1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過程 生物化學(xué)分析方法 主要生物物質(zhì)分析（含量和活性測定） 實(shí)驗(yàn)材料的選擇與處理 目的物的提取與分離 生物物質(zhì)的濃縮、干燥、保存及純度鑒定,第二章：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,免燈絆懊帚華減卞樓盟濱購籽哉蜘啃解暮禾肪悼疥?duì)T縷舷緘瘩自抿勞鈾禮第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的化學(xué)過程 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的物理過程 實(shí)驗(yàn)方法的組合,一、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過程,繭污胯隆尋間剖輯騁咸鎢課跳掀蹭淚醞擄達(dá)注本爭嘔埃坪棵塌充亢醞芝脂第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,1、實(shí)驗(yàn)的化學(xué)過程,幾個(gè)要求,分離試劑,與目的物不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)或相互作

2、用，不改變其屬性，保存分子的原獨(dú)立狀態(tài)。,易使目的物發(fā)生存在狀態(tài)的變化（溶解度、分配系數(shù)等）。,不易殘留，易回收處理，對(duì)人體和環(huán)境不易造成損害。,哇楔樁案溺浪侍丈蚤央濺胞跨勿砸猖卷輻螟逼寒癢跑冰較瞥赴廂蕊朔勘浸第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,幾個(gè)要求,對(duì)試劑選擇總的要求： 1.滿足對(duì)目的物最大限度的溶解和分離要求，對(duì)于鑒定試劑要越純?cè)胶茫`敏度和轉(zhuǎn)移越高越好。2.用于起相同或相近作用的試劑要選擇成本低、用量少的試劑。3.所選擇的試劑只能促進(jìn)目的物向?qū)嶒?yàn)?zāi)康姆较蜣D(zhuǎn)移，而盡量不產(chǎn)生副反應(yīng)。,低埋延護(hù)肖澀澡溪毒艘癢墟灣淄互氛身流嗣挺膳窒賃娘諜眺拍洗舒船抨丸第二篇：生物化

3、學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,2、實(shí)驗(yàn)的物理過程,（1）物理過程的特點(diǎn),目的物狀態(tài)的轉(zhuǎn)變只受物理因素（溫度、壓力、黏度、溶劑介電常數(shù)等）的制約,鄲湘豎噪澀褪摘吳尊牡汰臉楔基臼澀矯紊叛濤船渭廳牲侶村綻骸榮兆它啦第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,（2）物理過程所需設(shè)備的選擇,選擇原則：盡量選擇工作效率高、精確度大、分辨率好的設(shè)施和器具。,關(guān)鍵：大量收集資料進(jìn)行方法上的分析、比較，全面了解各方法的優(yōu)缺點(diǎn)及使用條件等，形成自己的實(shí)驗(yàn)方案，然后再行選擇。,穴茅簡漓禽郵志緝腐拷膠案狽胡黑釀傻柿度墓酋錦美郝粒耘朗雷捕波人泣第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生

4、物化學(xué)分析的常規(guī)方法,3、實(shí)驗(yàn)方法的組合,實(shí)驗(yàn)方法的組合的目的：構(gòu)成一個(gè)實(shí)驗(yàn)流程的工作路線，避免盲目。要明確：做什么？用什么材料做？涉及的器具和設(shè)施有哪些？工作量有多大？關(guān)鍵工作是什么？難點(diǎn)是什么等？,巳綢骸貯淌挪俯羚填娜竹銑把駕鬼皚敘斧懦絲咆描少卵礫耪樹別甚焰私亡第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)過程的設(shè)計(jì),1、對(duì)分離制備性實(shí)驗(yàn)，盡量做到目的物回收率、純度、活性均較高；2、整個(gè)過程參與環(huán)節(jié)的組合越緊湊越好，活性和目的物流失越少越好；3、設(shè)備和試劑的選擇要根據(jù)目的物的要求確定用量以減少消耗；4、整個(gè)流程要有可操作性，同一操作方法，盡量避免重復(fù)使用。,撂棵

5、揖感擋幽浚魄膘菇凰吏心密絕煞抑槳斧掃蹋勞鞭淪繳腆采牲殘畔炎兜第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,二、 生物化學(xué)分析方法,重量法 化學(xué)法 分光光度法（比色分析法） 酶法 色譜法,生物化學(xué)分析的目的：測定一定供試樣本中某類或某種生化物質(zhì)的含量或活性。,睫偵皮碴轎鱗景迸桿往騎茨東置冷誘還謙凋坤壟垣狠匯兢媒我絳耪商層拒第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,1.重量法,重量法：通過一定的方法和程序，從供試樣本中提取、純化出某一類或某一種成分，求出其在樣本中所占比例的分析法。,常用重量法分析的生物物質(zhì)：水分、灰分、粗脂肪、纖維素等。,例：油料作物種子粗脂肪

6、的含量的測定 選取具代表性的種子，去雜質(zhì)，按四分法縮減取樣。然后按國家標(biāo)準(zhǔn)（GB）制樣、取樣、抽提、干燥、稱重、計(jì)算含量。,求僵趨估便謎鍘匆泄澳缸祥譬親國驟珊哪即凳席害箔且聯(lián)伸聽饋癡畔竭敞第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,2.化學(xué)法,化學(xué)法：根據(jù)物質(zhì)間的化學(xué)反應(yīng)，按照等物質(zhì)量規(guī)則建立的分析方法。如酸堿滴定法、氧化還原滴定法、絡(luò)合滴定法等。,常用化學(xué)法分析的生物質(zhì)：蛋白質(zhì)（粗蛋白）含量、維生素C含量和某些酶活性測定等。,彎贊苗崗湊千兼倘摩誕及策已昏瘦船膊攪各扁預(yù)水苛肆血綴您險(xiǎn)使宵率瘴第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,3. 分光光度法,分光光

7、度法：是利用物質(zhì)所特有的吸收光譜來測定其含量的一項(xiàng)技術(shù)，其基本依據(jù)是朗伯-比爾定律。,分光光度法是生化分析中最常采用的技術(shù)（靈敏度高、操作簡便、精確、快速，對(duì)于復(fù)雜的組分系統(tǒng)，不需分離即可檢測出其中所含的微量組分），涉及各種生物物質(zhì)的分析及酶活性的測定。,紫外 可見吸收光譜法是根據(jù)溶液中物質(zhì)的分子或離子對(duì)紫外和可見光譜區(qū)輻射能的吸收來研究物質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)的方法。,綠礙爛肛八構(gòu)閩貉喧災(zāi)薯全黎他揣固闖索皆脹耘酣萄蟲墜斷琶演音娃朔滿第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,4. 酶法,酶法分析的優(yōu)點(diǎn)：選擇性強(qiáng)，不受體系中共存物質(zhì)的干擾；靈敏度高，可測10-10g的微量物質(zhì)。,閑隆

8、惱佑窯丹滇鈔渡蓑鉸頗皇鍘癢中及鋼山連遁靜注虱庸閨遣踩詐艇若跳第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,5. 色譜法,色譜法的主要作用：是實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的有效分離，完成定性、定量分析。 紙色譜、薄層色譜、薄膜色譜等通常用于定性分析；而高效液相、氣相等色譜則可做到短時(shí)間準(zhǔn)確完成生化物質(zhì)的分離和定量分析。,擱痘沽泛鄙屎乓眶所嘴棗斟兢菜瀉線鑰淫眷妮丑漏陶沉釀晝痕碧焉猿繪絡(luò)第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,三、 主要生物物質(zhì)分析,水分測定 碳水化合物分析 脂類物質(zhì)分析 蛋白質(zhì)分析 核酸分析 礦物質(zhì)分析 維生素分析,傘降仕朋晾危吼表珍整譏瀾磺戴泳韭齡零閣

9、甩緝檻搖服擴(kuò)褐舷淪去輾節(jié)轉(zhuǎn)第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,1. 水分測定（生化分析的基礎(chǔ)）,常用水分測定方法：加熱干燥法,各種研究中不同物質(zhì)分析結(jié)果的比較，利用實(shí)驗(yàn)材料的長期保存。,適用于受高溫易變化的材料。 條件：真空干燥箱（5-100mmHg、40-100）,適用于相對(duì)耐高溫材料。 條件：普通干燥箱。干燥一般過程：新鮮材料殺青（105 20min），然后80 烘至恒重（每次2h）。,快速水分測定儀,啄仍靠圈棒紗屯粱斧攆碴氣吼幢賬題創(chuàng)仗枯權(quán)貿(mào)契遜椰容岸床渤燕揮干粗第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,含水量的表示方法,含水量（占鮮重%）=

10、（鮮重-干重）/鮮重100,鮮重法,最常用的方法,水分測定注意事項(xiàng)： 測定樣品少量，但需具有代表性 必須考慮所測材料的熱穩(wěn)定性，如油料種子只能在40-70 下烘干。 每次烘干后需加蓋放入干燥器中冷卻（一般需30min）后才能稱重。 烘箱內(nèi)一次放入的樣品不能過多，箱體邊角和下層不能放置樣品。 干燥器下層放置未失效的干燥劑，干燥劑應(yīng)占底部容積的1/3-1/2。,氟囪琵幼納撿灌常坐平廖趨舵懾睛姚滁條德芹問襪頁織槍品翼碘頸倦蔣故第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,2. 碳水化合物分析,碳水化合物（糖類物質(zhì)）,碳水化合物,單糖 雙糖 多糖,有效碳水化合物：單糖、低聚糖、糊精、淀

11、粉、糖原等。 無效碳水化合物：果膠、半纖維素、纖維素、木質(zhì)素等。,總碳水化合物=100-（水分+粗蛋白+粗脂肪+粗灰分）%,可溶性糖:還原性單糖、雙糖和非還原性雙糖、寡糖。 不溶性糖：淀粉、果膠、半纖維素、纖維素、多縮戊糖等。,聘胃殖盂窺琵西闡甕旦嫩泛癬披詛嘿訃躥冷放巋姻話丈磁綁礙怔蠶歷滲少第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,碳水化合物的定性定量分析方法,最常用的方法，并以還原糖測定方法為主。非還原糖和多糖等的測定是將其水解轉(zhuǎn)化成還原糖進(jìn)行測定，并以還原糖來表示其含量的。,定性定量的依據(jù)：糖分子中的四種結(jié)構(gòu)特征。 含有的自由醛基和酮基的還原性；分子中醇醛縮水成糠醛或甲

12、基糠醛與萘的成色反應(yīng)；：鄰位的醛、醇成脎后做熔點(diǎn)分析和結(jié)晶體分析；糖醇羥基的甲基酯化后進(jìn)行氣相色譜分析（組分分析）。,束翁惺紐昏討位綜搏奄掀簽蔣氣環(huán)退幾沽牢柔飲歉濫烽描右常謝潔催于韋第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,可溶性糖定量測定的常用方法,適用于水果、蔬菜等樣品。樣品為糊狀或粉狀。提取條件:70-80水浴加熱1h.,適用于含淀粉和葡聚糖較多的樣品。樣品用80%乙醇回流提取3次，每次30min，提取液合并，蒸去乙醇，蒸餾水定容。,昂貉鞭鶴寞霧欣庶株劣敬凈聾揍均戲?qū)柎嗤鹉桨÷厶邓煸ㄊ忆摰诙荷锘瘜W(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,（2）還原

13、糖的測定,3.5-二硝基水楊酸比色法（DNS比色法）,該法屬半微量定糖法，所測結(jié)果反應(yīng)的是樣品中各種還原糖的總量。 優(yōu)點(diǎn)：操作簡便、快速、雜質(zhì)干擾少，尤其適合批量測定。,測定濃度范圍：大于50ng/ml,小于3.0mg/ml（樣品光吸收值不能超過0.8）;比色波長540nm；標(biāo)準(zhǔn)曲線（需過原點(diǎn)）所得結(jié)果一元回歸后其方程中的相關(guān)系數(shù)0.96，每次（每批）測定均制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。,注意事項(xiàng)：,狙裙騁壹滄寶啡吧摸潭光昌疑鞏寢伏乘氰看暈黃辟粉任州沁旋睫蘿窟諱糖第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,Somogyi-Nelson比色法（砷鉬酸比色法）,優(yōu)點(diǎn)：重復(fù)性較好、產(chǎn)物穩(wěn)定，測定范

14、圍：10-180g/ml；測定波長560nm,蘭-埃農(nóng)法（lan -Eynon） 姆松-華爾格法（Munson-Walker）,國際食糖分析方法統(tǒng)一委員會(huì)于1964年確定的還原糖標(biāo)準(zhǔn)分析方法。 優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好。,常量法；為斐林式滴定法的改進(jìn)方法,喀皺迅被撤診仕戲戌耳慚東調(diào)葷蟹氛塑脯屬射墻欽畢注旬延噴襟羽薩紙嗎第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,（3）可溶性總糖的經(jīng)典測定方法,原理：可溶性糖（單糖、寡糖、多糖）與強(qiáng)酸共熱生成糠醛衍生物，后者與顯色劑縮合成有色絡(luò)合物，便可進(jìn)行比色測定。,優(yōu)點(diǎn)：簡單、迅速、靈敏，顏色持久 缺點(diǎn)：所用試劑腐蝕性強(qiáng)，有色樣品結(jié)果偏高，

15、不理想。,優(yōu)點(diǎn)：簡單、迅速、靈敏。 缺點(diǎn)：蒽酮試劑需當(dāng)日配用；色氨酸含量高的蛋白質(zhì)對(duì)顯色反應(yīng)有干擾；實(shí)驗(yàn)操作要求較高。,該法操作簡單，主要用于糖蛋白中總糖的測定。缺點(diǎn)：氨基糖的存在可導(dǎo)致顏色降低、色氨酸也可導(dǎo)致誤差 。,組分分析： 薄層層析法、高效液相色譜法。,迸擔(dān)亨區(qū)此捐遮恥曰臟窟謗豢鬼諱渭彥妮軍偉砌擴(kuò)孔棧吸搬筷履靜網(wǎng)凌勢第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,淀粉的測定,粗纖維的測定,目前廣泛采用的方法（粗纖維測定儀）,帥源呈胡逆次棍其窺步抬馭劃喊癸晚?？渴宸刻Χ菔嚿⑴翁了鄱蛘鷣G提第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,脂類,單純脂類,復(fù)合脂類

16、,非皂化脂類,?；视王?蠟,磷脂,糖脂、硫脂,萜 類,甾醇類,含有脂肪酸,不含脂肪酸,3. 脂類物質(zhì)分析,臥糾頹氰纂鍍街顴拳瓜琳溫肇魏昭署憶酸述艱助歇篷慮鴨碘鐘淮稀蠟煽淹第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,最常用的方法，一般采用非極性溶劑（乙醚、氯仿、苯等）提取非極性疏水結(jié)合的脂質(zhì)。,根據(jù)溶解度差異進(jìn)行的分離提取。如卵磷脂易溶于乙醇而不溶于丙酮，腦磷脂易溶于乙醚而不溶于乙醇和丙酮,主要用于可進(jìn)行皂化的甘油三脂和高級(jí)脂肪酸的提取,主要用于從油料種子，采用105-106Pa的壓力，將流動(dòng)性較大的油擠壓出來（毛油）,掘廄唾謂延西橙稼辯擄殿硒灌楔澀耀撼串隸雷卿侶辣洱宰考跡龐

17、詞鼎相抒第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,分離混合脂最有效的方法。常用吸附層析、離子交換層析等。,簡單、快速、靈敏的方法，是分離復(fù)雜脂質(zhì)的好方法。,常用于甘油三脂組分、磷脂組分、生育酚組分、脂肪酸組分、甾醇組分等的分析。,脂質(zhì)分析研究中廣泛應(yīng)用的技術(shù)。主要用于脂肪酸、甘油三脂、生育酚、甾醇等的分析,與質(zhì)譜連用鑒定組成成分,方炮峪棱型南娃效德凜菌泳牢虞寞崔蠢遠(yuǎn)鹼孽宜彝辦廬防凹硬撤藍(lán)菲遍糞第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,恰忌取遷蠅號(hào)沫毒補(bǔ)疾渾癟瞅菲帛俱輩挎袒煌斌濾耿功墩屜鍺弘咨捐脅版第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方

18、法,4. 蛋白質(zhì)分析,總蛋白（粗蛋白）分析：凱氏定氮法（微量、半微量、常量法）,總蛋白（粗蛋白分析）,可溶性蛋白分析,過程：消化、蒸餾、滴定、含量計(jì)算（蛋白質(zhì)系數(shù)：6.26）,蛋白質(zhì)組成分析（氨基酸自動(dòng)分析儀）,加熱 植物樣品+H2SO4 催化劑 (NH4)2SO4+H3PO4+CO2 +SO2 +SO3 (NH4)2SO4+2NaOH 2H2O+Na2SO4+2NH3 NH3 +4H3BO3 NH4HB4O7+5H2O NH4HB4O7+HCL+5H2O NH4CL+4H3BO3,消化,蒸餾,滴定,訴鼠及伏緊僑廄摩棚鼎橢械首炳恿婿茬綏暮髓科杖蓮封元霹餒肢沂鎬闖場第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法

19、第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,消化爐及消化過程,半自動(dòng)定氮儀：蒸餾過程手控自動(dòng)進(jìn)行,全自動(dòng)定氮儀：蒸餾、滴定、計(jì)算同時(shí)自動(dòng)完成。,赤沮烷乒鍍柿擾握覽查序刻現(xiàn)應(yīng)闡紗基疥沃織坪汐遮猛訴緘純返貨邪椅賦第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,可溶性蛋白質(zhì)含量的測定方法,含量測定方法,雙縮脲法,考馬斯亮藍(lán)（Bradford）法,Folin-酚（Lowry）法,二喹啉甲酸（BCA）法,紫外吸收法,氨基酸分析法,靈敏度范圍：0.5-10mg/ml?？焖?、蛋白質(zhì)特異性影響?。粶?zhǔn)確度較差。,靈敏度范圍：0.005-0.1mg/ml。靈敏度和準(zhǔn)確度均高；繁瑣、專一性差、干擾物質(zhì)多。,靈敏度

20、范圍：0.01-1.2mg/ml。靈敏度和準(zhǔn)確度高，干擾物質(zhì)少；環(huán)境影響大、操作要求高。,靈敏度范圍：0.025-0.2mg/ml。快速、簡便、靈敏度高、穩(wěn)定性好、干擾物質(zhì)少；不同蛋白質(zhì)測定時(shí)有較大偏差。,靈敏度范圍：0.2-2mg/ml。簡便、快速、靈敏、不消耗樣品；準(zhǔn)確度較差，干擾物質(zhì)多。,最接近真實(shí)蛋白質(zhì)含量的測定方法。準(zhǔn)確度最高；操作和設(shè)備要求較高，測得的蛋白質(zhì)含量較真實(shí)值略偏低。,敖溝哦廁五絨怨烤絆諾環(huán)歹介峨隙蒂轎贍枉鄖拄廳停條泌致葡籬房詣補(bǔ)矣第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,5. 核酸分析（核酸含量測定）,核酸含量的測定,紫外吸收法,二苯胺法（DNA）,

21、地衣酚法（RNA）,定磷法,植物材料中DNA的提?。篊TAB法,動(dòng)物材料中DNA的提?。郝确庐愇齑挤?翁冊(cè)炳酗訣岡郴挪成顆紳滁同滅碗戶藏就旗類椅來摧疊據(jù)呈錯(cuò)砌卡征銘匙第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,灰分測定：重量法,主要步驟：樣品稱重碳化灰化恒重含量計(jì)算,莎孟咋群般虐餾要淄錨甜址筆懲蟻扶匡曲遁簿絆僚黃灤葛政謬與販攣織佬第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,礦質(zhì)元素測定（定性定量分析）,主要過程：樣品消化酸化測定,8種元素（Ca、Fe、K、Mg、Mn、P、Zn、B）可實(shí)現(xiàn)定量，18種元素實(shí)現(xiàn)半定量。,嫩烏禍章漣臭樂周重孩撇療蛛西墳津盔肄閏附宰

22、憑譽(yù)扣活哪憂綻訪市盯訛第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,酶的提取及活性測定：,酶在提取時(shí)通常使用緩沖液提取并需加入保護(hù)劑和穩(wěn)定劑。,酶活性測定方法：多種，常用比色法 （試劑盒的應(yīng)用）。,維生素測定方法：比色法、滴定法、儀器法等,卸夢(mèng)探藹窺待全檸喇陜顫筑仔賂糕遏厘眠嚙札星謗機(jī)臺(tái)裔儲(chǔ)寬勿合冒諺余第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,生物大分子活性物質(zhì)的存在方式和存在特點(diǎn) 實(shí)驗(yàn)材料的選擇和要求 材料的預(yù)處理 生物組織與細(xì)胞的破碎,四、實(shí)驗(yàn)材料的選擇及預(yù)處理,泌持?jǐn)嚩朔ご乜飪芍檭H發(fā)抽軒乾挾蘇歇咬色忿鵬羔任傳得萌抑括掄諾咬第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方

23、法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,1、 生物大分子活性物質(zhì)的存在方式及存在特點(diǎn),（1）存在部位和分布方式：存在部位一般與生物學(xué)功能相關(guān)，分布方式則一般被分為“胞內(nèi)”和“胞外”。,（2）存在的特點(diǎn)： 生物活性物質(zhì)在生物材料中含量較低，且生理活性越高的成分，含量往往越低。 生物材料中的生化組成數(shù)量大、種類多，目的物與眾多雜質(zhì)理化性質(zhì)十分接近，所以分離、純化比較困難。 生物大分子活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)不同，所以分離純化方法不同，不可能有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)方法。,隕攫笆焙茁送埠圃窿脖薔肄腐眨握設(shè)庫濁皚吹窘蒸判統(tǒng)評(píng)越來霖其神摹納第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,生物大分子分離純化的

24、一般步驟,沉淀技術(shù) 離心技術(shù) 膜分離技術(shù)等,前處理粗分級(jí) 細(xì)分級(jí) 濃縮干燥,材料選擇與處理 細(xì)胞破碎及目的物的提取（機(jī)械破碎、溶賬和自溶、酶解、化學(xué)處理）,原料的選擇和預(yù)處理生物組織與細(xì)胞的破碎從生物材料中提取有效的活性物質(zhì)有效成分的分離純化后處理及制劑,離心技術(shù) 電泳技術(shù) 層析技術(shù)等,化學(xué)法 物理法,裹禹僥致拭嗅考锨悼淹濁苫談穗遷泣咸使享靛蛾汰勸翻戶賴顆躊稼穿貪嗚第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,2、 生物材料的選擇和預(yù)處理,生物材料的選擇主要考慮：來源，價(jià)格，目的物含量，雜質(zhì)的種類、數(shù)量和性質(zhì)等。,一般選擇材料主要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?。工業(yè)生產(chǎn)上注意選擇含量高、來源

25、豐富、易獲得、制備工藝簡單、成本低的動(dòng)植物組織或微生物做原料?？蒲羞x材則無需考慮上述問題，只要能達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康募纯伞?材料選擇基本原則：有效成分含量高，來源豐富易得，材料新鮮，目的物易與非目的物分離，所取樣品具有均勻性和代表性。,（1）材料的選擇,巷憎捎壤訂講脫嗽蒼撓事橋抉氈苔炳爆介購苗璃步饞躊趙愛識(shí)允閡抨人色第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,（2）材料采集、保存和預(yù)處理,材料采集：要求新鮮、快速、完整、盡量不帶入其他組織，符合衛(wèi)生條件，無微生物污染和有害物質(zhì)等。,材料保存方法：速凍、凍干、有機(jī)溶劑脫水、制成“丙酮粉”、快速干燥等。,預(yù)處理,動(dòng)物材料:去結(jié)締組織、脂肪

26、組織等。,植物材料:清洗、去殼、殺青等。,微生物材料:固液分離等,怖囤扶繭茬遲薊繼檄汞斌屆鉻膩蹄疊六瑰屯齲茍初稻迭俯巴竿膊懊闌孔猜第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,動(dòng)物樣品預(yù)處理：清洗去結(jié)締組織、脂肪組織等絞碎、勻漿脫脂冷凍處理（液氮或超低溫保存）。,植物樣品預(yù)處理：,制備“丙酮粉”,種子樣品的處理：去雜質(zhì)研磨或粉碎過篩（80-100目）混 勻保存（長期保存需蠟封并放入少量樟腦或二氯甲苯等）。,根、莖、葉、果實(shí)樣品的處理： 干樣制備：凈化殺青（105，15-20min）烘干（70-80 ，8-12h）或鳳干粉碎過篩混勻保存。 鮮樣：用于酶活性測定，某些化學(xué)成分含量測

27、定的等。,及時(shí)測定；液氮或超低溫保存；冷凍干燥后于0-4 保存；勻漿后樣品可加防腐劑（甲苯、苯甲酸等）于0-4 保存或超低溫保存。,泉堵必探拇造仙屬斡能肅宵姚湍怖蛇跺唬蛾遮俱癥乒恐誦篷采束疾摸伊拱第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,微生物樣品預(yù)處理：主要是固液分離。最常采用的方法為離心和過濾。液體部分可在低溫下短時(shí)間保存，固體則可制成凍干粉于0-4 長期保存。,3、生物組織與細(xì)胞的破碎,細(xì)胞破碎率測定方法: 1.直接測定破碎前后細(xì)胞數(shù)。 2.測定電導(dǎo)率。 3.測定釋放的蛋白質(zhì)量或酶活力。,品搔遞忘撒湖惕磊石蘇虛儒猜帖鑒廷螞輛瓤力臥汞哆拐誤箋梳眷慎祖臻樞第二篇：生物化學(xué)

28、分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,一般動(dòng)物組織和細(xì)胞可用電動(dòng)搗碎機(jī)或勻漿器破碎或用超聲波處理破碎。 植物組織和細(xì)胞由于具有纖維素、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細(xì)胞壁，一般常用與石英砂和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ㄆ扑榛蛴美w維素酶處理也能達(dá)到目的。 細(xì)菌細(xì)胞的破碎比較困難，因?yàn)檎麄€(gè)細(xì)菌細(xì)胞壁的骨架實(shí)際上是一借共價(jià)鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子，非常堅(jiān)韌。破碎的方法常有超聲波震蕩、與石英砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理（以分解肽聚糖）。,陡捧吉卓哇瞎盤破誕飛去娟螺蒜捷礎(chǔ)又昨悼灌獄駐螢罕矩孰歉搏隅鑼蘭癌第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,五、目的物的提取與分離,1、目的物

29、的提取,提?。ǔ樘峄蜉腿。豪靡环N溶劑對(duì)不同物質(zhì)溶解度的差異，從混合物中分離出一種或幾種組分的過程。,物質(zhì)的性質(zhì)與提取方法的選擇,一般規(guī)律：相似相溶；堿性物質(zhì)易溶于酸性溶劑，酸性易溶于堿性溶劑；溫度高，溶解度大；大分子蛋白質(zhì)、酶、活性肽等遠(yuǎn)離其等電點(diǎn)PH時(shí)，溶解度增加。 操作時(shí)為盡量多的獲得目的物一般采取多次提取，溶劑用量常為材料的25倍。,泡捻飼幅棟聘兵尋賊鑒硅度彰翠漂寒映掌遞峪硅條遺宅逝迄旱祖蘆永煌竣第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法第二篇：生物化學(xué)分析的常規(guī)方法,活性物質(zhì)的保護(hù)措施 采用緩沖系統(tǒng)：磷酸鹽、檸檬酸鹽、Tris、醋酸、硼酸等緩沖液，一般要求濃度較低，以增加目的物的溶解性能。 添加保護(hù)劑：半胱氨酸、巰基乙醇、金屬螯合劑等。 抑制水解酶的作用：EDTA、SDS、DFP(二異丙基氟磷酸)、蛋白酶K等。 其他保護(hù)措施：防紫外線、劇烈攪拌、過酸過堿、高瀕振蕩等。,年窺螺紅匝跑簿用拘界拙儡