方法］:離心法是將新鮮尿混勻，取10ml放入試管中，以500G離心機半徑

20cm時轉速1500r/min血）。離心5min后棄去上清液，使沉渣和殘留液量為

0.2ml,輕輕搖動試管，用吸管吸取混合液滴入載玻片上。用18mmX8mm的蓋玻

片覆蓋尿沉渣后鏡檢。不離心法是將新鮮尿液混勻后，取I滴于載玻片上覆蓋蓋玻

片，立即鏡檢。鏡檢時先用低倍鏡（lowpowerfield,LPF,100倍）進行全視野觀察尿

沉渣分布狀態(tài)，再換高倍鏡（highpowerfield,HPF,400倍）觀察10個高倍視野，以

所見最低與最高值報告之。

2,尿沉渣中鏡檢物及期形態(tài)（定量）

1）細胞

（1）紅細胞為淺黃色雙凹圓盤形，類似丁外周血不染色涂片上的紅細胞形

態(tài)。在濃縮尿中紅細胞常皺縮成表面帶刺，顏色較深的球形。在低滲尿或尿素作用

下，紅細胞吸水脹大，血紅蛋白從紅細胞中脫了，成為一個無色的圓圈，稱為紅細

胞淡影。正常人離心尿中紅細胞為0—偶見/HPF。如1—2/HPF為增多,>3/HPF

為鏡下血尿。

⑵白細胞新鮮尿中臼細胞外形完整，無明顯的退行性變，胞質內顆粒清晰

可見，胞核清楚，常分散存在。炎癥時，死亡的中性粒細胞，外形多不規(guī)則，結構模

糊，胞質內充滿粗大顆粒，核不清楚，細胞常連成團，細胞間界限不明顯，此時可

稱為膿細胞。正常人離心尿中自細胞應＜5個/HPF。

（3）上皮細胞

鱗狀上皮細胞形態(tài)扁平而大，似魚鱗樣，不規(guī)則，核小，呈圓或卵圓形。正

常尿中，常見少量此類細胞。婦女尿中較多出現(xiàn)，臨床意義不大。

移行上皮細胞有表層移行上皮細胞，多呈不規(guī)則圓形，核較小常居中央；中層移

行上皮細胞，常呈梨形、紡錘形，故又稱尾形上反細胞，核稍大，呈圓或橢圓形；

底層移形上皮細胞，體積較小，形態(tài)較圓，反光性強，如尿中較多出現(xiàn)，且常有紅

細胞、膿細胞同時出現(xiàn)時，則可能為泌尿道炎癥。

腎小管上皮細胞為中性粒細胞的1一1.5倍大小，常呈多角形，具有大核，核膜厚

而易見，胞質內可見脂肪滴或小空泡-正常尿中不見，于急進性腎小球腎炎、腎小

管損傷、急性腎上管壞死利尿期、腎移植術排異反應時易見。

2）管型

透明管型表面光滑，兩端鈍圓、管型內清晰透明。正常人晨尿中可偶然見到。

顆粒管型管型內有多數顆粒、有大而粗，亦有小而細者，稱為粗或細顆粒管

型。正常尿中見不到。

細胞管型管型如含有許多腎小管上皮細胞稱為上皮細胞管型；含有許多紅

細胞者稱為紅細胞管型；有許多白細胞（膿細胞）者稱為白（膿）細胞管型。正常尿中

見不到。

蠟樣管型光滑鈍端有高度的折光性，無色或黃色，外形有時彎曲或有切跡。

見于慢性腎功能不全。

目前在歐美國家已開始推出尿沉渣酌定量分析，以期使尿沉渣鏡檢標準化,

并與尿液干化學自動分析問有更好的可比性。具體方法是：采用專為尿沉渣分析

設計的10ml尿液離心管，離心條件同前；離心后棄上清，可保證留下的尿沉渣為

0o25ml,將尿沉渣混勻后取一滴沖入尿沉渣定量分析板，然后計數分析板上固定

體積（lul）計算區(qū)內有形成份的數量，并以每微升數報告之。

3）鹽類與結晶

（1）堿性尿內注意三聯(lián)磷酸鹽、尿酸鏤、磷酸鈣、碳酸鈣、無定形磷酸鹽類（圖

12及下表)

(2)酸性尿內注意尿酸、草酸鈣、非晶形尿酸鹽及其他鹽類結晶，如鳧氨酸、酪

氨酸、胱氨酸、膽固醉、膽紅素結晶

3.報告方式

(1)紅細胞、白細胞和上皮細胞，以高倍鏡視野表示最低和最高值。如紅細

胞0—3/HPFo

(2)管型用低倍鏡視野表示最低和最高值。如透明管型0—5/LPF。

(3)結晶數量用高倍鏡視野以“+”表示，按每占據視野1/4區(qū)為“+”，不

必計數。

二、糞便檢查

糞便檢查(fecesexamination)是診斷消化道炎癥、出血、寄生蟲病必不可少的

化驗項目.隱血試驗有助于消化道出血病因的鑒別及惡性腫瘤的普查，故糞便檢查

在臨床上廣泛應用。

［要求］

1.掌握糞便常規(guī)檢查的具體步驟。

2.學會辯認糞便中常見的細胞成分、寄生蟲及蟲卵和脂肪小滴肌肉纖維等食物

殘渣。

3.掌握隱血試驗的原理、操作、結果判斷及臨床應用等。

(一)一般性狀及顯微鏡檢查

［儀器、試劑］

I.光學顯微鏡

2.載玻片、蓋玻片、小竹簽。

3.生理鹽水。

⑵法］

1.首先對糞便標本進行肉眼觀察，包括顏色如何，是否成形，有無粘液，膿血

成分及肉眼可見的寄生蟲等。并于報告結果時加以描述。

2.將糞便涂片后進行顯微鏡檢查。

(1)于光潔的載玻片中心部位加一小滴生理鹽水。

(2)用小竹簽挑取少許待檢糞便，如有粘液、膿血等病理部分則挑取之。如無

病理成分可自標本不同部位及糞端各挑取少許，置生理鹽水中輕輕研碎后，覆以

18mmX18mm蓋片.鏡檢。

(3)先用低倍鏡瀏覽，注意有無蟲卵(圖14)、原蟲或不消化食物殘渣(圖15)o

(4)轉高倍鏡后鏡檢，至少觀察10個視野。如見有紅、白細胞等應作粗略計數,

即記錄其10個高倍視野中所見的最低至最高值，如白細胞0—8/HPF,紅細胞5

—10/HPF,腸粘膜上皮細胞5—15/HPF等。

(5)糞便中的白細胞多為中性粒細胞，為灰白較薄的圓球形，無折光性，不見

其核，胞質中充滿細小顆粒。人體酵母菌有的與白細胞形態(tài)頗相似，可借破壞試驗

來鑒別，即于載玻片上滴加蒸儲水一滴，涂糞便后覆以蓋片，迅速鏡檢，凡人體酵

母菌遇水破壞而消失，白細胞則因不易破壞而仍可察見。糞便中的新鮮紅細胞為淡

黃色有輕度折光性的圓形細胞，較白細胞為小。腸粘膜上皮細胞為灰色規(guī)則或不規(guī)

則的矮柱狀上皮，兩端呈鈍圓形，胞核辯以察見.

圖14常見人體寄生蟲卵

(6)未消化的食物殘渣，如脂肪小滴、肌肉纖維及淀粉顆粒等在胰腺功能不全

時較易見到應加以描述。

圖15糞便的顯微鏡所見

［注意事項］

1.糞便標本不可太少，否則不易發(fā)現(xiàn)異常成份。標本應及時檢驗，否則其細胞

成份可因變性破壞而消失。

2.涂片時生理鹽水用量不可過多，否則糞汁將溢于蓋片之外而導致污染。

3、涂片厚度應適宜，以涂片制成后，隔著涂片隱約看清字體為度。過厚時每

致內含物簇集難以辨認，過薄時可因取材過少而易漏檢。

4、如遇稀汁樣糞便，可不必滴加生理鹽水而直接馭滴覆以蓋片后鏡檢。

［參考值］

正常成人的糞便多為黃褐色成形無粘液或膿血，鏡檢時不見細胞或蟲卵。

(二)糞便隱血(occultblood,0B)檢查

［原理］血紅蛋白中的血紅素成分與過氧化物酶的結構相似(但其結合的

蛋白質不同)而具有弱過氧化物酶活性，也能催化過氧化氫放出新生態(tài)氧。而氧

化受體，使之呈色。故可借以識別微量血液。加冰乙酸是為了加速其反應。常見

的受體試劑有鄰聯(lián)甲苯眩、聯(lián)苯胺、還原酚酚、無色孔雀綠匹拉米洞、愈創(chuàng)木酯

等?，F(xiàn)介紹常用的匹拉米洞法。

［試劑］

1.50g/L匹拉米洞酒精液

匹拉米洞5g

95%酒精100ml

2.3.0%雙氧水

3.冰乙酸

［方法］

1.取消毒潔白棉簽一支于旋轉過程中滴加50g/L匹拉米洞酒精液，直至全部

浸溫為止°再旋轉滴加等量的3%雙氧水及一滴冰乙酸02.立即用小竹簽挑取

少許糞便反復涂抹于上述棉簽，如出現(xiàn)紫藍色為陽性反應，其弱陽性呈蘿紫藍色,

如涂抹糞便后3min仍不顯色時，為陰性反應。

［注意事項］

1.3%雙氧水如已矢效則將導致假陰性反應，可通過血膜發(fā)泡試驗來進行鑒定,

即將雙氧水1小滴置于末染色血膜上，如漸發(fā)生多數小氣泡表示有效，否則應更

新。

2.試驗用具不得沾染血跡或膿液，否則均可導致假陽性反應。在新制的消毒棉

簽上來作試驗，既可避免膿血成分的干擾，又因背地潔白而易于識別弱陽性反應。

3.為準確判斷隱血試驗的結果，應請受試者素食3天（不吃肉類及含血食品）后

留馭糞便標本。如糞便中膿液很多可呈假陽性反應，因中性粒細胞中富含氧化物酶,

此時可將少許糞便用生理鹽水于試管中研成糊狀后，用酒精燈火焰煮沸2分鐘，以

破壞白細胞中的氧化物酶（或其它易熱性觸陶），冷卻后加一滴冰乙酸，再沼管壁徐

徐加入反應液（3%雙氧水及50g/L匹拉米洞各等量）后，觀察其接觸環(huán)，如仍

出現(xiàn)紫藍色為確有隱血存在。如不再出現(xiàn)，說明前次的結果為假陽性反應。

4.鐵劑能干擾試驗的結果，故試驗前3天應停服。

5、疑有消化道出血特別是消化道惡性腫瘤時，一次隱血試驗陰性不能否定診

斷，應至少連續(xù)檢查3天，每次從糞便不同部位馭材二次來作試驗，.如均為陰性

時，有利排除該診斷。

二隱血免疫學檢查法：

［原理］:膠體金標記的Hb單克隆抗體與糞便中的Hb形成金標抗原抗體復合

物，該復合物在通過包被有另一株抗Hb單克隆抗體的反應區(qū)帶時，與此Hb單抗

結合而出現(xiàn)紫紅色的陽性區(qū)帶。同時有一無關的金標小鼠IgG和羊抗鼠IgG區(qū)帶

做為陰性及質控對照，對檢查試帶是否有效。

［試劑］便隱血一步檢驗法拭劑盒(萬華普曼生物工程有限公司

⑵法］

1.打開采便容器的蓋子，取出連在蓋上的采便棒，以此棒在糞便標本的6個不

同部分取便，要求達到所馭的糞便全部覆蓋采便棒遠端螺旋狀槽溝。

2.將白蓋連同含糞便標本的采便棒放回采便容器內，將白蓋標擰緊，然后搖動

采便容器，使糞便溶于采便容器內的緩沖液呈均勻懸液狀.

3、將采便容器尖折斷，然后滴4滴懸液于反應板的樣品孔中，孔下為吸附有

膠體金標記的Hb單抗和膠體金標記的鼠IgG(陰性對照)的纖維素膜，待溶液向反

應區(qū)滲透，于5分鐘內判讀結果。

［結果分析］

1.在測試線(C)的反應線(T)同時出現(xiàn)紫紅色帶為便隱血陽性(測試線含有抗鼠

IgG,反應線含抗Hb單抗)。

2.僅在測試線出現(xiàn)紫紅區(qū)帶為便隱血陰性。

3、整個反應區(qū)均無色帶出現(xiàn)，說明試劑失效。

［注意事項］

1.雙抗體夾心法測定便隱血的敏感性為當血紅蛋白的濃度超過0.2mg/L或

0.03mg/g糞便時，就可得到陽性結果。該法特異性很好，各種動物血紅蛋白達

50()n里/L時對試驗無干擾，辣根過氧化物酶濃度達2g/L時亦無干擾。

2.由于方法敏感度高，而正常人腸道每天約有0.6ml的生理性失血，特別是當

服用對胃腸道有刺激的藥物時，在少數正常人也可能造成陽性結果，故要注意結

合臨床考慮。

3.間斷性出血或樣品馭材不當時可造成結果陰性。

4、免疫法便隱血試驗目前被認為是對大腸癌普查最適用的試驗因免疫學隱血

試驗主要檢測下消化道出血，故有部分上消化道已血不能檢出。其原因是血紅蛋白

或紅細B包經過消化酶降解變性或消化殆盡已不具有原來的免疫原性。

第三單元漿膜腔穿刺液與脊髓液檢查

一、漿膜腔穿刺液檢查

學習要求：了解漿膜腔穿刺液常規(guī)檢查的內容和檢查方法，掌握漏出液和滲

出液的性質及鑒別要點。

(一)一般性狀檢查

1.顏色常為深淺不同的黃色，漏出液色淺淡，滲出液色較黃。其他顏色：①

紅色見于結核病變、腫瘤或穿刺損傷；②乳酪色見于膿性滲出液，色黃而渾濁，含

大量壞死的膿細胞、脂肪滴、脂肪結晶、膽固靜結晶，甚至出現(xiàn)Charcot-Leyden

結晶體，見于結核、外傷、內臟穿孔、細菌感染，由化膿性細胞所引起者，液體濃

稠、色深、新鮮者可在涂片中找到細胞；結核多為稀薄，有流動性，混有干酪樣物

質，部分標本在涂片中可找到結核桿菌；放線菌病所致的膿性滲出液，也很濃稠,

呈黃色或黃綠色，常有惡臭，可找到特有的菌塊。③乳白色見于胸導管或乳糜管破

裂，呈乳汁樣，渾濁，日極細小的脂肪球構成,SudaniII染色陽性。見于因外傷、惡

性腫瘤，絲蟲病所致的漿膜腔積液。④綠色見于銅綠假單胞菌感染。

2、透明度漏出液多為透明清澈之液體；滲出液透明度降低，呈不同程度的

渾濁，視其中有形物體之多少而定。透明度按清晰、微混、渾濁等加以報告。

3.比密

［儀器］小比密計,100mL量筒，溫度計。

［方法］應于穿刺后即刻測定，方法與尿液比密檢查法相同。

［注意事項］

(1)穿刺液冷卻至20℃以下時，即可析出纖維蛋白而凝固，影響結果的正確性,

故應及時檢查。

（2）標本溫度影響比密，故在檢查比密前應先測標本溫度，按15℃時，每高3℃

增加比密0001；低于15℃時,每低3℃減少比密0.001。

［結果］漏出液比密在1.018以下，滲出液比密多在L018以上。

4.凝固漏出液不易凝固；滲出液中含纖維蛋白原、凝血因子III等故易凝固。

（二）化學檢查

1.Rivalta試驗

［原理］滲出液中漿膜粘蛋白增多，該蛋白屬于酸性糖蛋白，其等電點在

pH3—5之間，在酸性溶液中可形成白色沉淀。

［儀器和試劑］200mL量筒、滴管、冰乙酸。:

［方法］在200mL量筒中加蒸儲水200mL,加冰乙酸3—4滴，混勻靜置數分

鐘。用滴管吸取穿刺液靠近液面輕輕滴入試劑中，在黑色背景下觀察沉淀生成和

下沉情況。此試驗可按比例縮減試劑用量，在試管中進行.

［結果判斷］

陽性：穿刺液滴入后產生明顯的白色沉淀，?沉淀物下沉速度較快白色混濁物

的長度在20cm以上或到達量筒底部。

陰性：穿刺；夜滴入后無沉淀生成；或產生微量沉淀且未沉到筒底即消失者

為陰性反應。

［臨床意義］滲出液多呈陽性反應；漏出液多為陰性反應。

［注意事項］本試驗的特異性不高，一些處于吸收期的漏出液也可呈陽性反

應。肝硬化所致的腹水因球蛋白增多也呈陽性，但此種液體直接滴在蒸儲水中即

出沉淀，可資鑒別。

2.蛋白定量（同血漿蛋白定量）

［臨床意義］漏出液25—30g/L；滲出淮＞30/L

（三）顯微鏡檢查

1.細胞計數方法與腦脊髓液同。因穿刺液易于凝固，故應在標本抽出后即刻

檢杳。如不能立即檢查應加抗凝劑防凝（50mL穿刺液加106mmol/L枸椽酸鈉

3mL）o漏出液細胞較少,常＜100X106/L（100/ul）。滲出液細胞數較多常＞500X

106/Lo

2.細胞分類將抗凝的穿刺液混勻，取10mL置離心管中，以1.500—2.000r/

min速率離心沉淀5min,取沉淀物涂片,Wright法染色后鏡檢。除對血細胞分類外,

還應區(qū)分組織細胞、間皮細胞和癌細胞；對于腫瘤細胞還應作巴氏染色檢查。

3、細菌涂片檢查將標本離心后以沉淀物制成涂片，作Gram染色或抗酸染

色后鏡檢。臨床常見的細菌為大腸埃希氏菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、結核桿菌、

銅綠假單胞菌、放線菌、厭氧菌和炭疽桿菌等。

［注意事項］以上鑒別點并非是絕對的，即使是漏出液，因機械刺激（反復穿

刺）或毒性刺激也可使之呈滲出性特點；或者是滲出液病因，如病人處于惡液質狀

態(tài)，也可呈漏出液性狀。癌癥所致的積液，其特點更接近于滲出液。

二、腦脊髓液檢查

［要求］腦脊髓液檢查（examinationo